科学家Burton等将人的抗体编码基因体外克隆后，插入噬菌体中并转染大肠杆菌得到工程菌。目...

科学家Burton等将人的抗体编码基因体外克隆后，插入噬菌体中并转染大肠杆菌得到工程菌。目的基因在工程菌中进行表达，获得了具有高度免疫活性的人抗体，该项技术被称为噬菌体抗体库技术。回答下列相关问题：

（1）提取人的抗体编码基因时，若限制酶切出的DNA片段是平末端，则需要用____酶进行连接。若要在短时间内获得较多的抗体编码基因，可以利用PCR技术扩增DNA，扩增目的基因时需要加入两种引物，其原因是____。

（2）运用逆转录法获得的抗体编码基因，只是该基因的____序列，需要插入载体的____之间才能进行转录。

（3）大肠杆菌常常被用作基因工程的受体菌，其主要优点是____（答出两点即可）。

（4）将重组DNA分子导入受体细胞时，一般不需要用CaCl2处理大肠杆菌以制备感受态细胞，其原因是____。

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科学家将体外扩増的人抗体基因片段插入噬菌体DNA,用该噬菌体侵染大肠杆菌，人抗体基因与噬菌体基因一起表达，形成融合蛋白，出现在子代噬菌体表面，再通过筛选可得到噬菌体抗体，该抗体可用于肿瘤的诊断与治疗。回答下列问题：

（1）获得人抗体基因的途径之一是从____________细胞中提取mRNA，通过____________获取cDNA。

（2）cDNA可通过____技术扩增，在反应体系中除了加入模板DNA、酶和引物外，还应加入____________作为合成DNA的原料。这一过程____________（填“需要”或“不需要”）加入解旋酶。

（3）在制备噬菌体抗体的过程中，应选用具有多个____________切割位点的噬菌体为材料，便于抗体基因片段的插入。所用大肠杆菌不需要用Ca2+处理的原因是________________________。

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用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体，方法是将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式，附着在噬菌体表面，也可能通过大肠杆菌分泌出去。回答下列问题：

（1）获取人抗体基因时，可从人的___________（填“B”或“T”或“体”）细胞中获取总RNA，逆转录成cDNA，再通过PCR技术扩增出抗体基因。在PCR反应体系中，加入dNTP（dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是______________________。

（2）在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2+处理大肠杆菌，依据是_________________。

（3）从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是___________，原理是______________________。

（4）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列在终止密码子突变型的菌株表达时，抗体基因的表达产物是___________（填“融合蛋白”或“分泌型抗体”）。

（5）与利用杂交瘤技术生产的单克降抗体相比，用该技术省去了___________（步骤），使制备更简单易行。

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用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体，方法是将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式，附着在噬菌体表面，也可能通过大肠杆菌分泌出去。回答下列问题：

（1）获取人抗体基因时，可从人的___________（填“B”或“T”或“体”）细胞中获取总RNA，逆转录成cDNA，再通过PCR技术扩增出抗体基因。在PCR反应体系中，加入dNTP（dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是______________________。

（2）在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2+处理大肠杆菌，依据是_________________。

（3）从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是___________，原理是______________________。

（4）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列在终止密码子突变型的菌株表达时，抗体基因的表达产物是___________（填“融合蛋白”或“分泌型抗体”）。

（5）与利用杂交瘤技术生产的单克降抗体相比，用该技术省去了___________（步骤），使制备更简单易行。

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为临床检测肿瘤坏死因子（TNF-α )，利用“噬菌体展示技术”获得TNF-α抗体，需要获得TNF-α抗体的基因片段，插入到噬菌体基因组中，经过筛选得到能正确表达TNF-α抗体的噬菌体，进行大量扩增。下列相关叙述不正确的是 （　　 ）

A. 将TNF-α抗体的基因片段与噬菌体DNA重组需用限制酶和DNA连接酶

B. 在细菌体内，噬菌体以自身氨基酸为原料合成TNF-α抗体

C. TNF-α抗体随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面

D. 噬菌体通过侵染细菌繁殖，增殖速度快，更容易快速获得抗体

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有关生物技术的叙述不正确的是

A. 植物组织培养过程发生基因选择性表达

B. 显微注射目的基因表达载体利用了细胞膜流动性原理

C. PCR技术可以扩增目的基因

D. 体内、体外培养杂交瘤细胞均可获得单克隆抗体

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下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是

A．动物细胞培养过程中更换培养液的目的仅是为了补充营养物质

B．杂交瘤细胞进行体外培养，可获得单克隆抗体

C．杂交瘤细胞进行体内培养，可获得能产生单克隆抗体的胚胎

D．动物细胞培养过程中，用胃蛋白酶处理组织使细胞分散

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下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程：

（1）若要体外获得大量的VP40基因，可采用_______技术进行扩增，若该目的基因循环扩增3次，理论上需要消耗_______个引物。

（2）过程①中选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优点是____________________，此外还要用到________酶。

（3）过程②中首先需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于________，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为____________。

（4）与植物原生质体融合相比，过程④特有的诱导融合的方法是用____________处理。通常在选择培养基中需加入__________，目的是防止培养过程中的污染。选择培养基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体，对杂交瘤细胞还需要进行_________培养和_______________，最终获得单克隆抗体。

（5）上述克隆技术_________（填“能”或“不能”）体现动物细胞的全能性，_____________技术体现了动物细胞核的全能性。

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下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程：

（1）若要体外获得大量的VP40基因，可采用_______技术进行扩增，若该目的基因循环扩增3次，理论上需要消耗_______个引物。

（2）过程①中除选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶外，还要用到________酶。

（3）过程②中VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为____________，大肠杆菌等原核生物常作为受体细胞的原因 ______________________________（写出两点）。

（4）与植物原生质体融合相比，过程④特有的诱导融合的方法是用____________处理。通常在选择培养基中需加入__________，目的是防止培养过程中的污染。对杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和_______________，最终获得单克隆抗体。

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小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是 （　　）

A. 一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞

B.用PCR 方法扩增目的基因时必须知道基因的全部序列

C.PCR 体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA 聚合酶

D. 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列

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