-
P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与甲图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌中获得基因工程菌。甲图中mel基因表达能使白色菌落变成黑色，aacCI是庆大霉素（抗生素）抗性基因。甲图中箭头位置是不同限制酶的切割位点，乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题：
(l)甲图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的____酶代替，原因是____。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）在____酶的作用下形成重组质粒。
(2)经测定图甲质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，据此推测，目的基因的长度应为____kb。基因表达载体中必须含有启动子，它的作用是____。
(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种____的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需要接种到含有_____的固体培养基上，选择颜色为____的菌落扩大培养，进而筛选出所需的工程菌。
-
（二）现代生物技术
海洋石油污染正引起广泛关注，利用基因工程菌进行生物降解具有巨大的应用潜力。P450是石油降解的关键酶，用SalI和NdeⅠ联合酶切获得的P450基因，与甲图所示的质粒（pCom8）重组，导入土著菌种Y9，获得了基因工程菌P450/Y9。甲图中mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的菌落变成黑色，aacCl是庆大霉素（一种抗生素）抗性基因，限制酶NdeⅠ、XhoⅠ和SspⅠ在原质粒上均只有一个酶切位点，数字表示酶切位点间的碱基对数。乙图表示几种限制酶的识别序列和切割位点。
1.上述基因工程中的受体细胞是________。
2.原质粒需用限制酶________________作用后，才能与________在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。
经测定原质粒为7.6kb（1kb为1000个碱基对），重组质粒经NdeⅠ、SspⅠ联合酶切后获得了6.0和1.2kb的两个片段，则目的基因的长度为________kb。
3.由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，所以需要经过________才能获得工程菌。操作的大致思路是：
第一步，配制培养基。除下表中的成分外，还必须添加________和________。
第二步，晶待检菌液用________法接种在第一步配制的培养基上。
第三步，选择________色菌落扩大培养即可获得所需的工程菌。
| 蛋白胨 | 酵母浸膏 | NaCl | KCl | MgCl2 | H2O | pH |
| 20.0 g | 5.0 g | 0.5 g | 0.2 g | 1.0 g | 1000 mL | 7.0 |
为检测基因工程菌降解石油的能力，科研人员做了如下4组实验，测定不同时间各组的石油降解率，实验结果见图。
A组：单独使用Y9
B组：单独使用P450/Y9
C组：联合使用Y9、W3、F9、X1四种菌种
D组：联合使用P450/Y9、W3、F9、X1四种菌种
4.据图分析以下说法正确的是________（多选）。
A. 单独使用P450/Y9对石油的降解能力比单独使用Y9略强
B. 作用时间越长，P450/Y9对石油降解的能力越强
C. 联合使用时，P450/Y9能显著增加四种菌的整体降解石油的能力
D. 为达到更好的效果，最好单独使用基因工程菌P450/Y9
-
WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达，WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白，利用基因工程技术设计引物，其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点，反向引物5′含有XhoI酶切位点。将WWP2基因与相应载体构建重组质粒导入人胚肾细胞。回答下列问题：
(1)利用上述的引物，以肺癌细胞的cDNA为模板，通过___________扩增___________的编码序列，获得需要的目的基因片段。
(2)把获得的目的基因片段和相应载体，都用___________进行酶切，分别在5′端与3′端形成___________，避免自身环化。然后利用___________将目的基因片段和相应载体连接，得到重组质粒。
(3)先将重组质粒导入经___________处理过的大肠杆菌细胞，培养后从中分离得到较多的重组质粒。
(4)培养人胚肾细胞时，先用___________使人胚肾细胞分散成单个细胞，用含有___________的合成培养液培养，并将培养瓶置于体积分数为5%的___________与空气混合气体的培养箱中培养。
(5)将重组质粒导入人胚肾细胞中，48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白，说明___________。
(6)致癌因子会损伤肺泡细胞中的___________，使原癌基因和抑癌基因发生突变。研究WWP2蛋白的表达，为肺癌治疗新靶点奠定了基础。
-
研究发现，PVY－CP基因位于某种环状 DNA 分子中。将 PVY－CP 基因导入马铃薯， 使之表达即可获得抗 PVY 病毒的马铃薯。 图表示 PVY－CP 重组质粒的构建过程，相关酶切位点如下表。
（1）步骤②选用的 klenow 酶与细胞内的__（填酶的名称）的功能相似。步骤④应选用的限制性核酸内切酶是__________。
（2）若 BamHⅠ酶切的 DNA 末端与 BglⅡ酶切的 DNA 末端连接，连接部位的 6 个碱基对序列为_________，对于该部位，这两种酶_________（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
（3）若用 Sau3AⅠ切图中所示的质粒（多个），最多可能获得_____________种大小不同的 DNA 片段。
（4）步骤⑤获得的重组质粒通过农杆菌转入马铃薯的原生质体，并诱导形成细胞壁，再转入_________（ A、细胞分裂素多，生长素少 B、细胞分裂素少，生长素多 C、细胞分裂素和生长素比例适合 D、细胞分裂素中等，生长素少）的培养基中培养，形成__，再进行生根培养，获得转基因马铃薯。
（5）可用__的方法，从个体水平检测马铃薯植株中 PVY－CP 基因是否成功表达。
-
14分）、某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______________。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能______________ 。
(3)在构建重组质粒时,应选用______________和______________两种酶对______________和______________进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。
培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______________、______________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______________菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______________作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从________水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______________技术，愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加。
-
嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeI、EcoRI、Hind Ⅲ 、SalI四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓ TATG、G↓ AATTC、A↓AGCTT、G↓TC- GAC，请分析回答：
（1）图中的结构A是_______主要作用是________。—个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外.还应该含有_________。
（2）用图中质粒1和H基因构成重组质粒，应选用_________两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有_____________(多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（3）实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加______________，整个实验过程应保持___________操作。
（4）PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是_____________。
A.引物 I ：••• GCGAATTC •••，引物II ：••• CTCATATG •••
B.引物 I : ••• GAATTCCC •••，引物 II: ••• CATATGAG •••
C.引物1 : ••• GGAAGCTT •••，引物II ：••• AAGCTTCC •••
D.引物I : ••• CTCATATG •••，引物II：••• AACCTTAACCTT•••
-
为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与Ti质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。回答下列问题：
（1） PCR技术所用到的关键酶是__________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是__________。
（2）图1是花色基因C两侧被EcoR I酶切后所形成的末端结构，请写出EcoR I酶识别序列并标出切点：__________（用“↓”表示切点位置）。图2中EcoRI酶所识别的位点应在Ti质粒的__________片段上。
（3）将导人目的基因的菊花细胞培养成植株需要利用__________技术，其原理是__________。
（4）在个体生物学水平上，如何鉴定转基因菊花培育是否成功？____________________
-
下列关于基因工程的说法正确的是（ ）
A．质粒都含有标记基因和限制性内切酶识别位点，故常作为基因工程的载体
B．噬菌体作为基因工程载体可以将重组DNA导入到受体细胞获得转基因动物
C．农杆菌可将以其Ti质粒为载体的重组质粒导入植物细胞以获得相关转基因植物
D．采用乳腺细胞为目的基因的受体细胞，可获得乳汁中含有相应的产物的转基因动物
-
科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下列有关叙述错误的是( )
A．获得目的基因需用限制性内切酶和DNA连接酶
B．可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞
C．含耐盐基因的水稻细胞经植物组织培养可获得植株
D．可用较高浓度的盐水浇灌以鉴定水稻植株的耐盐性
-
科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下有关叙述错误的是
A．获得目的基因需用限制性内切酶和DNA连接酶
B．可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞
C．含耐盐基因的水稻细胞经植物组织培养可获得植株
D．可用较高浓度的盐水浇灌以鉴定水稻植株的耐盐性