请回答基因工程相关问题：（1）限制酶切割DNA分子时，断裂的是___________键｡为...

请回答基因工程相关问题：

（1）限制酶切割DNA分子时，断裂的是___________键｡为了保证目的基因与载体的正确连接，通常用两种_________________________________不同的限制酶同时处理含目的基因的DNA片段与载体｡

（2）若要通过反转录得到胰岛素基因，可从人体的___________细胞中提取mRNA｡提取mRNA时，在提取液中一般要加入RNA酶抑制剂，其目的是______________________｡若要在体外得到大量胰岛素基因，可采用______________________技术，该技术过程中设计引物时______________________（填“需要”或“不需要”）知道胰岛素基因的全部序列｡

（3）将重组质粒转化大肠杆菌时，大肠杆菌本身___________（填“含有”或“不含有”）质粒｡一般情况下不能用未经处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________________。

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下列有关基因工程和酶的相关叙述，正确的是

A．同种限制酶既可以切割目的基因又可以切割质粒，因此不具备专一性

B．运载体的化学本质与载体蛋白相同

C．限制酶不能切割烟草花叶病毒的核酸

D．DNA连接酶可催化脱氧核苷酸链间形成氢键

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（15分）回答有关基因工程的问题：

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生　　　　 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生　　　　　　　　 （相同，不同）粘性末端的限制酶。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用　　　　　 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为　　　　　　　　　　　　 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成　　　　　　　　　　 _，常用抗原-抗体杂交技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的　　　　　　 _中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的　　　　　　　　　 _上。

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回答下列有关现代生物科技方面的问题：

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，一般选择能使二者产生___________(相同、不同)黏性末端的限制酶。

（2）在精卵结合过程中，防止多精入卵的第二道屏障称做：　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）生态经济：使一个系统产出的污染物，能够成为本系统或另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化。“无废弃物农业”体现了生态工程　　　　　　　　　　　　　　　　 原理。

（4）若要获取转基因植物人工种子，需培养到_______________阶段，再进行人工种皮的包裹；如用植物细胞实现目的基因所表达的蛋白质类药物的工厂化生产，培养到_______________阶段即可。

（5）动物克隆技术：目前动物的克隆主要采用__________________技术来实现，我国禁止生殖性克隆，但不反对________________的研究。

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回答下列有关现代生物科技方面的问题：

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，一般选择能使二者产生___________(相同、不同)黏性末端的限制酶。

（2）在精卵结合过程中，防止多精入卵的第二道屏障称做：　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）生态经济：使一个系统产出的污染物，能够成为本系统或另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化。“无废弃物农业”体现了生态工程　　　　　　　　　　　　　　　　　 原理。

（4）若要获取转基因植物人工种子，需培养到_______________阶段，再进行人工种皮的包裹；如用植物细胞实现目的基因所表达的蛋白质类药物的工厂化生产，培养到_______________阶段即可。

（5）动物克隆技术：目前动物的克隆主要采用__________________技术来实现，我国禁止生殖性克隆，但不反对________________的研究。

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图是利用正常大鼠制备转基因大鼠的流程示意图，回答下列问题。

（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端。当质粒用限制酶切割一次以后，形成　　　　 个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，再用连接酶连接两者之间的黏性末端，则会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况，其最可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）卵母细胞除从活体　　　　　　　　 中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取，采集到的精子必须经过　　　　　　　　　　　　 处理后，才能与卵母细胞结合，完成受精作用。

（3）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是　　　　　　　 、早期胚胎培养和胚胎移植。

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回答下列关于基因工程的相关问题：

(l)基因工程中限制酶的作用是____。用两种不同的限制酶分别切割目的基因的两端获得目的基因，与经过同样双酶切的运载体连接构建基因表达载体。与单一酶切相比，双酶切具有的优点是____（答出两点）。

(2)基因表达载体应该包括启动子、目的基因、标记基因和____。常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游，双启动子的作用可能是____。标记基因的作用是______________。

(3)目的基因可以在受体细胞中表达的原因是____。若要检测目的基因是否转录，可采用的分子水平的检测方法是____。

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基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是:

A.限制酶只用于切割获取目的基因

B.载体与目的基因通常用同一种限制酶处理

C.基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶

D.带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测

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“筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述中正确的有几项(    )

①基因工程中用同种限制性核酸内切酶切割运载体和目的基因，酶切产物用DNA连接酶连接，为了保证成功率，需将获得的产物筛选后导入受体细胞

②单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第一次筛选出的是杂交瘤细胞

③单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第二次筛选出的是针对目标抗原的抗体检 验为阳性的杂交瘤细胞

④为了快速繁殖无子西瓜，需筛选出特定染色体组数的体细胞才能进行组织培养

A. ②③　　 B. ①④　　 C. ③④　　 D. ①②

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用DNA连接酶把被限制性核酸内切酶Ⅰ（识别序列和切点是－↓GATC－）切割过的载体和被限制性核酸内切酶Ⅱ（识别序列和切点是－G↓GATCC－）切割过的目的基因连接起来后，该重组DNA分子能够再被限制性核酸内切酶Ⅱ切割开的概率是

A．1/2             B．7/16          C．1/16           D．1/4

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