一种质粒和人的胰岛素基因存在的限制性核酸内切酶的酶切位点（E1表示）如图1所示，a表示标记...

一种质粒和人的胰岛素基因存在的限制性核酸内切酶的酶切位点（E1表示）如图1所示，a表示标记基因，b表示胰岛素基因。现用该种限制性核酸内切酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，不可能出现的是

（    ）

A               B                  C                  D

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右图示一种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E1表示某限制性核酸内切酶的酶切位点。现用该种限制性核酸内切酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，不可能出现的是（    ）

A                B                  C                D

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下图中显示含目的基因的DNA片段、限制性核酸内切酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的切割位点）、四种质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是（　　 ）

A．①④　　　　 B．②③　　　　　 C．①　　　　 D．①③

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限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是-C↓AATTG-和-G↓AATTC-。如图表示四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是(　　 )

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限制酶MunI和限制酶EcoRI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。下图表示四种质粒和目的基因，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因运载体的质粒是（   ）

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转基因抗虫棉的培育过程如图所示。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因（阴影表示）与质粒上有PstI、SmaI、EcoRI、ApaI等限制酶的切割位点（箭头所示），质粒上还有唯一标记基因——抗卡那霉素基因（阴影表示）。有人通过实验，获得的农杆菌细胞有的未被转化，有的被转化。被转化的农杆菌细胞有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的农杆菌。请据此回答：

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（1）构建含抗虫基因的重组质粒A时，应选用的限制酶是________，对________进行切割。

（2）若抗虫蛋白分子是由m条肽链组成的，控制其合成的基因含n个碱基对，氨基酸的平均分子质量为g，则抗虫蛋白的分子质量最大约为__________（不考虑终止密码）。

（3）如果用含有卡那霉素的培养基进行筛选，在上述四种农杆菌中，未被转化的和仅含环状目的基因的农杆菌是不能区分的，其原因是_____________________________________；并且________________的农杆菌也是不能区分的，其原因是___________________________。

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转基因抗虫棉的培育过程如图所示。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因（阴影表示）与质粒上有PstI、SmaI、EcoRI、ApaI等限制酶的切割位点（箭头所示），质粒上还有唯一标记基因——抗卡那霉素基因（阴影表示）。有人通过实验，获得的农杆菌细胞有的未被转化，有的被转化。被转化的农杆菌细胞有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的农杆菌。请据此回答：

（1）构建含抗虫基因的重组质粒A时，应选用的限制酶是________，对________进行切割。

（2）若抗虫蛋白分子是由m条肽链组成的，控制其合成的基因含n个碱基对，氨基酸的平均分子质量为g，则抗虫蛋白的分子质量最大约为__________（不考虑终止密码）。

（3）如果用含有卡那霉素的培养基进行筛选，在上述四种农杆菌中，未被转化的和仅含环状目的基因的农杆菌是不能区分的，其原因是_____________________________________；并且________________的农杆菌也是不能区分的，其原因是___________________________。

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（10分）人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体（见图1）。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答：

（1）此质粒的化学本质是________，它可以作为多种目的基因的（运）载体，原因是________。amp^r和tet^r在基因工程中的主要作用是。

（2）人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。

①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据________推出

________序列，再推出________序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与________重组后，再导入大肠杆菌内。

② 在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少________，不能。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择________作为受体细胞。

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人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体(见图1)。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答问题：

(1)此质粒的化学本质是___________，它可以作为多种目的基因的(运)载体，原因是　　　　　　　　　　　 。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是________________________________________________________________________。

(2)人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。

①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据________推出________序列，再推出________序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与________重组后，再导入大肠杆菌内。

②在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少________，不能________。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择________________作为受体细胞。

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图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRI、BamHI、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是

A.如果用EcoRI对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种

B.如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRI酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRI酶切点有1个

C.为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理

D.如果要将重组DNA导入大肠杆菌细胞，则用氯化钙处理大肠杆菌可以增加其细胞壁的通透性，利于重组DNA的导入

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