近日，南京农业大学的科研人员用动物干细胞研发出我国第一块肌肉干细胞培养肉，该团队使用第六代...

近日，南京农业大学的科研人员用动物干细胞研发出我国第一块肌肉干细胞培养肉，该团队使用第六代猪肌肉干细胞，经过约20天培养得到重达5克的培养肉。下列有关叙述错误的是（　　 ）

A.培养猪肌肉干细胞，通常需要用胰蛋白酶分散成单个细胞

B.在培养过程中通常要通入5%的CO2，以刺激细胞呼吸

C.培养肉往往使用添加了糖、氨基酸等多种营养物质的培养液

D.培养肉作为食品上市还要经过产品安全性等相关性能的评估

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面对2019新型冠状病毒在全球的肆虐，包括我国在内的各国都在想方设法积极应对。下图为科研人员研发冠状病毒疫苗的几种技术思路。

（1）途径Ⅰ和Ⅱ都需要通过动物细胞培养获得足够数量的病毒株。在动物细胞培养中，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是____________。途径Ⅰ与途径Ⅱ相比，生产的疫苗安全性更高的是途径____________。

（2）途径Ⅲ中，过程①的操作需要____________酶。途径Ⅲ中所示技术的核心是____________（用图中数字做答）。

（3）途径Ⅳ生产的DNA疫苗在动物细胞中表达引起机体免疫应答。与DNA疫苗相比，mRNA疫苗的安全性更有优势，这是因为mRNA不需要进入____________，无整合到宿主细胞染色体基因组中的风险，且易被____________水解，不会遗传给子细胞。

（4）该病毒表面蛋白A为主要抗原，由病毒的A基因控制合成，为进一步获得更符合治疗要求的单克隆抗体，科研人员对抗体结构进行精细研究，找到既不影响抗体空间结构又降低免疫反应的____________序列，通过基因工程技术对抗体结构进行人源化改造。这种人源单克隆抗体属于____________工程的产物。

（5）研究发现人体在感染新冠病毒后可引发“细胞因子风暴”（机体感染病原体后，体液中多种细胞因子迅速大量产生的现象），进而伤害正常的宿主细胞，从而造成免疫攻击行为。“细胞因子风暴”引发的免疫功能异常称为________________________。

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2019年1月2日，《科技日报》报道，南京农业大学周光宏教授团队利用猪肌肉干细胞，经过20天的培养，生产出我国第一块肌肉干细胞人造肉。下列有关肌肉干细胞的叙述，正确的是（　　 ）

A.肌肉干细胞在增殖过程中始终都存在同源染色体

B.肌肉干细胞与乳酸菌中核糖体的形成均与核仁有关

C.肌肉干细胞的核糖体上可发生单体脱水缩合形成磷酸二酯键

D.在培养过程中肌肉干细胞的线粒体可将葡萄糖彻底氧化分解

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近日，来自华盛顿大学医学院的研究人员将两种小RNA和其它转录因子加入培养液中，成功将来自健康成年人机体中的皮肤细胞直接转化成了运动神经元。运动神经元能够驱动肌肉收缩，其损伤会导致脊肌萎缩症等严重疾病，最终致人瘫痪甚至早亡。下列有关说法正确的是(　　 )

A. 该研究中皮肤细胞表现出了全能性

B. RNA和转录因子使皮肤细胞的遗传物质发生改变

C. 该转化过程中蛋白质种类和数量未发生改变

D. 这种技术能帮助开发新型疗法来治愈神经退行性疾病

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有机磷农药乐果在农业生产中使用广泛，其长期使用会导致土壤中有不同程度的残留。图甲为科研人员从土壤中分离出降解乐果的菌株的流程，图乙为降解乐果的菌株在固体培养基上产生的透明圈，透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物降解能力的大小，请回答相关问题：

（1）制备该选择培养基时，应以_____为唯一碳源，对培养基灭菌常用的方法是_____。

（2）培养基冷凝后应将平板_____，以防冷凝水落入培养基造成污染。图甲所示平板划线接种的操作过程中，对接种环至少需进行_____次灼烧灭菌。

（3）挑取甲过程分离获得的菌种制成稀释液，采用_____法接种在培养基上，培养3～4 d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良降解菌株（如表）。

根据实验结果可以确定降解乐果能力最强的菌株是_____（填标号）。

（4）使用乐果显色剂采用比色法检测降解后的乐果残留量，应先制作系列浓度梯度的溶液进行显色反应，下表中3号比色管的乐果浓度应为_____。

如果土壤溶液中乐果浓度为50 mg•L﹣1，降解后约有21%的残留量，则需要将残留液稀释_____（填标号：①5②10③20）倍后，再进行比色。

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为探讨薄荷挥发油（简称薄荷油）作为天然的皮肤促透剂的作用机理，科研人员以人永生皮肤角质形成细胞（H细胞）为实验材料进行了相关实验。

（1）研究人员将使用完全培养基培养了24h的H细胞等量分组，设置为空白组、对照组和加入用DMSO溶解的一定浓度薄荷油的处理组，其中对照组的培养基中应加入_____________。将各组置于不同条件下进行孵育后，采用一定的技术测定了相关数据，结果如下表。

①用绿色荧光染料标记H细胞膜上的蛋白质，待荧光分布较为均匀后，在细胞膜上选定需进行漂白的部位，用激光照射使荧光分子内部结构发生不可逆改变，从而使此部位的荧光消失。一段时间后，漂白部位荧光会有一定程度的恢复。此现象说明细胞膜具有_____________。根据漂白区域内荧光漂白前后的荧光强度值计算细胞膜荧光恢复率，还可推算出膜中蛋白质分子的_____________。由表中结果可知，薄荷油能显著提高H细胞膜的荧光恢复率。

②H细胞静息状态下，细胞膜内外电位呈_____________，从而形成电位差（即膜电位）。本实验使用阴离子荧光染料D作为探针检测膜电位。当细胞内负电荷减少时，荧光染料D就会进入细胞内，由此可知，细胞内的荧光强度值_____________，表明细胞膜内外电位差越小。实验结果显示，对照组与空白组的荧光强度值没有显著性差异，而薄荷油可_____________H细胞的膜电位。

（2）由上述实验结果推知，薄荷油可__________Ca2+-ATP酶活性、__________H细胞内Ca2+浓度，从而通过改变细胞内外Ca2+平衡而影响细胞膜流动性及膜电位的改变，因此降低了皮肤屏障作用，促进药物经由皮肤吸收进入机体。

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科研人员为研究 JS-K（一种新合成的抗肿瘤药物）对胃癌细胞的抑制效应及机制进行了相关实验。

（1）体外癌细胞培养：胃癌细胞培养于含动物血清（目的是更好地模拟体内的 ________成分） 的完全培养液中，并补充_________以防污染。经_________消化制成细胞悬液。将装有细胞悬液的培养瓶置于 CO2 恒温培养箱中培养。

（2）配制不同浓度的 JS-K 溶液，添加于各组完全培养液中。每隔一段时间检测胃癌细胞存活率。

（3）研究结果表明：JS-K 抑制胃癌细胞存活，且抑制效果随着剂量的增加和处理时间的延长而 ________，如图 1。在图中画出 24h 时各浓度下胃癌细胞的存活率曲线_________。本实验的可变因素是____。

（4）实验过程中还用到一种 Z 试剂，相关结果如图 2。根据结果推测，Z 试剂可能是细胞凋亡的____________ （填“促进”或“抑制”）剂。

（5）研究者进一步研究了 JS-K 诱导胃癌细胞凋亡的机制，发现 JS-K 是通过促进活性氧的产生诱导胃癌细胞凋亡的。研究者用 JS-K 和 NAC 同时处理胃癌细胞，发现其与____________ 的胃癌细胞存活率相似，但比用__________________处理的胃癌细胞存活率显著高。猜测 NAC 是一种 _________________的清除剂。

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下表数据为科研人员实验测得体外培养的某种动物细胞的细胞周期（分裂间期包括G1期、S期和G2期，M期为分裂期）各阶段时间（单位：小时），回答下列问题：

(1)若在上述细胞的培养液中加入过量的DNA合成抑制剂，处于　　 期的细胞立刻被抑制，再培养 　　　 小时，其余细胞都将被抑制在G1期与S期的交界处。

(2)S期的启动需要某种蛋白质分子作为启动信号，该蛋白质在S期之前合成并存在于S期全过程中。若将S期和G1期细胞融合，则G1期细胞核进入S期的时间将 　　　　 （填“提前”、“不变”或“延迟”）。

(3)若在培养过程中将适量的3HTdR（3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷）和某促进细胞分裂的药物加入到培养液中，培养一段时间，可观察和测量到G2期 　 　　 （填“变长”或“变短”）。

(4)下表为科研人员全部20次实验的数据汇总表。（注：每次计数50个细胞，实验条件与观察计数方法相同）

根据上表数据可估算出该种细胞一个周期中前期的时长为　　　　　　 。（保留小数点后两位）

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下表数据为科研人员实验测得体外培养的某种动物细胞的细胞周期（分裂间期包括G，期、S期和G2期，M期为分裂期）各阶段时间（单位：小时），回答下列问题：

(1)若在上述细胞的培养液中加入过量的DNA合成抑制剂，处于　　 期的细胞立刻被抑制，再培养 　　　 小时，其余细胞都将被抑制在G1期与S期的交界处。

(2)S期的启动需要某种蛋白质分子作为启动信号，该蛋白质在S期之前合成并存在于S期全过程中。若将S期和G1期细胞融合，则G1期细胞核进入S期的时间将 　　　　 （填 “提前”、“不变”或“延迟”）。

(3)处于M期细胞中的纺锤体是由细胞两极的　　　　　 发出。在M期，消失后又重新出现的细胞结构是 　　　　　 。若要在光学显微镜下观察M期的各时期特征，需用龙胆紫溶液使细胞中的　　 着色。

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2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

（1）过程①和②必需用到的酶是________。

（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有________才能构成一个完整的基因表达载体。

（3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射________的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到________期即可通过显微操作将其细胞核去除。

（4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及________等物质。

（5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的________期胚胎进行操作，且要注意 ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

（6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是________。

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