获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2...

获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A.①③ B.①④

C.②③ D.②④

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获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A. ①③　　 B. ①④

C. ②③　　 D. ②④

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下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，请回答：

（1）构建表达载体选择限制性核酸内切酶时，要求Ti质粒内每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点，同时要求酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同，这个过程需用______种限制酶，目的是___________。除草剂抗性基因G和Ti质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是________________________

（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带_______________插入受体细胞的核DNA。若核DNA中仅插入一个G基因，自交后代含G基因的植株中，纯合子占________________。

（3）获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含_______________的选择培养基，使用含_______________的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。

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在基因工程的操作中，为了防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是　　

①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，质粒形成的两个黏性末端序列相同

A. ①③ B. ①④ C. ②③ D. ②④

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玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。

Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是____（单选）。

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A．①③　　　　　　　 B．①④　　　　　 C．②③　　　　 D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是____________，自交系__________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含_____________________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_______________（多选）。

A．无农杆菌附着的未转化愈伤组织　　

B．无农杆菌附着的转化愈伤组织

C．农杆菌附着的未转化愈伤组织　　　

D．农杆菌附着的转化愈伤组织

（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占_____________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系A。

（6）下表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含G基因植株的比例，从小到大依次是_____________________________________。

II．通过回交使自交系B获得抗除草剂性状

（7）抗除草剂自交系A（GG）与自交系B杂交产生F1，然后进行多轮回交（下图）。自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代______________。

对Hn继续筛选，最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系。

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科学家采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以通过乳腺生物反应器生产人—抗胰蛋白酶，其技术路线如图：

回答下列问题：

（1）基因表达载体应当包括______，构建基因表达载体常用的酶是______，常用载体有________。

（2）核移植的受体应选用______期卵母细胞，之后通过______（写出一种具体方法）激活受体细胞使其完成细胞分裂和发育进程。

（3）进行胚胎移植时，胚胎应发育到______阶段，移植的方法有______。为一次性获得多个体，可使用胚胎分割技术，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意________。

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转基因抗虫棉是人们应用较早的基因工程推广项目，目前转基因技术有了新的改进，如图所示，请根据所学知识回答：

（1）构建相关的目的基因表达载体时，应该选择的限制酶是　　 ；如图，切割目的基因两侧序列和载体时用两种限制酶，相较使用同种限制酶而言，其优点是，在目的基因两侧和载体切口处可能形成不同的　　　 ，不但可以防止切割下的基因和切开的载体分别发生　　　　 ，还可以避免前者在插入载体切口处时产生与表达载体转录方向　　　　　 （填“相同”或“相反”）的连接。

（2）若目的基因最终整合到染色休上，则从棉株1、2、3中各随机取出一个叶肉细胞，其细胞核中含有的目的基因个数分别为　　 个。

（3）④过程通常采用　　 处理使染色体数恢复。取棉株2的两个体细胞融合也能得到符合生产要求的棉株3，其原理为　　 和　　 。

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下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。有关叙述错误的是(　 )

A.基因表达载体构建过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶

B.图中愈伤组织分化产生的再生植株基因型一般都相同

C.卡那霉素抗性基因中含有相关限制性核酸内切酶的识别位点

D.转基因抗虫棉有性生殖的后代不能稳定保持抗虫性状

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下图是培育抗除草剂玉米的技术路线图，含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。下列相关叙述不正确的是（ ）

A. 过程①用两种限制酶就可防止酶切产物自身环化

B. 过程②用Na+处理可提高转化成功率

C. 过程③应在培养基中加入除草剂和物质K

D. 筛选得到的A是无农杆菌附着的转化愈伤组织

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下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。有关叙述错误的是

A．基因表达载体构建过程中蒲要限制酶和DNA连接酶

B．图中愈伤组织分化产生的再生植株的基因型一般都相同

C．卡那霉素抗性基因中含有相关限制酶的识别和切割位点

D．转基因抗虫棉有性生殖产生的部分后代不能稳定保持抗虫性状

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