果胶酶的应用领域非常广泛，它存在于各种微生物中。为获得土壤中果胶酶高产菌株，科研人员进行了...

果胶酶的应用领域非常广泛，它存在于各种微生物中。为获得土壤中果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定和酶的工业生产等工作。

（1）实验过程中，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是:A______、B_______。用此配方进行选择培养，目的是__________________________ 。

（2）为在培养基表面形成单个菌落，以接种环为工具，则用______法进行接种。灼烧接种环之后，要等冷却才可继续操作，理由是：_____________。

（3）完善“探究果胶酶的最适用量”的实验方案：向分别盛有1.0、1.5、2.0……4.0mL2%果胶酶溶液的一组试管内同时加入5mL苹果泥，__________________________，适温水浴30分钟后，过滤每支试管的反应液，比较滤出的果汁体积或_____________________。

（4）当果胶酶与苹果泥混合在一起时，酶很难回收，不能再次利用，还可能影响了产品的质量。科研人员认为引进_______________技术，可解决生产中遇到的这些问题了。

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回答下列（一）、（二）两个小题：

（一）为获得果胶酶，科研人员进行了下列果胶酶高产菌株的分离、筛选、鉴定及果胶酶在生产上的应用试验。

（1）为分离果胶酶产生的某种霉菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表中应加入的成分a是_____________，该成分在培养基中的作用为___________________。在各种成分溶解配制好后应将pH调到___________，再进行高压蒸汽灭菌。

（2）将获得的菌株进行扩大培养后，再用_________________（工具）从滤液中获得粗提的果胶酶。如要检测获得的果胶酶活性，可先将等量的果胶酶和果胶混合处理适宜时间，再加入等量的______________，最后根据沉淀物的生成量来判断。

（3）在果汁和果酒制作过程中，常用果胶酶处理来提高相应产品的__________________。生产上通过明胶、海藻酸钠（包埋剂）或戊二醛（交联剂）等对果胶酶进行___________处理，以减少酶的使用量，降低生产成本。

（二）拟南芥中有抗冻基因CBF。苜蓿是温带地区重要的牧草，低温是制约其生长的限制因子之一。下图是培育转基因抗冻苜蓿植株的过程示意图，据图回答下列问题：

（1）图中的①先要用某种限制性核酸内切酶断开DNA片段中的___________个磷酸二酯键得到目的基因，再通过_________________技术获得大量的目的基因。这些目的基因必须要与质粒等载体重组后再导入宿主细胞，其主要原因是目的基因经重组后在宿主细胞内能实现___________（A．转录　 B．复制　　 C．翻译　　 D．整合到宿主DNA中）。

（2）图中的②过程的农杆菌经转化成功后再去感染苜蓿组织块，这种转基因方法的主要优点有______________________________、____________________________（至少写出二点）。

（3）图中的③过程若是通过胚胎发生途径实现，须将愈伤组织经______________培养得到大量的单细胞，再转移到含有适当配比的____________________________的培养基中继续分化成胚状体，最后形成相应的植株。

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为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。

（1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是　　　　　　 。制备的培养基常用　　　　　　　　 法进行灭菌。

（2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行　　　　　　　 ,用　　　　　　 法接种于固体培养基上。接种后的培养基　　　　 状态放人培养箱。

（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和　　　　　　 直径的比值，筛选果胶酶高产菌株。

（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的　　　　　　　　 （填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将　　　　　　　　 与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。

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为获得纤维素酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。

（1）为分离纤维素分解菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是_________。

（2）科研人员将采集的富含纤维素的土壤放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行___________，用_________法接种于固体培养基上。

（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液，一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和透明圈直径的比值，该比值_________（“大”、“小”）的菌落纤维素酶产量更高。

（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_______（填“上清液”或“沉淀物”）提取获得纤维素酶。

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凝乳酶是干酪和干酪素生产过程中的关键酶，动植物及微生物均能产生。由于微生物资源丰富、生长周期短，受气候等因素限制小等特点，微生物凝乳酶成为研究热点。为获得凝乳酶高产菌株，科研人员进行了以下分离、筛选、鉴定工作。

培养基配方表：

（1）从作用上看，该培养基属于______________（填“选择”或“鉴别”）培养基。

（2）科研人员将牧区采集的土壤样品放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行______________，用________________法接种于上述培养基上。接种后的培养基以______________状态放入培养箱。

（3）在涂布接种前，科研人员随机取若干灭菌后的空白平板先进行培养了一段时间，这样做的目的是_____________________________________。

（4）在稀释倍数为106倍下涂布了三个平板（每次取0.1mL），统计菌落数分别为240、250、260，则稀释前1mL菌液中所含此菌数量为_________________。

（5）挑选菌落时以白色沉淀圈大且透明圈小者为佳。将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_____________（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的凝乳酶。将一定量的粗提凝乳酶与适量酪蛋白溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将__________与等量酪蛋白溶液混合，作为实验的对照。

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耐热脂肪酶在工业上具有广泛应用，科研人员从小笼包蒸笼的垫布中分离到脂肪酶高产菌株，大量培养后提取获得脂肪酶液，以橄榄油为底物设置系列实验以研究该酶特性，回答下列问题：

（1）脂肪酶能水解橄榄油但不能水解淀粉,说明酶具有________。

（2）实验①：每组试管中加入等量的酶和底物，分别置于30、35、40、45、50、55、60℃水浴环境中20分钟后，测量底物量的变化，该实验的目的是___________。

（3）实验②：因工业上需要在不温度条件下应用该酶，若要测定酶液分别在40、50、60℃温度下保存2小时后的酶活性变化，实验思路是___________。

（4） 实验③：研究一定浓度的Mg2+（10－4mol/L）对酶的活性影响，已知该酶的最适pH值范围为7.0～8.0，实验结果如下，结果说明：___________。

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耐热脂肪酶在工业上具有广泛应用，科研人员从小笼包蒸笼的垫布中分离到脂肪酶高产菌株，大量培养后提取获得脂肪酶液，以橄榄油为底物设置系列实验以研究该酶特性，回答下列问题：

（1）脂肪酶能水解橄榄油但不能水解淀粉,说明酶具有________。

（2）实验①：每组试管中加入等量的酶和底物，分别置于30、35、40、45、50、55、60 ℃水浴环境中20分钟后，测量底物量的变化，该实验的目的是___________。

（3）实验②：因工业上需要在不同温度条件下应用该酶，若要测定酶液分别在40、50、60 ℃温度下保存2小时后的酶活性变化，实验思路是_________________________________________________。

（4） 实验③：研究一定浓度的Mg2+（10－4mol/L）对酶的活性影响，已知该酶的最适pH范围为7.0～8.0，实验结果如下，结果说明：_________________________________________________。

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纤维素酶高产菌株的研究与应用，有利于人们拓展自然资源的利用。研究人员从富含纤维素的土壤中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题：

（1）为达到筛选目的，平板内的固体培养基和锥形瓶中的液体培养基应以____________作为唯一碳源。

（2）在图示操作步骤③中，下列选项不需要的是___________（填序号）。

①酒精灯　　 ②培养皿　　 ③显微镜　　 ④无菌水

（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不易过多的原因是______________。

（4）图示操作②、③过程需重复几次，目的是__________。

（5）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如下图所示。

该同学的接种方法是______________。推测该同学接种时可能的操作失误是_____________。

（6）纤维弧菌和纤维单胞菌都能降解纤维素，但研究发现以每克菌体计算，两种菌降解纤维素的能力有所不同，对此现象合理的假设有_____________。

A．两种菌类合成的相关酶数量不同

B．两种菌内酶基因的结构不同

C．两种菌内相关酶结构不同

D．两种菌内相关酶活性不同

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（9分）脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究。原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8。在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26％、150％。回答下列问题：

(1)由于突变是不定向，可能发生的相关突变有等类型

(2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果：

实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20 mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7．5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性。结果如图，与原始菌株1 444相比，z6和z8的酶在不同pH条件下的________。测定酶的活性的实验温度为________℃。

(3)实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20mol，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较。本实验目的是________，对照组所用的酶液应是________。

（4）为了解决脂肪酶应用于工业生产时，溶液中的脂肪酶很难回收，不能被再次利用及脂肪酶通常对强酸、强碱非常敏感，容易失活等实际问题，科研人员采用了固定化脂肪酶、固定化脂肪酶高产菌株的技术，你认为采用技术较可行，理由是。

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脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究。原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8。在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26％、150％。

回答下列问题：

(1)由于突变是不定向，可能发生的相关突变有________等类型

(2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果：

实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20 mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7．5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性。结果如图，与原始菌株1 444相比，z6

和z8的酶在不同pH条件下的________。测定酶的活性的实验温度为________℃。

(3)实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20mol，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较。本实验目的是________，对照组所用的酶液应是________。

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