下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗...

下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必 需组成。图中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc 为四环素抗性基因， lacZ 为蓝色显色基因。 EcoR Ⅰ、 PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离，单位为 kb（1 kb= 1000 个碱基对长度）。请回答下列问题：

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒_______，选择的限制酶 是_______。

（2）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒 用 EcoRI 完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有_____或______。

（3）将基因表达载体导入大肠杆菌时，可将大肠杆菌先用 处理。导入大肠杆菌后，为了筛选 出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入______，形成的菌落颜色为_______ 。

（4）如果要检测导入目的基因的大肠杆菌是否合成相应的蛋白质，可以采用_____ 法。

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下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是　　　　 、　　　　 。

（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到　　　　 酶。如果是两两重组，可能有　　　　 种长度的重组结果。

（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用　　　　 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和　　　　 kb，或者　　　　 kb和　　　　 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

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如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题。

(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是________，理由是________、________。

(2) 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用________酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6 kb，或者________kb和________kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。

(3) 为研究目的基因D的功能，研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段(DNA复制子链的延伸方向5′→3′)。

注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x，y片段分别与N基因两端互补配对

用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是下图中的________。

ab cd

②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是________(填“D1－N”或“D1－D3一N”或“D3－N”或“D1－N—D3”)。

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如图所示为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因(能使含该基因的大肠杆菌菌落呈蓝色)。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请据图分析并回答问题：

（1）若需获得图中目的基因，可选用________限制酶。

（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列叙述错误的有________(填字母)。

a．该图中含有两个密码子

b．图中③和④代表两个不同的脱氧核苷酸

c．若只用该片段中的3个碱基对，可以排列出43种片段

d． DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用中①处

（3）图中最适合作为目的基因运载体的质粒是B，而A、C两种质粒不能作为运载体的理由分别是________。

（4）用目的基因和质粒B构建重组质粒后用EcoRⅠ完全酶切并进行电泳观察，可出现长度为1．1 kb和________kb，或者________kb和________kb的片段。(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计)

（5）将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，并进行导入大肠杆菌受体细胞的操作之后，从菌落的颜色和对抗生素抗性的角度分析，受体细胞的类型有________种。若菌落表现为具有氨苄青霉素抗性、不呈蓝色，说明导入对应受体细胞的DNA为_______________________。

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如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图1中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题：

（1）图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是______，理由是______、______。

（2）在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用______酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6kb，或者______kb和______kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。

（3）为研究目的基因D的功能，研究人员用图2所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。

注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对

①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是图3中的______。

②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是______（填“D1-N”或“D1-D3-N”或“D3-N”或“D1-N-D3”）。

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如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0．7Kb）、PvuⅠ（0．8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1kb=1000个碱基对，请回答下列问题：

（1）片段D为目的基因中的某一片段，则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位依次是______________（填数字）。

（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是______________ （填A/B/C），请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________、______________。

（3）用EcoR I完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为1．1kb和______________kb的两个片段，或者长度分别为______________的两个片段。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

（4）将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，之后，受体细胞的类型（对抗生素表现出抗性R或敏感性S，蓝白代表菌落颜色）包含______________ （多选）。

A．ApR、蓝色   B．ApR、白色  C．ApS、蓝色  D．ApS、白色

（5）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是_____________。

A．受精卵能使目的基因高效表达

B．受精卵可发育成动物个体

C．受精卵基因组更易接受DNA的插入

D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作

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[生物——选修3:现代生物科技专题]

下图1所示为用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因及其上DNA片段示意图；图2所示为三种质粒示意图。图中AP为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。EcoRⅠ、PvuⅠ等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，是指质粒在受体细胞中复制时的起点。

（1）组成片段D的基本骨架与细胞膜的基本骨架相同的元素是___________。

（2）图2中质粒A、质粒C能否作为目的基因运载体最理想的质粒？_________　　 (填“能”或“否”），请说明理由________________。　　

（3）重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅在10-7，用质粒B构建重组质粒，为了筛选出导入了重组质粒的大肠杆菌，在导入完成后，将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是____________，可能性最大的是_____________。

（4）若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需要将重组质粒导入至山羊的_________（细胞）中。

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如图1表示某质粒，该质粒含有抗氨苄青霉素抗性基因（amp＇）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，该酶能将白色底物X-Gal转化为蓝色产物，图2表示含目的基因的DNA片段，实验小组利用该质粒为载体将目的基因导入大肠杆菌，并筛选成功导入重组质粒的受体细胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位点）。请回答下列问题：

（1）构建基因表达载体的目的是_________。在构建基因表达载体时应选用的限制酶是__________。

（2）将重组质粒导入大肠杆菌时，应用__________处理大肠杆菌，制备感受态细胞，实验室选用微生物作为受体细胞的优点是_________。

（3）重组质粒导入大肠杆菌后，应将大肠杆菌置于以X-Gal为底物，并添加_______________的培养基上培养，挑选出__________（填“白色”或“蓝色”）菌落。

（4）检测目的基因是否成功导入受体细胞常用的方法是__________，该方法依据的原理是__________。

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下图是某质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示酶切后目的基因插入位点。下列有关叙述正确的是（     ）

A．质粒都含有抗性基因，该基因常常作为标记基因

B．将重组质粒1导入一个大肠杆菌，该菌不能在含氨苄青霉素培养基上长出一个菌落

C．为了便于筛选含重组质粒的受体细胞，应首选重组质粒2导入受体细胞

D．将重组质粒4导入大肠杆菌，目的基因至少会表达出一个蛋白质分子

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下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“工程菌”的示意图。图a是基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因．目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性．为了检查载体是否导入原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）．再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）．据此分析并回答：

（1）pBR322质粒的基本组成单位是　　　　　　 。在基因工程中，质粒上的Amrr、Tetr称为　　　　 基因。

（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是　　　　　　　　　　　　　　 ，由此说明　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中的　　　　　　　　　 步骤，该基因工程中的受体细胞是　　　　　　 。

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