（12分）为了探究苦马豆素（SW）对肝癌细胞体外生长的作用，研究员做了以下实验：
材料与用具：小鼠肝癌组织、SW、rpmi-1640培养液（用于培养癌细胞）、生理盐水、活细胞检测仪、培养皿等（说明：对动物细胞的培养过程和检测方法不做具体要求）
（1）完善实验步骤：
①配制细胞悬液：用胰蛋白酶将小鼠肝癌组织消化成单个细胞，加入________________配制成单细胞悬液，随机均分为若干组，并各组测定初始细胞数；
②实验分组： ；
③培养：以上各级置于37oC、5％的二氧化碳培养箱中分别培养；
④检测与处理：分别在24h、48h、72 h时取样检测各组存活的细胞数，求细胞存活率(细胞存活率=实验组/对照组×l00％)。请分析回答：
（2）请你设计一张表格，用以记录和处理实验数据。
（3）下图表示本实验结果的坐标曲线图，据图你能得出结论是___________。
高三生物综合题中等难度题
（12分）为了探究苦马豆素（SW）对肝癌细胞体外生长的作用，研究员做了以下实验：
材料与用具：小鼠肝癌组织、SW、rpmi-1640培养液（用于培养癌细胞）、生理盐水、活细胞检测仪、培养皿等（说明：对动物细胞的培养过程和检测方法不做具体要求）
（1）完善实验步骤：
①配制细胞悬液：用胰蛋白酶将小鼠肝癌组织消化成单个细胞，加入________________配制成单细胞悬液，随机均分为若干组，并各组测定初始细胞数；
②实验分组： ；
③培养：以上各级置于37oC、5％的二氧化碳培养箱中分别培养；
④检测与处理：分别在24h、48h、72 h时取样检测各组存活的细胞数，求细胞存活率(细胞存活率=实验组/对照组×l00％)。请分析回答：
（2）请你设计一张表格，用以记录和处理实验数据。
（3）下图表示本实验结果的坐标曲线图，据图你能得出结论是___________。
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苦马豆素（SW）最早是从植物灰苦马豆中分离获得，为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，许多学者做了大量研究，请根据以下实验研究过程及研究结果回答问题。
①取小鼠肝癌Hepal-6细胞
②制成单细胞悬液，接种于多孔板，加入等量培养液，每组设5个平行孔
③于37℃、5%CO2培养箱中分别培养24h
④加入等量不同浓度SW溶液，于37℃、5%CO2培养箱中分别培养
⑤分别在24h、48h、72h时吸取培养液，观察结果，得到不同浓度SW对细胞存活率影响曲线（图1）
⑥将培养48h的培养液离心，细胞染色，在荧光显微镜下观察拍照，记录正常细胞和凋亡细胞数目，并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达量状况，汇总统计结果（表1）
（1）实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液，于37℃、5%CO2培养箱中培养的目的是____________________________________。
（2）实验中对照组的处理方法应为_____________________________，利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了_____________________________________。
（3）分析图1中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞作用效果的特点是：
①___________________________________________________________；
②____________________________________________________________。
（4）表1结果说明SW可以诱发细胞___________________，从分子水平上分析，SW可以导致癌细胞内__________的合成量增加，该基因表达的过程可以表示为______________________。
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（8分）苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得，为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，许多学者做了大量研究，实验过程及实验结果如下：
①取小鼠肝癌Hepal-6细胞。
②制成单细胞悬液，等量接种于多孔板，加入等量培养液，每组设5个平行孔。
③于37℃、5％CO2培养箱中培养24 h。
④加入等量不同浓度的SW溶液，于37℃、5％CO2培养箱中培养。
⑤分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液，观察记录结果，得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线如图所示。
⑥将培养48h的培养液离心，细胞染色，在荧光显微镜下观察拍照，记录正常细胞和凋亡细胞的数目，并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况，汇总统计结果如下表。
培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达状况
| SW（μg/ml） | 癌细胞数目 | 凋亡细胞数目 | Bax蛋白 | Bcl-2蛋白 |
| 2 | + | ++++ | ++++ | + |
| 1 | ++ | +++ | +++ | ++ |
| 0.5 | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 0 | ++++ | + | + | ++++ |
注：“+”的数量表示相对值的大小
回答下列问题：
（1）实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液，于37℃、5％CO2培养箱中培养的目的是 。培养箱中要有适量的无菌空气，原因是 。肝癌细胞悬液中细胞有悬浮生长的特征，可能的原因是 。
（2）实验中利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了 。
（3）分析图中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是：①
；② 。
（4）表中结果说明SW可以诱发细胞 ，从而抑制肿瘤细胞生长，从分子水平上分析，SW可能是导致癌细胞内 的合成量增加。
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苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得，为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，许多学者做了大量研究，实验过程及实验结果如下：
①取小鼠肝癌Hepal-6细胞。
②制成单细胞悬液，等量接种于多孔板，加入等量培养液，每组设5个平行孔。
③于37℃、5％CO2培养箱中培养24 h。
④加入等量不同浓度的SW溶液，于37℃、5％CO2培养箱中培养。
⑤分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液，观察记录结果，得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线如图所示。
⑥将培养48 h的培养液离心，细胞染色，在荧光显微镜下观察拍照，记录正常细胞和凋亡细胞的数目，并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况，汇总统计结果如下表。
培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达状况
| SW（μg/ml） | 癌细胞数目 | 凋亡细胞数目 | Bax蛋白 | Bcl-2蛋白 |
| 2 | + | ++++ | ++++ | + |
| 1 | ++ | +++ | +++ | ++ |
| 0.5 | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 0 | ++++ | + | + | ++++ |
注：“+”的数量表示相对值的大小
回答下列问题：
（1）实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液，于37℃、5％CO2培养箱中培养的目的是 。培养箱中要有适量的无菌空气，原因是 。肝癌细胞悬液中细胞有悬浮生长的特征，可能的原因是 。
（2）实验中利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了 。
（3）分析图中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是：① ；② 。
（4）表中结果说明SW可以诱发细胞 ，从而抑制肿瘤细胞生长，从分子水平上分析，SW可能是导致癌细胞内 的合成量增加。
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苦马豆素(SW)因从灰苦马豆中分离出来而得名，被认为是“未来的肿瘤治疗药物”。以下是相关的实验研究过程及结果。
①将等量的小鼠肝癌Hepal－6细胞悬液，分别接种于若干个含有等量培养液的培养瓶中；
②将培养瓶放于37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h，静置、去除上清液；
③分别加入等量但含不同浓度SW的培养液，于37 ℃、5% CO2培养箱中继续培养；
④分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液，观察结果，得到不同浓度SW对细胞存活率影响曲线如图所示。
请回答下列问题。
(1)培养箱中5% CO2的作用是______________________________________。
(2)处于间期的肝癌Hepal－6细胞，其分子水平的主要变化是________________________________________________________________。
(3)步骤③中需要设置对照组，对照组的处理方法应为________。步骤③中每个实验组设置5个培养瓶同时进行培养，计数后统计平均值，这是为了________________，使实验结果更准确。
(4)分析图中曲线可知，SW对肝癌Hepal－6细胞作用效果的特点是①______________________________________________________________；
②__________________________________________________________。
(5)将培养48 h的培养液离心，去除上清液后经过一系列的处理及分析，得到培养48 h细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl－2的表达量如表所示：
| SW | 癌细胞数目 | 凋亡细胞数目 | Bax蛋白 | Bcl－2蛋白 |
| 2/(μg·mL－1) | ＋ | ＋＋＋ | ＋＋＋＋＋ | ＋ |
| 1/(μg·mL－1) | ＋＋ | ＋＋＋ | ＋＋＋ | ＋＋ |
| 0.5/(μg·mL－1) | ＋＋＋ | ＋＋ | ＋＋ | ＋＋＋ |
| 0/(μg·mL－1) | ＋＋＋＋ | ＋ | ＋ | ＋＋＋＋ |
注：“＋”的数量表示相对值的多少
据此推测，SW可能是通过诱发癌细胞________来抑制肿瘤生长的，其原因可能是SW促进了癌细胞内________________的表达。
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（8分）苦马豆素（SW）是从灰苦马豆中分离出来而得名，被认为是“未来的肿瘤治疗药物”。以下是相关的实验研究过程及结果：
①将等量的小鼠肝癌Hepal-6细胞悬液，分别接种于若干支含等量培养液的培养瓶中。
②将培养瓶放于37℃、5%CO2培养箱中培养24h，静置、去除上清液；
③分别加入等量但含不同浓度SW的培养液，于37℃、5%CO2培养箱中继续培养；
④分别在24h、48h、72h时吸取培养液，观察结果，得到不同浓度SW对细胞存活率影响曲线（图）。
请回答：
（1）处于间期的肝癌Hepal-6细胞，其分子水平的主要变化是 。
（2）③实验要设置对照组，对照组的处理方法应为 。步骤③中每个实验组设置5个培养瓶同时进行培养，计数后统计 ，这是为了 ，使实验结果更可信。
（3）分析图1中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞作用效果的特点是：
① ，对细胞生长（存活）的抑制作用越强；
② ，对细胞生长（存活）的抑制作用越强。
（4）将培养48h的培养液离心，去除上清液后经过一系列的处理及分析，得到下表结果：
表：培养48h细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量
注：“＋”的数量表示相对值的多少
据此推测，SW可能是通过诱发癌细胞 来抑制肿瘤生长的，其原因可能是SW促进了癌细胞内基因的表达。
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某研究所以马尾藻岩藻聚糖(SF)为研究对象，体外培养小鼠肉瘤细胞S180，做抗肿瘤活性实验的研究。下列为部分实验步骤与结果。
实验步骤：
①将S-180肿瘤细胞以RPMI-1640为培养液(含小牛血清、青霉素和链霉素)，在5%CO2培养箱中培养。
②将上述培养过的S-180肿瘤细胞经酶消化，按1×103～1×105个·mL－1接种到96孔培养板，适宜条件下培养24h、48h、72h、96h后，以MTT法(又称比色法，一种检测细胞存活和生长的方法)于波长490 nm处测定OD值，结果如下(图1)。
③在适宜的培养条件和恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度下，研究不同浓度(0mg·mL－1、0．1mg·mL－1、0．5mg·mL－1、1mg·mL－1、2mg·mL－1、4mg·mL－1、8mg·mL－1、10mg·mL－1、15mg·mL－1、20mg·mL－1、25mg·mL－1、30 mg·mL－1)的SF对S-180肿瘤细胞增殖的抑制情况，96 h后以MTT法于波长490 nm 处测定OD值，结果如下(图2)。实验结果：
请回答下列问题：
（1）步骤①中以RPMI-1640为培养液培养S-180肿瘤细胞的原理是________。添加一定量小牛血清的目的是____________________________。
（2）步骤②中“消化”所使用的酶是________，为减少OD值测定的误差，应注意________________。
（3）已知在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，由图1可知步骤③中恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度为____________。
（4）图2实验结果表明，在一定范围内SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈________(选填正相关 或 负相关)，当SF浓度达到________时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。
（5）除SF浓度外，还有其他因素会影响SF抑制S-180肿瘤细胞的增殖，请你就此提出相关研究课题(只要求写出课题名称)：____________________________。
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某研究所以马尾藻岩藻聚糖（SF）为研究对象，体外培养小鼠肉瘤细胞S180，做抗肿瘤活性实验的研究。下列为部分实验步骤与结果。
实验步骤：
①将S180肿瘤细胞以RPMI1640为培养液，在5%CO2培养箱中培养。
②将上述培养过的S180肿瘤细胞经酶消化，按1×103～1×105个·mL-1接种到96孔培养板，适宜条件下培养24h、48h、72h、96h后，以MTT法（又称比色法，一种检测细胞存活和生长的方法）于波长490nm处测定OD值，结果如图1。
③在适宜的培养条件和恰当的S180肿瘤细胞接种浓度下，研究不同浓度（0mg·mL-1、0．1mg·mL-1、0．5mg·mL-1、1mg·mL-1、2mg·mL-1、4mg·mL-1、8mg·mL-1、10mg·mL-1、15mg·mL-1、20mg·mL-1、25mg·mL-1、30mg·mL-1）的SF对S180肿瘤细胞增殖的抑制情况，96h后以MTT法于波长490nm处测定OD值，结果如图2。
请回答下列问题：
（1）步骤①中以RPMI1640为培养液培养S180肿瘤细胞的原理是__________。培养液中除细胞所需的营养物质之外，通常还添加一定量的__________，以防培养过程中的污染。
（2）步骤②中“消化”所使用的酶是__________，为减少OD值测定的误差，应注意__________。
（3）已知在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，由图1可知步骤③中恰当的S180肿瘤细胞接种浓度为__________个·mL-1。
（4）图2实验结果表明，在一定范围内SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈__________（选填“正相关”或“负相关），当SF浓度达到__________mg·mL-1时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。
高三生物综合题困难题查看答案及解析
物质X本身不影响细胞的生长，但具有对抗生长激素对细胞生长的影响。为验证物 质X的作用，请根据以下提供的实验材料与用具，提出实验思路，预测实验结果并进行分析。
材料与用具:小鼠肝细胞悬液、动物细胞培养液、生长激素、物质X、胰蛋白酶、C02培养箱、培养瓶若干、血细胞计数板、显微镜等。
（要求与说明：细胞计数的具体操作过程不作要求；答题时不考虑加入生长激素和物质X后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力，只进行原代培养且培养条件适宜。）
请回答:
（1）实验思路：
（2）预测实验结果（用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示）
（3）分析与讨论：
①生长激素具有促进蛋白质的合成，还能通过促进__________刺激细胞的生长。
②根据物质X具有对抗生长激素的特性，生长激素分泌过多的幼年个体，可通过注射适量的物质X预防______________________________（填某种病症）。
高三生物综合题极难题查看答案及解析
某科研单位研制出一种新型药物P，能有效抑制肝癌细胞的增殖，但不知道对造血干细胞的增殖是否有副作用。为验证其疗效并探究其副作用，请你利用以下材料和用具，完成实验步骤，并用柱状图的形式呈现实验结果。（12分）
材料和用具：已知数量的肝癌细胞和造血干细胞、动物细胞培养液、用生理盐水配置的药物P、生理盐水、动物细胞培养瓶等。（注：肝癌细胞与造血干细胞的具体计数方法不作要求。）
（1）实验步骤：
①________。
②。
③将上述细胞培养瓶放在相同且适宜的条件下培养一段时间。
④________。
（2）分析药物P对肝癌细胞和造血干细胞可能的影响效果，请在坐标系中以柱状图的形式呈现可能的结果。
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