漆酶是一种胞外氧化酶，具有很强的降解木质素的能力，可用于处理造纸厂排放的污水。研究人员从不...

漆酶是一种胞外氧化酶，具有很强的降解木质素的能力，可用于处理造纸厂排放的污水。研究人员从不同环境地表上采集土壤、腐烂的树枝等接种到MEA培养基上，经过一系列分离纯化，最终筛选出了高产漆酶的白腐真菌。请回答下列问题：

（1）MEA培养基用于白腐真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制__________的生长，加入了链霉素的培养基属于__________培养基。

（2）将MEA培养基上疑似白腐真菌的菌株用平板划线接种到新的培养基上，培养一段时间后会观察到菌落。菌落的含义是__________。

（3）实际生产中，通过培养白腐真菌获取的漆酶蛋白往往与其它物质混合在一起。因此，得到漆酶的粗提取物后，先要通过__________和__________法进行纯化，再通过__________鉴定漆酶的纯度。

（4）用于生产实践前，还需要测定纯化后的漆酶的活性。漆酶的活性以__________来表示。

（5）游离的漆酶稳定性差，在环境中易受温度、pH等因素的影响，且不易分离和回收，这在一定程度上限制了漆酶的工业化应用。请根据所学知识提出一项解决措施：__________。

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分离筛选降解纤维素能力强的微生物对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株，并对筛选出的菌株进行了初步研究。

（1）对培养基进行灭菌的常用方法是　　　　　　 。为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用　　　　　　 法进行接种。

（2） 先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以　　　　　　 为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入　　　　　 溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量　　　　　　　 。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知，8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强,原因是　　　　　　 。

注: ① DP = （D / d） 2，其中d表示菌落直径（cm） ，D表示水解圈直径（cm）

②“+”为滤纸边缘膨胀， “+ + ”为滤纸整齐膨胀并弯曲，“+ + + ”为滤纸不定形“+ + + +”为成团糊状“+ + + + +” 为半清状

（3） 为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见下图。

由图分析可知，三种菌株对　　　　　　 的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中　　　　　　 的降解率变化最大。整体分析　　　　 号菌株的降解效果最好。

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近年来，在处理富营养化水体的污水过程中，与化学、物理除氮方法比较，目前认为微生物反硝化去除氮素污染更为经济有效。科研工作者采用基因工程技术构建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，进行了相关研究。请回答问题。

（1）微生物的反硝化作用，是氮循环中一个重要的生物过程。亚硝酸盐还原酶（Nir）是该过程的关键酶，是由野生菌株YP4的反硝化基因（nirS）转录后，再翻译出具有___________作用的蛋白质。

（2）工程菌的构建

①研究者利用NCBI数据库查到nirS基因的碱基序列，设计引物，利用PCR技术扩增nirS基因。PCR技术利用了___________的原理，使用耐高温Taq酶而未使用普通DNA聚合酶的主要原因是______________________。

②研究者用HindⅢ和BamHI两种限制酶处理nirS基因与p质粒，在_______________酶的作用下进行体外连接，用连接产物转化大肠杆菌DH5，在含庆大霉素的培养基中进行培养并提取质粒，如果用HindⅢ和BamHI双酶切，得到两个片断电泳结果分别与_______________电泳结果基本一致，说明获得重组质粒pYP4S。

③将pYP4S转化到野生菌株YP4中形成工程菌YP4S，培养后进行PCR鉴定。为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图1所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的最佳一对引物组合是_________。某学生错选了图中的另外一对引物组合，扩增出长度为2．1kb的片段，原因是_______________。

（3）检测工程菌YP4S除氮的效能

①工程菌株YP4S在已灭菌的模拟污水中培养36h后，检测结果如图2。结果表明___________________。

②要进一步证明工程菌对含氮污水治理更有效，应___________________________。

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近年来，在处理富营养化水体的污水过程中，与化学、物理除氮方法比较，目前认为微生物反硝化去除氮素污染更为经济有效。科研工作者采用基因工程技术构建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，进行了相关研究。请回答问题。

（1）微生物的反硝化作用，是氮循环中一个重要的生物过程。亚硝酸盐还原酶（Nir）是该过程的关键酶，是由野生菌株YP4的反硝化基因（nirS）转录后，再翻译出具有___________作用的蛋白质。

（2）工程菌的构建

①研究者利用NCBI数据库查到nirS基因的碱基序列，设计引物，利用PCR技术扩增nirS基因。PCR技术利用了___________的原理，使用耐高温Taq酶而未使用普通DNA聚合酶的主要原因是______________________。

②研究者用HindⅢ和BamHI两种限制酶处理nirS基因与p质粒，在_______________酶的作用下进行体外连接，用连接产物转化大肠杆菌DH5，在含庆大霉素的培养基中进行培养并提取质粒，如果用HindⅢ和BamHI双酶切，得到两个片断电泳结果分别与_______________电泳结果基本一致，说明获得重组质粒pYP4S。

③将pYP4S转化到野生菌株YP4中形成工程菌YP4S，培养后进行PCR鉴定。为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图1所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的最佳一对引物组合是_________。某学生错选了图中的另外一对引物组合，扩增出长度为2．1kb的片段，原因是_______________。

（3）检测工程菌YP4S除氮的效能

①工程菌株YP4S在已灭菌的模拟污水中培养36h后，检测结果如图2。结果表明___________________。

②要进一步证明工程菌对含氮污水治理更有效，应___________________________。

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聚乙烯醇（PVA）是一种人工合成的水溶性的高分子聚合物，广泛用于纺织、印染、化纤等领域，由于其降解周期长，给环境造成严重的污染，实验小组筛选出PVA降解菌，对于含PVA废水土壤的处理具有十分重要的意义，回答下列问题：

（1）实验室分离PVA降解菌时应当以_____________作为唯一碳源，除此之外还需要加入的营养成分包括_______________________________，PVA降解菌主要是一些细菌类生物，因此制备培养基时应将培养基的pH调节至__________________。

（2）从含有PVA废水的土壤取样后，一般要先进行选择培养，其目的是___________________，选择培养时所用的培养基从物理性质上划分属于___________ 培养基。

（3）显微镜计数法对微生物进行计数时需要用到的工具是_______________，利用稀释涂布平板法计数测得的微生物的数量往往比实际值___________（填“偏大”或“偏小”），这两种微生物计数方法的区别是______________________________________。

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某研究团队拟从餐厨垃圾中分离具有高效降解能力的微生物，并制成菌制剂，用于餐厨垃圾高效无害化处理。设计实验如下：

步骤一：取一定量的餐厨垃圾样品，筛除大块杂质后，装入无菌袋中密封，备用。

步骤二：配制用于培养菌种的培养基，配方如下：

1.根据配方可知，该培养基属于　　　　　

A.固体培养基 B.液体培养基

C.通用培养基 D.选择培养基

步骤三：制备样品稀释液，并将不同浓度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养，48h后观察结果。

2.在涂布过程中需要用到的工具有　　　　　　

A.无菌圆纸片 B.无菌玻璃刮铲 C.酒精灯 D.接种环 E.无菌滴管

3.培养后，培养基上长出了35个菌落，通过观察菌落的____________，可初步判断是20种不同的菌种。为进一步确定菌种类型，还需从分子水平进行的检测方法是_____________。

步骤四：对20种菌种进行分离纯化。为了比较这些菌种对餐厨垃圾的降解效果，分别配制含有餐厨垃圾主要成分（淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素）的培养基，分别用于测定各菌种对其主要成分的降解效果，并进行测定。图表示其中4种菌种（X1-X4）在淀粉培养基上的培养结果，表3为这四种菌的测定结果。

四种菌种对餐厨垃圾各成分的降解系数

备注：降解系数（D/D0）越大，降解效果越明显。

4.写出图所示的测定菌种对淀粉降解效果的实验原理：_______________。

5.根据表中数据判断，降解餐厨垃圾能力最强的菌种是______________。

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进入冬季，城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系，为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力，缓解环境污染。试分析并回答有关问题：

（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合，其中 _____ 在细胞结构上与其他两者不同。

（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将 _________分解为 __________ 。

（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列 ___________ ，从而得到单个菌落，再采用 __________ 方法进行鉴定，得到右图的菌落．那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是 ___________ （填图中序号）。

（4）图中所示培养基从物理状态上看，属于 ______ 培养基。

（5）为探究催腐剂在不同条件下对玉米秸秆的分解作用，将经过灭菌处理的秸秆平验还存在不完善之处，请你说出其中一点 _______________________________ 。

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进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶

颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力。缓解环境污染。试分析并回答有关问题：

（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中_______________在细胞结构上与其他两者不同。

（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将____________分解为______________。

（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将

菌液进行一系列______________，从而得到单个菌落, 再采用______________方法进行鉴定，得到图的菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是_______________(填图中序号)。

（4）为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行____________________的实验，纤维素酶的测定

方法，一般是用________________试剂对纤维素分解产物进行定量测定。

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进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力。缓解环境污染。试分析并回答有关问题：

（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中_______________________在细胞结构上与其他两者不同。

（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将__________分解为______________。

（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列______________，从而得到单个菌落,再采用________________方法进行鉴定，得到右图的菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是_____________________________（填图中序号）。

（4）图中所示培养基从物理状态上看，属于__________________________培养基。

（5）为探究催腐剂在不同条件下对玉米秸秆的分解作用，将经过灭菌处理的秸秆平分成下表的甲、乙、丙三组，均放在无菌环境条件下进行培养，得到如下实验现象：该

实验还存在不完善之处，请你说出其中一点_________________________。

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在秋末，部分地区出现严重雾霾，这与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆尽快腐烂掉，增加土壤肥力并缓解环境污染。回答下列有关问题：

（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中____________在细胞结构上与其他两者不同。

（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将______________分解为__________。

（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列____________，从而得到单个菌落，再采用____________法进行鉴定。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________。

（5）为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行__________________的实验，纤维素酶的测定方法一般是用______________(试剂)对纤维素分解产物进行定量测定。

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