耐热脂肪酶在工业上具有广泛应用，科研人员从小笼包蒸笼的垫布中分离到脂肪酶高产菌株，大量培养...

耐热脂肪酶在工业上具有广泛应用，科研人员从小笼包蒸笼的垫布中分离到脂肪酶高产菌株，大量培养后提取获得脂肪酶液，以橄榄油为底物设置系列实验以研究该酶特性，回答下列问题：

（1）脂肪酶能水解橄榄油但不能水解淀粉,说明酶具有________。

（2）实验①：每组试管中加入等量的酶和底物，分别置于30、35、40、45、50、55、60℃水浴环境中20分钟后，测量底物量的变化，该实验的目的是___________。

（3）实验②：因工业上需要在不温度条件下应用该酶，若要测定酶液分别在40、50、60℃温度下保存2小时后的酶活性变化，实验思路是___________。

（4） 实验③：研究一定浓度的Mg2+（10－4mol/L）对酶的活性影响，已知该酶的最适pH值范围为7.0～8.0，实验结果如下，结果说明：___________。

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耐热脂肪酶在工业上具有广泛应用，科研人员从小笼包蒸笼的垫布中分离到脂肪酶高产菌株，大量培养后提取获得脂肪酶液，以橄榄油为底物设置系列实验以研究该酶特性，回答下列问题：

（1）脂肪酶能水解橄榄油但不能水解淀粉,说明酶具有________。

（2）实验①：每组试管中加入等量的酶和底物，分别置于30、35、40、45、50、55、60 ℃水浴环境中20分钟后，测量底物量的变化，该实验的目的是___________。

（3）实验②：因工业上需要在不同温度条件下应用该酶，若要测定酶液分别在40、50、60 ℃温度下保存2小时后的酶活性变化，实验思路是_________________________________________________。

（4） 实验③：研究一定浓度的Mg2+（10－4mol/L）对酶的活性影响，已知该酶的最适pH范围为7.0～8.0，实验结果如下，结果说明：_________________________________________________。

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果胶酶的应用领域非常广泛，它存在于各种微生物中。为获得土壤中果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定和酶的工业生产等工作。

（1）实验过程中，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是:A______、B_______。用此配方进行选择培养，目的是__________________________ 。

（2）为在培养基表面形成单个菌落，以接种环为工具，则用______法进行接种。灼烧接种环之后，要等冷却才可继续操作，理由是：_____________。

（3）完善“探究果胶酶的最适用量”的实验方案：向分别盛有1.0、1.5、2.0……4.0mL2%果胶酶溶液的一组试管内同时加入5mL苹果泥，__________________________，适温水浴30分钟后，过滤每支试管的反应液，比较滤出的果汁体积或_____________________。

（4）当果胶酶与苹果泥混合在一起时，酶很难回收，不能再次利用，还可能影响了产品的质量。科研人员认为引进_______________技术，可解决生产中遇到的这些问题了。

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木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶,在食品工业上具有较高的潜在应用价值。

现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）取适量体积的样品涂布在富含_____的固体培养基上,置于65℃(原因是此温度是______）的培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落在培养基上用_____法接种培养，进行菌株的______。将得到的菌株接种到______（固体/液体）培养基中富集。

（2）将富集后的菌株接种于固体培养基上,待菌落长出后用0.1%的_______染色1h，再用lmol/L　 NaCl脱色。菌落周围会出现______，筛选_____的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白和其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶，在食品工业上具有较高的潜在应用价值。现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）实验中，接种环使用前后都在酒精灯上灼烧，其目的是______________________________。

（2）取适量体积的样品涂布在富含__________且其为唯一碳源的固体培养基上，置于恒温培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落并进行一系列操作，然后在培养基上用__________法接种培养，进行菌株的__________。最后将得到的菌株接种到__________（填“固体”或“液体”）培养基中富集。

（3）将富集后的菌株接种于固体培养基上，待菌落长出后用0.1%的__________染色1h，再用1mol/LNaCl脱色。菌落周围会出现__________，筛选__________的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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回答下列（一）、（二）两个小题：

（一）为获得果胶酶，科研人员进行了下列果胶酶高产菌株的分离、筛选、鉴定及果胶酶在生产上的应用试验。

（1）为分离果胶酶产生的某种霉菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表中应加入的成分a是_____________，该成分在培养基中的作用为___________________。在各种成分溶解配制好后应将pH调到___________，再进行高压蒸汽灭菌。

（2）将获得的菌株进行扩大培养后，再用_________________（工具）从滤液中获得粗提的果胶酶。如要检测获得的果胶酶活性，可先将等量的果胶酶和果胶混合处理适宜时间，再加入等量的______________，最后根据沉淀物的生成量来判断。

（3）在果汁和果酒制作过程中，常用果胶酶处理来提高相应产品的__________________。生产上通过明胶、海藻酸钠（包埋剂）或戊二醛（交联剂）等对果胶酶进行___________处理，以减少酶的使用量，降低生产成本。

（二）拟南芥中有抗冻基因CBF。苜蓿是温带地区重要的牧草，低温是制约其生长的限制因子之一。下图是培育转基因抗冻苜蓿植株的过程示意图，据图回答下列问题：

（1）图中的①先要用某种限制性核酸内切酶断开DNA片段中的___________个磷酸二酯键得到目的基因，再通过_________________技术获得大量的目的基因。这些目的基因必须要与质粒等载体重组后再导入宿主细胞，其主要原因是目的基因经重组后在宿主细胞内能实现___________（A．转录　 B．复制　　 C．翻译　　 D．整合到宿主DNA中）。

（2）图中的②过程的农杆菌经转化成功后再去感染苜蓿组织块，这种转基因方法的主要优点有______________________________、____________________________（至少写出二点）。

（3）图中的③过程若是通过胚胎发生途径实现，须将愈伤组织经______________培养得到大量的单细胞，再转移到含有适当配比的____________________________的培养基中继续分化成胚状体，最后形成相应的植株。

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脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究。原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8。在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26％、150％。

回答下列问题：

(1)由于突变是不定向，可能发生的相关突变有________等类型

(2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果：

实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20 mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7．5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性。结果如图，与原始菌株1 444相比，z6

和z8的酶在不同pH条件下的________。测定酶的活性的实验温度为________℃。

(3)实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20mol，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较。本实验目的是________，对照组所用的酶液应是________。

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脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究。原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8。在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26％、150％。

回答下列问题：

(1)由于突变是不定向，可能发生的相关突变有　　　　　　　　　　 等类型

(2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果：

实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20 mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7．5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性。结果如图，与原始菌株1 444相比，z6

和z8的酶在不同pH条件下的　　　　　　 。测定酶的活性的实验温度为　　 　　　　 ℃。

(3)实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20mol，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较。本实验目的是　　　　　　 ，对照组所用的酶液应是　　　　　　　　　　　　 。

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（9分）脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组开展紫外线诱变选育脂肪酶高产菌株的研究。原始菌株1444粗壮假丝酵母经连续两次紫外线诱变，反复筛选，得到的突变株Z6和Z8。在40℃、pH 7.5条件下测定所产脂肪酶活性，分别比原始菌株提高了l26％、150％。回答下列问题：

(1)由于突变是不定向，可能发生的相关突变有等类型

(2)科研人员对上述三个菌株所产生的脂肪酶特性进行研究，获如下结果：

实验一：为测定脂肪酶在不同pH值条件下的稳定性，科研人员分别取上述三种菌株所产的酶液各20 mL，分别与等体积的pH5～9的缓冲液混匀，置于4℃冰箱保存24小时后，将pH调至7．5，再加入等量的底物溶液，测定酶的相对活性。结果如图，与原始菌株1 444相比，z6和z8的酶在不同pH条件下的________。测定酶的活性的实验温度为________℃。

(3)实验二：分别取上述三种菌株的酶液各20mol，置于50℃恒温水浴处理60min，每隔10min取样一次，测定酶活性，同时测定三个对照组的酶活性并进行比较。本实验目的是________，对照组所用的酶液应是________。

（4）为了解决脂肪酶应用于工业生产时，溶液中的脂肪酶很难回收，不能被再次利用及脂肪酶通常对强酸、强碱非常敏感，容易失活等实际问题，科研人员采用了固定化脂肪酶、固定化脂肪酶高产菌株的技术，你认为采用技术较可行，理由是。

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脂肪酶广泛应用于工业生产，某科研小组以原始菌株1444粗壮假丝酵母为材料进行紫外线诱变，选育脂肪酶高产的菌株。请回答下列问题：

（1）脂肪酶在酵母菌的____________上合成，经过内质网和___________的加工和运输分泌到细胞外。

（2）原始菌株经紫外线诱变后，采用___________法将菌液接种在添加乳化油脂的固体培养基上进行培养获得单菌落，通过比较菌落周围___________，进行初步筛选。

（3）原始菌株经连续两次紫外线诱变，反复筛选，选出4株脂肪酶活性较高的变异菌株，在40℃、pH为7.5的条件下对其进行传代培养，以测定产脂肪酶能力的稳定性，结果如下表所示（酶活力单位：U/mL）。结果表明，产脂肪酶能力较稳定的两种菌株是_____________________。

（4）科研人员测定了三种菌株在30〜55℃条件下的酶活性，以___________℃时的酶活性为100%，绘制相对酶活曲线如图1所示。进一步研究在50℃下三种菌株所产生的脂肪酶活性的热稳定性，结果如图2，可以得出结论:_________________________________。

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