微生物作为生物反应器具有诸多优点，但也存在生产过程易染菌、大量消耗淡水等缺点。科学家计划从...

微生物作为生物反应器具有诸多优点，但也存在生产过程易染菌、大量消耗淡水等缺点。科学家计划从自然环境中筛选耐高温、耐盐碱的微生物菌株来解决这些缺点。

（1）_______________________，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。传统生物制造利用微生物生产产品时，需要对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行___________，对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行_______________________。

（2）科学家应在__________________的环境条件下筛选目的菌株。将相应环境中取得的样液利用_________________法接种到培养基中，以获得单菌落用于进一步分离纯化。

（3）要扩大目的菌株的数量，可挑选上述单菌落，接种到培养液中进行选择培养。要测定培养液中微生物的菌体数，可在显微镜下用___________________直接计数。若要测定其活菌数量，可选用_______________________法进行计数。

（4）用筛选得到的耐高温、耐盐碱菌种作为生物反应器，生产过程不易染菌，原因是_____________________________________。

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科学家从冷泉中筛选到了热泉中存在的微生物，而在热泉中却未能筛选到冷泉中存在的微生物。下列解释不合理的是（　　 ）

A.适应冷泉环境的微生物含耐低温的酶

B.适应热泉环境的微生物含耐高温的酶

C.冷泉因低温破坏了热泉微生物的结构

D.热泉因高温破坏了冷泉微生物的结构

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生产中为防治病虫害而大量使用农药，使农产品以及农业生态环境中农药残留严重超标。针对该现状，我国科学家经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术。通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物。其中有机磷降解菌降解甲基对硫磷（一种含氮有机农药）的效果达100%。

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以____________为唯一氮源的固体培养基上。

（2）获得纯净培养物的关键是________________________，接种前通常应将培养皿进行_______　　　　　　 灭菌，培养基进行__________　　　　　　　　　　　 灭菌。

（3）纯化菌种时，整个操作过程都应在___________　　　　　　　　 附近进行。

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应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白具有生产方式简单产量大、蛋白能进行翻译后修饰等优点，是具有广阔前景的生物医药产业。回答以下相关问题：

（1）科学家应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白，需将___________与___________等调控组件重组在一起，通过______________________等方法，导入哺乳动物的___________中，进而获得转基因动物，再从转基因动物的乳汁中获取药物蛋白。

（2）转基因动物乳腺生物反应器的鉴定

第一步：DNA水平的检测判明是否为转基因动物，使用的___________须非常特异，要根据启动子调控序列和目的基因序列精心设计。

第二步：RNA水平的检测目的是鉴定___________情况。

第三步：目的蛋白的检测可采用___________技术，依据的原理是______________________。

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重组人纤溶酶原激活剂（rhPA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品。家兔具有多胎、妊娠期短、繁殖快、全年多发情，产仔率高等优点，可以作为乳腺生物反应器批量生产药物。下图是利用转基因兔生产重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的过程，请据图回答。

（1）构建rhPA基因表达载体需要用限制酶_________切割质粒和目的基因，为获得乳腺特异性表达载体需用_____________酶切割重组质粒使之线性化。

（2）对母兔注射_________使其超速排卵，并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导人家兔受精卵中最有效的导入技术是____________。

（3）将受精卵置于37℃的_______________气体环境中培养一段时间后移植到代孕兔的输卵管中，代孕兔需经___________处理。

（4）子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人组织纤溶酶原激活剂的生物反应器，原因有____________、____________。

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真核细胞内囊泡运输与S基因密切相关，科学家筛选了酵母菌S基因突变体，与野生型酵母菌对照，发现其内质网形成的囊泡在细胞内大量积累。下面有关分析正确的是

A. 囊泡的形成过程体现了生物膜具有选择透过性

B. S基因编码的蛋白质参与了囊泡与高尔基体的融合过程

C. 磷脂分子和蛋白质分子是构成囊泡膜的基本骨架

D. 囊泡中包裹的物质只能运输到细胞外

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真核细胞内囊泡运输与S基因密切相关，科学家筛选的酵母菌S基因突变体，与野生型酵母菌对照，发现其内质网形成的囊泡在细胞内大量积累。下面有关分析正确的是

A. 囊泡的形成过程体现了生物膜具有选择透过性

B. S基因编码的蛋白质参与了囊泡与高尔基体的融合过程

C. 磷脂分子和蛋白质分子是构成囊泡膜的基本骨架

D. 囊泡中包裹的物质只能运输到细胞外

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运用转基因技术培养的单细胞“工程硅藻”，可把光合作用合成的有机物以脂质形式储存起来。科学家计划在海水中大量培养“工程硅藻”，捕捞后从中提炼“生物柴油”。与矿物柴油相比，使用这种“生物柴油”的优点是（   ）。

①可再生  ② 不显著增加碳排放 ③不排放含硫废气 ④ 不会对生态环境造成负面影响

A．①②③         B．①③④        C．①②④          D．②③④

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生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图1）。

1、筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供________，培养基灭菌采用的最适方法是 ________法。

2、图2是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是________，图B效果的接种方法是________。

3、若需人工大量克隆脂肪酶基因，可应用____________技术，该过程需要的特殊酶是________。

4、常用血球计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）分两类，一类是每个计数室包括16个中格，每个中格包括25个小格，这种计数板抽样计数时只要统计四个顶角的中格即可；另一类是是每个计数室包括25个中格，每个中格包括16个小格，这种计数板抽样计数时除了统计四个顶角的中格外还要计数中央的一个中格。在实验中如需定期测定培养液中微生物M的细胞数量，则在取出的样液中要立即加入固定液，其目的是________。如果将样液稀释100倍，采用血球计数板计数时，观察到的计数室中细胞分布如图2所示，则培养液中微生物M的 细胞密度为________个/L.

5、研究人员拟将某目的基因导入微生物M 细胞中，为此需要选择合适的质粒作为运载体。下图所示X－1、X－2、X－3、X－4为四种相关质粒，其中Tc^r表示抗四环素的抗性基因，Ap^r表示青霉素抗性基因，E1和E2表示两种限制酶的识别位点。基因工程中限制酶作用的化学键是________。若将这四种质粒分别导入微生物M，然后将微生物M菌液分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上培养。则在这两种培养基上均不能生长的M细胞类型有________________。

6、已知Tc^r长度为1.5kb(1kb=1000个碱基对)，Ap^r长度为0.5kb。如果X－1用E1酶切，产生0.5kb碱基片段和8.5 kb碱基片段,那么质粒X－2用E2酶切后的片段长度为_____________对碱基

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科学家在深海火山周围的热泉(与地球上早期生命所处的环境类似）中发现大量的硫细菌，从中筛选出能高效产生高温蛋白酶的硫细菌SM06,它通过氧化硫化物过程中释放的能量来同化二氧化碳并进行生长，其筛选过程如下图所示。请回答下列问题：

（1）硫细菌SM06的代谢类型为____________(填“光能自养型”或“化能自养型”）；其细胞结构中具有_____________(填细胞器名称）。

（2）为获得单菌落，可采用___________法接种。一般对配制的培养基采用高压灭菌，目的是________。

（3）接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基培养一段时间，这样做是为了_____________。

（4）获得的菌种若要临时保藏,可将菌种接种到试管的____________培养基上.在合适的温度下培养后放入4℃的冰箱中保藏；若要长期保存，可以采用__________的方法。

（5）研究热泉生态系统的意义有:___________________(写出两点即可）。

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