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回答下列有关基因工程的问题（7分）
细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源。现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bglB基因）与图28的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶。（质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同）
（1）．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是____________________。
（2）．为避免自身环化并确保bglB基因与图一质粒准确重组，可选用的限制酶是（ ）（2分）
A NdeI和XbaI B NdeI和BamHI
C XbaI D PstI E BamHI
（3）．bglB基因通过 酶与质粒结合形成重组质粒。
（4）．图二培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图三。
据此分析，图二中的[ ]菌落即为纤维素酶产量最高的菌株。
（5）．在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（ ）（多选，2分）
A．仅针对bglB基因进行诱变
B．bglB基因产生了定向突变
C．bglB基因可快速累积突变
D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
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回答有关基因工程的问题
嗜热土壤芽胞杆菌产生的β﹣葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验．
（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是 技术．
如图为质粒限制酶酶切图谱．下表为限制酶的酶切位点．
| 限制酶 | BamHⅠ | HindⅢ | EcoRⅠ | NdeⅠ |
| 识别序列及切割位点 | G↓GATCC | A↓AGCTT | G↓AATTC | CA↓TATG |
（2）如图的质粒上有多个酶切位点，本实验中没有选择XbaI酶切割质粒，原因是 ．
（3）分析如图，可选择两种不同的限制酶 和 切割质粒，以防止质粒自身环化．质粒被切割后，可用 将其与目的基因连接．在动物基因工程中将目的基因导入受体细胞时通常的方法是 ．
（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 ．
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回答下列有关微生物及酶的相关问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即__________、__________和葡萄糖苷酶。
（2）土壤中的某些细菌也能分解纤维素，可以利用以_______为唯一碳源的_______培养基进行分离。在筛选纤维素分解菌的过程中，人们发明了__________法。接种时可以使用______法，方便对纤维素分解菌进行计数。
（3）纤维素被分解后产生的葡萄糖，可以用来酿酒，此过程的反应式是____________________。酿酒过程中通入氧气后酒可能会变酸，这主要是__________（填微生物）发酵引起的，此微生物代谢类型为__________，最适生长温度为__________。
（4）对玻璃器皿等灭菌，常用的方法是__________。各种培养基的配方一般都含有：__________、__________、__________、__________。
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回答下列有关微生物及酶的相关问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即__________、__________和葡萄糖苷酶。
（2）土壤中的某些细菌也能分解纤维素，可以利用_______培养基进行分离，接种时可以使用______法，方便对纤维素分解菌进行计数。
（3）从纤维素分解菌中提取纤维素酶，可以使用__________方法，可以利用__________技术对酶进行处理，能达到反复使用的目的，使用该技术对酶处理时，一般用__________法。
（4）纤维素被分解后产生的葡萄糖，可以用来酿酒，通入氧气后酒可能会变酸，这主要是__________（填微生物）发酵引起的。
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【生物-选修3：现代生物科技专题】 嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展并得到了以下试验结果，如图。据图回答相关问题：
质粒限制酶酶切图谱
（1）已知BglB基因不含图1中限制酶识别序列。PCR扩增bglB基因时，选用______杆菌基因组DNA作模板，进行扩增的前提是要有一段已知BglB基因的核苷酸序列以便根据这一序列合成___________。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入________和_______两种不同限制酶的识别序列。大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________。
（2）根据2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会________________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（填“50”、“60”、“70”、“80”）℃。
（3）在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高BglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_______（多选）。
A.仅针对BglB基因进行诱变 B.BglB基因产生了定向突变
C.BglB基因可快速累积突变 D.BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
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嗜热土壤芽胞杆菌产生的β—葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
⑴PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模板。
⑵下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。
⑶大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 。
Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响
⑷据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 （单选）。
A．50℃ B．60℃ C．70℃ D．80℃
Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率，经过筛选，可获得能表达热稳定性高的BglB酶的基因。
⑸与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中 （多选）
A．仅针对bglB基因进行诱变
B．bglB基因产生了定向突变
C．bglB基因可快速积累突变
D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
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嗜热土壤芽胞杆菌产生的β－葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
(1)PCR扩增BglB基因时，选用________基因组DNA作模板。
(2)上图为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入________和________不同限制酶的识别序列。
(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_______________________。
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植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。回答下列问题：
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、________四类，为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：
| 酵母膏 | 无机盐 | 淀粉 | 纤维素粉 | 琼脂 | 刚果红溶液 | 水 |
| 培养基甲 | + | + | + | + | - | + | + |
| 培养基乙 | + | + | + | - | + | + | + |
注：“+”表示有，“－”表示无。
（2）据表判断，培养基甲________（填能或不能）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是________。
（3）据表判断，培养基乙_________填能或不能）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_________。
（4）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成____色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的____。
（5）纯化菌株时，通常使用的划线工具是____。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________。
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纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，能被土壤中某些微生物分解利用。请回答：
（1）纤维素分解菌能产生________和葡萄糖苷酶以分解纤维素。其中，葡萄糖苷酶的作用是_________。
（2）利用刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理是___________，可通过培养基上_________来筛选纤维素分解菌。
（3）筛选纤维素分解菌时，应选择的土壤作为样品。若要对样品中的纤维素分解菌进行计数，可用____________法接种，该方法能够统计活菌数目的原因是______________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
（1）PCR扩增bglB基因时，选用__________基因组DNA作模板。
（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入____________和___________不同限制酶的识别序列。
（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________________。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会______________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______________（单选）。
A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。
（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_____________（多选）。
A.仅针对bglB基因进行诱变 B.bglB基因产生了定向突变
C.bglB基因可快速累积突变 D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变