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番茄红素具有一定的抗癌效果。普通番茄合成的番茄红素易在番茄红素环化酶的催化作用下转化。科学家利用基因工程设计的重组DNA（质粒三）能表达出双链RNA（发卡），番茄细胞可识别双链RNA并将该双链RNA和具有相同序列的单链RNA一起降解，从而阻止番茄红素的转化，提高番茄红素的产量。下图为利用质粒一和目的基因构建重组质粒三的过程示意图。请回答下列问题：
（1）该基因工程中，“目的基因”是______基因，要想对该目的基因进行体外扩增，可从番茄组织中提取mRNA，通过逆转录获得______用于PCR扩增。PCR扩增目的基因，需要设计相应的引物，设计引物时要避免引物之间出现______。
（2）PCR扩增时，DNA先在高温下解链，然后在温度缓慢下降的过程中，引物与解开的链结合，这个过程叫做退火。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。长度相同但______的引物需要设定更高的退火温度。
（3）“质粒二”利用______开环。为了防止其自身环化，要去除开环的质粒两端的______个磷酸基团。
（4）构建质粒三时，最好在目的基因A、B两端分别加______识别序列，目的是______。
（5）对于培育成功的转基因番茄植株，“发卡”在细胞内可以阻止______过程，从而使番茄红素环化酶基因“沉默”。
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普通番茄细胞中有多聚半乳糖醛酸酶基因（PG基因），可产生多聚半乳糖醛酸酶（PG），该酶能破坏细胞壁．番茄果实细胞中，PG合成显著增加，使番茄软化，不耐贮藏．科学家们利用基因工程技术在普通番茄中转入PG基因的反义基因抑制PG基因的表达，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种，过程如图
（1）过程①表示转录过程，发生在番茄细胞的 ______ （场所）中，过程②所需要的原料是 ______ 。
（2）过程③形成重组质粒需要的工具酶有 ______ ，Ti质粒上必须含有 ______ ，以便检测农杆菌细胞中是否导入了 含反义基因的重组质粒 。
（3）过程⑥中运用的技术手段是 ______ 技术．其中，愈伤组织要经过 ______ 过程最终形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 ______ 。
（4）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与 含反义基因的重组质粒 互补结合，直接阻碍了PG合成时的翻译过程，抑制PG基因的正常表达．最终使番茄番茄获得抗软化的性状．若 ____________（性状） ，则可确定转基因番茄培育成功。
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（10分）根据材料回答问题：
普通番茄中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制多聚半乳糖醛酸酶的合成，该酶能够破坏细胞壁，使番茄软化而不易储藏，科学家通过基因工程的方法，将一种抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，获得了抗软化番茄，保鲜时间长，口味也更好。主要机理是采用了相应的技术，使相关基因保持沉默。如上图所示：
（1）基因工程实施的第一步是获得目的基因，在本例中的目的基因是_______________。
第二步，____________________，需要用到的工具酶是_______________，在这一步工作中，通常用_______________作为基因的载体。第三步是_______________。
（2）图中①过程的进行要以_______________为原料。图中②过程的进行要以____________为原料，进行的场所是_______________。
（3）抗多聚半乳糖醛酸酶基因能抗番茄软化的机理是：抗多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA与多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA互补配对形成双链RNA，使后者不能在核糖体上完成_____________过程，阻止了_______________的合成。
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现代生物技术在动植物育种工作中均发挥了巨大的作用。
（1）番茄的软化易熟，是因为多聚半乳糖醛酸酶的作用。科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。操作流程如下图，请回答：
①重组DNA的构建需要的工具酶有________和________。
②在基因工程步骤中，最主要的一步是 ________，在这过程中除了要在重组DNA中插入目的基因外，还需要有__ 。
③从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了________无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。
④普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，经________后得到________，再转接到分化培养基________，诱导出________，然后进一步培养成正常植株。
⑤科学家要得到番茄—马铃薯杂种植株，要采用________ 技术。
（2）下图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程。请回答下列问题：
①A细胞是________，在进行体外受精前要对精子进行________处理。
②进行胚胎分割时，应选择发育到________时期的胚进行操作。
③通过胚胎分割产生的两个或多个个体共有的特点是________。
④在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意________
。
⑤为了使供体超数排卵和其胚胎在供体和受体的子宫内具有相同的生理环境，应对供体和受体同时注射________激素，让两者________。
⑥受体母牛必须和供体牛属于________。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是________。
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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培养转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是
A. 可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因
B. 利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞
C. 利用选择性培养基对构建的基因表达载体直接筛选
D. 在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄植株
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在下列选项中，用到植物组织培养技术的是
A.用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到多倍体植物
B.花药离体培养得到单倍体植物
C.将含有抗卡那霉素基因的重组DNA转入烟草细胞
D.利用细胞工程培育“番茄-马铃薯”杂种植物
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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟
中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少
PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到
番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：
（1） 提取目的基因：①若已获取PG的mRNA，
可通过获取PG基因。
②在该基因上游加结构A可确保基因的反向
转录，结构A上应具有的结合
位点。得到的目的基因两侧需人工合成
BamHI黏性末端。
已知BamHI的识别序列如图甲所示，请在图乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，除营养物质外还需在培养基中加入。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生现象，鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄，则可确定转基因番茄成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用________技术，使子代保持转基因的优良性状。
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多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：
(1)若已获取PG的mRNA，可通过_____方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_____，以便根据这一序列合成引物。
(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和_____。
(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_____的培养基进行筛选。如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞_____现象进行判断。
(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_____互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长。
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番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家通过基因工程将一种抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，获得了抗软化番茄。下列关于培育抗软化番茄的叙述中，错误的是
A．运载工具是质粒 B．受体细胞是番茄细胞
C．目的基因为多聚半乳糖醛酸酶基因 D．目的基因的表达延缓了细胞的软化
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番茄果实中含丰富的番茄红素，对人体防治肿瘤、心血管疾病以及延缓衰老具有一定作用。
（1）科学家为构建高产番茄红素的酵母细胞应用了转基因技术，其核心步骤是_______________。如下图所示其部分模式图，位点1、2、3、4对应的限制酶分别是PacⅠ、SexAⅠ、AscⅠ、PmeⅠ，则获取目的基因使用的限制酶是________________________；PacⅠ能否切割位点2？____________；为什么？________。
（2）为确定目的基因己导入番茄细胞中，常用 _______________技术进行检测，最后再进行个体水平的鉴定。
（3）科学家运用____________技术培育出了“番茄一马铃薯”杂种植株，但并没有获得预期的性状，主要原因是___________________。
（4）转基因技术和植物体细胞杂交技术在育种上具有的共同意义是____________________。