转基因动物是指携带外源基因并能表达和遗传的一类动物，Palmiter等将大鼠的生长激素基因...

转基因动物是指携带外源基因并能表达和遗传的一类动物，Palmiter等将大鼠的生长激素基因和小鼠的mMT启动子融合，获得了“超级小鼠”。回答下列问题：

（1）将生长激素基因导入小鼠体内常用的方法是___________，在导入目的基因前要构建重组质粒，重组质粒包括目的基因、启动子、_______ 和标记基因等，其中标记基因的作用是_________________________。

（2）进行早期胚胎培养时，需要加入的物质中除了各种营养物质外，还需要添加______等天然成分，早期胚胎培养要置于CO2培养箱中，其气体组成为___________________。

（3）转基因动物的培养需要对胚胎进行移植，胚胎移植技术的优点是________________。

（4）欲获得基因型完全一样的转基因动物，可利用胚胎分割技术，进行胚胎分割应选用的时期是_____________或囊胚期，其中对囊胚期进行分割时要将内细胞团均等分割，目的是___________________________。

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转基因动物是指将特定的外源基因导入动物受精卵或胚胎，使之稳定整合于动物的染色体基因组并能遗传给后代的一类动物。目前培育转基因动物的方法主要有显微注射法、反转录病毒感染法等。请回答：

（1）通过显微注射法培育转基因动物是目前最常用且成功率较高的方法，大致过程包括超数排卵、受精、显微注射、胚胎移植和目的基因的表达与检测。超数排卵阶段常用__________激素对供体母畜进行处理以获得更多的卵子；显微注射前要进行冲卵，冲卵是将__________________________________从子宫冲出的操作，冲卵的生理基础是____________________

（2）通过反转录病毒感染法培育转基因动物是借助病毒将目的基因整合于宿主细胞染色体DNA上的方法。这种方法首先要获得基因表达载体，获得基因表达载体必须的工具酶是___________________________，在表达载体中目的基因插入的位置应在________________________之间；表达载体的碱基序列无法由基因表达产物推知，其原因是____________________________________________。

（3）培育转基因动物时，通常选择____________________作为受体细胞，胚胎移植前，要对母畜进行同期发情处理，其目的是_______________________________________________。

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小鼠弯曲尾（B）对正常尾（b）显性，将一弯曲尾雄鼠与一正常尾雌鼠交配，F1中弯曲尾雌鼠∶正常尾雄鼠=1∶1。遗传学家将一个外源DNA片段导入到F1代弯曲尾雌鼠的体细胞中，利用克隆技术获得一只转基因正常尾小鼠。该DNA片段插入小鼠染色体上的位置有多种可能，下图表示了其中2种。

说明：插入的DNA片段本身不控制具体的性状；小鼠体内存在该DNA片段时B不表达，但b基因的表达不受影响。

请回答有关问题：

（1）控制小鼠尾形的基因位于___________染色体上，子一代雌鼠的基因型是____________。

（2）培育克隆鼠时，先利用____________技术将已导入外源DNA的体细胞的细胞核植入去核的___________细胞，得到重组细胞；然后体外培养、诱导重组细胞，一般发育至___________时期时移植到代孕雌鼠体内进一步发育。

（3）为确定转基因小鼠DNA具体的插入位置，研究者让该转基因小鼠与非转基因正常尾雄性小鼠杂交，统计子代的表现型种类及比例，并进行了以下分析（不考虑交叉互换）：

①若子代_____________，则该DNA片段的插入位置属于第1种可能性；

②若子代_____________，则该DNA片段的插入位置属于第2种可能性。

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小鼠弯曲尾（B）对正常尾（b）完全显性，将一弯曲尾雄鼠与一正常尾雌鼠交配，F1中弯曲尾雌鼠﹕正常尾雄鼠=1﹕1。遗传学家将一个外源DNA片段导入到子一代弯曲尾雌鼠的体细胞中，利用克隆技术获得一只转基因正常尾小鼠。请回答有关问题：

（1）控制小鼠尾形的基因位于____（常/X/Y）染色体上，子一代雌鼠的基因型是____________。

（2）培育该转基因小鼠，需运用核移植技术将含有外源DNA的体细胞的细胞核与去核的________________细胞融合得到重组细胞，培养至早期胚胎后通过胚胎移植技术转移至受体体内。该外源DNA内部含某限制酶的识别序列，该识别序列经限制酶切割后的黏性末端含8个脱氧核苷酸、2个腺嘌呤，则该识别序列含胸腺嘧啶____________个。

（3）已知外源DNA及B基因转录生成的产物之间碱基互补，因此含外源DNA的杂合雌鼠的表现型是____________。

（4）图中的两条长链为B基因的两条单链，若要对B基因进行PCR扩增，选择引物有____________。该过程中需使用热稳定DNA聚合酶以合成子链中的____________键。

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噬菌体展示技术是将编码蛋白质的基因导入噬菌体的基因中，使外源蛋白和噬菌体蛋白融合表达，融合蛋白质随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面的一项技术，具体过程如图所示。下列相关叙述正确的是

A.可用动物细胞代替大肠杄菌培养噬菌体

B.外源基因表达所需要的模板和原料来自宿主细胞

C.子代噬菌体表面的融合蛋白具有特定的生物功能

D.若用35S标记噬菌体外壳，则可在子代噬菌体表面融合蛋白上检测到35S

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噬菌体展示技术是将编码蛋白质的基因导入噬菌体的基因中，使外源蛋白和噬菌体蛋白融合表达，融合蛋白质随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面的一项技术，具体过程如图所示。下列相关叙述正确的是

A.可用动物细胞代替大肠杄菌培养噬菌体

B.外源基因表达所需要的模板和原料来自宿主细胞

C.子代噬菌体表面的融合蛋白具有特定的生物功能

D.若用35S标记噬菌体外壳，则可在子代噬菌体表面融合蛋白上检测到35S

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噬菌体展示技术是将编码蛋白质的基因导入噬菌体的基因中，使外源蛋白和噬菌体蛋白融合表达，融合蛋白质随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面的一项技术，具体过程如图所示。下列相关叙述正确的是

A.可用动物细胞代替大肠杄菌培养噬菌体

B.外源基因表达所需要的模板和原料来自宿主细胞

C.子代噬菌体表面的融合蛋白具有特定的生物功能

D.若用35S标记噬菌体外壳，则可在子代噬菌体表面融合蛋白上检测到35S

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核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA片段）导入动物体细胞内，通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防或治疗相应疾病的一类新型疫苗。研究表明核酸疫苗不仅具有良好的免疫原性与安全性，且由于核酸更易于修饰与改造，较以往蛋白疫苗具有更大的灵活性和更广阔的应用前景。请回答：

（1）研发DNA疫苗时，构建含有病原体抗原基因表达载体的过程中需要用到的工具酶有_____________。

（2）图中所用的载体是_______________，构建基因表达载体的目的是________________，基因表达载体中，驱动病原体抗原基因转录的结构为________________。将该DNA疫苗导入受体细胞的方法是肌肉注射法或__________________。

（3）mRNA疫苗可以由计算机设计、制造并通过高速机器大批量生产。目前用于制造疫苗的RNA有两种，非复制型mRNA和自我扩增型mRNA，从图中可以看出自我扩增型mRNA的优点是可在细胞内_____________。mRNA常被包裹在脂质体颗粒中注射到相关人员的手臂肌肉，脂质体颗粒的作用是____________________。

（4）病毒核酸检测试剂盒通常以病毒独特的基因序列为检测靶标。PCR扩增时每一个循环分为_______________三步，使靶标DNA序列呈指数增加。每一个扩增出来的DNA序列都与预先加入的一段荧光标记_________________结合，产生荧光信号，扩增出来的靶标DNA序列越多，累积的荧光信号就越强。在没有病毒的样本中，因为没有靶标DNA序列扩增，所以就检测不到荧光信号增强。

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下列有关说法错误的是                                                                   （    ）

A．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白，说明外源基因在受体细胞中已表达成功

B．动物细胞融合可以克服远源杂交不亲和障碍，扩大了用于杂交的亲本组合范围

C．植物细胞培养技术，可用于培育无病毒植物、生产食品添加剂、制作人工种子

D．生长因子是某些微生物生长过程中需要额外补充的营养物质

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下列各项生物技术中，理论上对遗传信息改变最小的是

A．经细胞核移植克隆动物

B．导入外源基因培育转基因动物

C．经植物组织培养克隆植物

D．植物体细胞杂交获得杂种植株

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