微生物的分离、培养和计数是现代生物工程应用中的重要环节。图为大肠杆菌分离和
培养过程中部分操作示意图。请分析回答下列问题：
（1）实验过程中对培养基、培养皿、实验操作者的双手所采用的灭菌、消毒方法依次是________、________、________。
（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。
（3）图示是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是________。
（4）关于图示的操作方法和结果，叙述正确的是________。
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌。
B．划线操作须在火焰上进行。
C．在5区域中才可以提到所需菌落。
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌。
（5）若要培养具有耐高和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养的基础上，注意________和，其目的是________。
高三生物综合题中等难度题
微生物的分离、培养和计数是现代生物工程应用中的重要环节。图为大肠杆菌分离和
培养过程中部分操作示意图。请分析回答下列问题：
（1）实验过程中对培养基、培养皿、实验操作者的双手所采用的灭菌、消毒方法依次是________、________、________。
（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。
（3）图示是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是________。
（4）关于图示的操作方法和结果，叙述正确的是________。
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌。
B．划线操作须在火焰上进行。
C．在5区域中才可以提到所需菌落。
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌。
（5）若要培养具有耐高和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养的基础上，注意________和，其目的是________。
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大肠杆菌的纯化包括制备牛肉膏蛋白胨培养基和纯化大肠杆菌两个环节，试分析回答：
(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_______、______和渗透压等条件。
(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行______；操作者的双手需要进行清洗和_______；空气中的细菌可用_______杀灭。
(3)通常，对培养获得的纯菌种还可以依据________的_________、_______等特征对细菌进行初步初步的鉴定和分类。要进一步鉴别大肠杆菌，还要根据微生物的代谢特点，在培养基中加入____________。
(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_____________.
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大肠杆菌的纯化包括制备牛肉膏蛋白胨培养基和纯化大肠杆菌两个环节，试分析回答：
(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_______、______和渗透压等条件。
(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_______；操作者的双手需要进行清洗和_______；空气中的细菌可用_______杀灭。
(3)通常，对培养获得的纯菌种还可以依据_______、_______的等特征对细菌进行初步初步的鉴定和分类。
(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是____________________________________________ 。
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某生物活动小组为测定当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作如下：
请分析并回答下列问题：
（1）为了筛选和分离尿素分解菌，培养基中需要添加____________作为唯一氮源，除了必需的营养物质外，培养基中还需要添加____________。尿素分解菌能产生脲酶，把尿素分解成____________。
（2）在上述系列梯度稀释时，吸取前一试管（或锥形瓶）中lmL菌液到后一试管的工具是____________，该工具在使用前需要进行____________灭菌。
（3）实验结果：3号试管涂布的三个平板的菌落数为560、601、24，4号试管涂布的三个平板的菌落数为57、59、61，5号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该10克土壤样品中含有尿素分解菌的估算数目是____________。通过该方法计算出来的数值往往比实际值低，原因是____________。在进行实验时，除了涂布的三个平板外，还需要至少准备一个空白培养培养基做对照，目的是____________。
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微生物培养与分离技术是生物学中重要的实验技术。根据有关微生物的知识，分析回答问题：
（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和A：__ __、B:___ __等过程，上述过程中需要在超净工作台上操作的是_______。
（2）纯化菌种时为得到单菌落，常采用的接种方法是平板划线法和D:___ __法，其中需用接种环进行操作的是__________。
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌目的，平板内固体培养基应以尿素作为唯一的_ __，培养基中加入_____ ___指示剂培养后，若变红以鉴定其中含有所需细菌。若筛选纤维素分解菌，在选择培养后须进行E:___ _和F:___ ___过程，一般通过观察_____ __的有无挑选出所需菌种。
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[生物一选修1:生物技术实践]
某小组开展“市售鲜猪肉中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析”的研究，进行了相关实验操作，回答下列问题：
（1）菌株的分离纯化:切取鲜猪肉表层样品接入蛋白胨大豆肉汤培养基中，放在37℃摇床振荡培养18h。取肉汤接种于琼脂平板培养基上，培养后再挑取单菌落，接种培养，培养一段时间后，再次挑取单菌落接种于固体培养基上，多次重复此步骤。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的______________；操作过程中液体培养的目的是______________，反复接种固体培养基的目的是____________________________。
（2）下面是纸片扩散法对猪大肠杆菌的耐药性实验。
步骤1:用打孔器制成直径约6 mm的圆形滤纸片，浸入一定浓度的氨苄西林，烘干；
步骤2:取含大肠杆菌的菌液均匀涂布于______________上；
步骤3：在培养基上，每隔一定距离贴一片含药物的圆形滤纸片，培养，观察。
分析与评价：
①观察发现，在每个纸片周围都形成了抑菌圈，其直径的大小表示大肠杆菌对氨苄西林的敏感性。抑菌圈直径越大，敏感性越______________（填“高”或“低”）。
②发现在抑菌圈外长满多种不同形态的菌落，其原因可能是_________________________。
③欲比较五倍子和黄连提取液对猪大肠杆菌的抑制作用，为治疗提供依据。请写出实验思路:________。
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无菌操作是微生物接种技术的关键；传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：
（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理 。
①皮肤 ②饮用水 ③牛奶 ④注射器 ⑤培养皿
⑥接种环 ⑦培养基 ⑧果汁 ⑨酱油 ⑩手术刀
A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩ C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部
（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整 ，接种前要进行 ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下图是利用 法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：
① 每次划线前要 ；
② 冷却后从上一区划线末端开始划；
③ 首尾区 。
（4）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被
污染。对固体培养基应采用的检测方法是 ，观察培养基上是否有菌落产生。
（5）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是 。
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有关微生物的培养与应用，下列说法正确的是（ ）
A.通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落
B.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段
C.接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格灭菌处理
D.某一稀释度的3个平板的菌落数依次为M1、M2、M3，以M2作为该样品菌落估计值
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微生物培养与分离技术是生物中重要的实验技术．根据有关的微生物知识，回答下列问题：
（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和 、 等过程．上述过程中，需要在超净工作台上操作的是 ．
（2）纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是 和 ；在对培养液中酵母菌的种群数量进行统计时，计数的方法是 ．
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应选择尿素作为唯 ；培养基中加入指示剂 以鉴定其中是否含有能分解尿素的细菌．
（4）若要筛选分解纤维素的细菌，在土壤取样、选择培养后，需进行 和 操作，通过染色并观察 的有无挑选出所需菌种．
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胰岛素是治糖尿病的重要药物。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素的部分过程示意图。请据图分析回答下列问题
（1）过程②称为______。若以某种生物发育的某时期的mRNA经过程②产生的多种互补DNA片段，与载体结合后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群称为这种生物的_______。
（2）____（能/不能）用人体皮肤细胞来完成①过程，简述理由：_______________。
（3）与基因组文库的基因相比，由过程④获得的目的基因中不包含___________。
（4）在基因工程操作步骤中，获得A的步骤称为________________，A的名称是___________。
（5）若目的基因中有a个碱基对，其中鸟嘌呤b个，则过程③扩增循环3次，至少提供胸腺嘧啶____个。
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