乳酸菌是泡菜制作中起主要作用的菌群，某科研小组从泡菜液中分离、筛选纯种乳酸菌，对其功能进行...

乳酸菌是泡菜制作中起主要作用的菌群，某科研小组从泡菜液中分离、筛选纯种乳酸菌，对其功能进行相关研究，为改进传统泡菜生产工艺提供技术参考。

（1）乳酸菌菌种的分离与纯化：

取泡菜发酵汁进行　　　　　　 操作，得到、、、、、倍的稀释液。选择合适的稀释度样液加入10mL乳酸菌分离培养基（MRS培养基），凝固后再注入5mL水琼脂培养基，造成　　　　 （需氧/厌氧）环境，37℃培养2～3天，根据　　　 的形状、大小、隆起程度等特征，进行反复分离、纯化至纯菌种。整个操作过程需在　　　　　　 条件下进行。

（2）产强酸菌株的筛选：

利用产酸菌在含的培养基上产生溶解圈的原理，将上述菌种接种到含的MRS培养基上，经过培养，挑选　　　　　 的菌落，进一步纯化。

（3）产强酸菌株的功能研究，结果如下图：

人工接种乳酸菌有利于　　　　　　 （促进/抑制）亚硝酸盐的生成。泡菜制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素还有时间、　　　　　 和　　　　　　　 等。

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乳酸菌是泡菜制作中起主要作用的菌群，某科研小组从泡菜液中分离、筛选纯种乳酸菌，对其功能进行相关研究，为改进传统泡菜生产工艺提供技术参考。

（1）乳酸菌菌种的分离与纯化：

取泡菜发酵汁进行　　　　　　 操作，得到、、、、、倍的稀释液。选择合适的稀释度样液加入10mL乳酸菌分离培养基（MRS培养基），凝固后再注入5mL水琼脂培养基，造成　　　　 （需氧/厌氧）环境，37℃培养2～3天，根据　　　 的形状、大小、隆起程度等特征，进行反复分离、纯化至纯菌种。整个操作过程需在　　　　　　 条件下进行。

（2）产强酸菌株的筛选：

利用产酸菌在含的培养基上产生溶解圈的原理，将上述菌种接种到含的MRS培养基上，经过培养，挑选　　　　　 的菌落，进一步纯化。

（3）产强酸菌株的功能研究，结果如下图：

人工接种乳酸菌有利于　　　　　　 （促进/抑制）亚硝酸盐的生成。泡菜制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素还有时间、　　　　　 和　　　　　　　　　 等。

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泡菜腌制过程中硝酸还原菌能产生亚硝酸盐，而一些乳酸菌合成的亚硝酸盐还原酶，能够显著降低泡菜中亚硝酸盐的含量。研究小组从传统工艺制作的泡菜坛中取样，筛选亚硝酸盐还原酶高产乳酸菌菌株，实验过程如下。请回答下列问题：

（1）实验中需制备泡菜样品处理液，制备过程中使用氢氧化铝乳液的目的是__________。

（2）将处理过的泡菜发酵液稀释后涂布在含溴甲酚绿（遇酸变色）的__________（填“选择”或“鉴别”）培养基上，__________（填“需氧”或“厌氧”）培养一段时间后，挑取周围变色的________在________上临时保存。

（3）再将临时保藏的各菌种分别接种到含________的液体培养基中，培养一段时间。培养液离心后取上清液，在盐酸酸化条件下依次加入对氨基苯磺酸、N-1 -萘基乙二胺盐酸盐试剂，形成________色染料，选出显色最________（填“深”或“浅”）的菌落即为亚硝酸盐还原酶高产乳酸菌菌株。

（4）取样的各泡菜坛中亚硝酸盐含量存在差异，可能的原因是________（答出2点）。

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泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。

根据实验研究，得到相关数据如下图。

（1）与酵母菌相比，乳酸菌最主要的结构特点是___　　 _　 _。

（2）制作泡菜的原理是___　　 _；制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是___　　 _　 。

（3）据图分析，第8天后的泡菜更适于食用，理由是___　　 _　 。可用___　　 _　 法检测泡菜中亚硝酸盐的含量，因为亚硝酸盐能与某些化学物质发生反应后形成___　　 _　 色染料。

（4）若要测定泡菜中乳酸菌的数量，可在显微镜下用___　　 _　　 直接计数；泡菜制作过程中pH值呈下降趋势，原因是___　　 _　 。

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某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌_______________。

（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物______________。

（3）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于______（填“选择”或“鉴别”）培养基。

②小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基。在50℃左右操作的原因是___________，加盖一层固体培养基的目的是_______________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的___________。

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某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌____________________________。

（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物______________。

（3）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于______（填选择或鉴别）培养基。

②小组成员在分离纯化乳酸菌时，用______将泡菜液进行梯度稀释后，取0．1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层透明的固体培养基。 加盖一层透明的固体培养基的目的是_____________________________________________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的___________。

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某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌_______________。

（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物______________。

（3）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于______（填“选择”或“鉴别”）培养基。

②小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基。在50℃左右操作的原因是___________，加盖一层固体培养基的目的是_______________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的___________。

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某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌_______________。

（2）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物______________。

（3）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于______（填“选择”或“鉴别”）培养基。

②小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基。在50℃左右操作的原因是___________，加盖一层固体培养基的目的是_______________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的___________。

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泡菜的制作离不开乳酸菌，但酵母菌对泡菜的风味和品质也有着重要影响，为研究泡菜发酵过程中酵母菌种群数量的动态变化和pH变化，科研人员选用3份泡菜“老盐水”Y1、Y2、Y3和新鲜萝卜进行了以下实验。请完善下列实验过程并分析回答：

(1)制作泡菜

______________________

(2)酵母菌的分离、纯化及鉴定

无菌操作下每天取泡菜盐水25mL，加入________mL无菌水中，将样品稀释十倍，再依次稀释成102、103、104、105倍稀释液，分别接种涂布，置于28℃恒温培养箱中培养24h，观察菌落特征，并选取培养基上的________用于DNA分子鉴定。

(3)菌落计数和盐水中的pH值测定

选取便于计数的培养基对不同种酵母菌的菌落分别计数，用此方法计数和直接在显微镜下计数菌体相比，得到的数值往往偏小，原因有________，________。同时，每天用精密pH计测定盐水中的pH值。

(4)结果分析

实验持续15天，部分实验结果如下：

①发酵后期，膜璞毕赤酵母数量减少，甚至消失，从种间竞争的角度分析原因可能是__________________________________________________。

②采用Y1老盐水泡制萝卜10d后，泡菜表面出现白膜(俗称“生花”)，这可能与Y1发酵液中后期________较多有关，其存在时间较长的原因可能是__________________________________________________。

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某学校有三个兴趣小组，第一小组用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌；第二小组从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌单菌落；第三小组从土壤中筛选产脲酶细菌。请回答下列问题：

（1）第一小组分离纯化乳酸菌时，首先用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释的理由是____________________。分离纯化乳酸菌所用固体培养基中加入____________可中和产生的乳酸，分离纯化时选择具有透明圈的菌落作为候选菌。

（2）第二小组土壤采样后，通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，之后，在培养基中加入____________进行颜色反应直接筛选纤维素分解菌，该培养基从功能上看属于_________，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行_________的实验。

（3）第三小组选择培养基应该以__________为唯一氮源，鉴别培养基需添加__________作为指示剂。在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品0．1mL，培养一段时间统计菌落数量。该过程采取的接种方法是__________。

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