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(10分)回答有关基因工程的问题：
(1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生________末端，
也可能产生______末端。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因、启动子、________、
和________。其中启动子的作用是________识别和结合的部位，驱动基因转录。
（3）在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；（4）为了检测胰岛素基因是否导入受体细胞，检测方法是采用技术。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素，常用________技术。
(5)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________ 上。
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回答有关基因工程的问题：（9分）
（1） 构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_ 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的________片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成_________，常用抗原-抗体杂交技术。
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的 _ 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_________上。
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（14分）回答有关生物工程的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生__末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_（相同不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供________特异性识别结合位点，驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用___处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与__________杂交，该杂交技术称为_________。
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将_____插入植物细胞的染色体___上。
(4)家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
(5)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。
(6)利用生物反应器培养家蚕细胞时，细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
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回答基因工程的有关问题：(共9分)
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）黏性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因等，其中RNA聚合酶识别和结合的部位是_____。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入。为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用放射性同位素标记的______ 作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素，常用______________ 技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上。
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（11分）下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。过程②必需的酶是 酶，过程③必需的酶是 酶。
（2）在利用AB获得C的过程中，必须用 切割A和B，使它们产生相同的粘性末端，再加入 ，才可形成C。利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是__ ___。
（3）为使过程⑧更易进行，可用 （药剂）处理D。
（4
）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___ ___。为了检测胰岛素基因请转录的mRNA是否翻译成_____，常用抗原-抗体杂交技术。（5）如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后通过农杆菌转化作用将目的基因插入植物细胞的______上。
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（11分）下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。过程②必需的酶是________ 酶，过程③必需的酶是________酶。
（2）在利用AB获得C的过程中，必须用切割A和B，使它们产生相同的粘性末端，再加入 ，才可形成C。利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_____________。
（3）为使过程⑧更易进行，可用________（药剂）处理D。
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______________。为了检测胰岛素基因请转录的mRNA是否翻译成_____，常用抗原-抗体杂交技术。
（5）如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后通过农杆菌转化作用将目的基因插入植物细胞的______上。
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我国在上世纪90年代初,利用基因工程完成了人a-干扰素的合成，回答下列有关基因工程的问题:
(1)在构建基因表达栽体时，用不同的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端，也可能产生 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进连接.则应选择能使二者产生 (填“相同”或“不同”）黏性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人a-干扰素时,构建的表达载体含有人a-干扰素基因及其启动子等,其中启动子的作用是 。在将表达载体导入大肠杆菌时,常用 处理大肠杆菌,以利于表达载体进入。
(3)为了检测人a-干扰素基因是否转录出了 mRNA.可用标记的人a-干扰素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为 。为了检测人a-干扰素基因转录的mRNA是否翻译成 ，常用抗原---抗体杂交技术。
(4)我国也成功地利用基因工程技术培育出了抗虫棉，将抗虫基因通过农杆菌转化法导入棉花细胞时,先要将抗虫基因插入农杆菌Ti质粒的 中，然后用该农杆菌感染棉花细胞，通过DNA重组将目的基因插入棉花细胞的 上。
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下面是获得抗虫棉的技术流程示意图。有关叙述错误的是
A．基因表达载体构建过程中蒲要限制酶和DNA连接酶
B．图中愈伤组织分化产生的再生植株的基因型一般都相同
C．卡那霉素抗性基因中含有相关限制酶的识别和切割位点
D．转基因抗虫棉有性生殖产生的部分后代不能稳定保持抗虫性状
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒。回答下列问题：
（1）用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_________之间相连的化学键，该化学键为_________。
（2）采用PCR扩增目的基因的原理是_________。图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有_________两种引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
（3）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时造成_________。不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_________。
（4）目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为_________；要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_________技术。
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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段。
（4）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。
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）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___