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WWP2基因在肿瘤细胞中高度表达，WWP2蛋白参与肿瘤细胞的生长、存活和转移等。为获得较多WWP2蛋白，利用基因工程技术设计引物，其中正向引物5′含有 EcoRI酶切位点，反向引物5′含有XhoI酶切位点。将WWP2基因与相应载体构建重组质粒导入人胚肾细胞。回答下列问题：
(1)利用上述的引物，以肺癌细胞的cDNA为模板，通过___________扩增___________的编码序列，获得需要的目的基因片段。
(2)把获得的目的基因片段和相应载体，都用___________进行酶切，分别在5′端与3′端形成___________，避免自身环化。然后利用___________将目的基因片段和相应载体连接，得到重组质粒。
(3)先将重组质粒导入经___________处理过的大肠杆菌细胞，培养后从中分离得到较多的重组质粒。
(4)培养人胚肾细胞时，先用___________使人胚肾细胞分散成单个细胞，用含有___________的合成培养液培养，并将培养瓶置于体积分数为5%的___________与空气混合气体的培养箱中培养。
(5)将重组质粒导入人胚肾细胞中，48小时后提取蛋白质并检测到WWP2蛋白，说明___________。
(6)致癌因子会损伤肺泡细胞中的___________，使原癌基因和抑癌基因发生突变。研究WWP2蛋白的表达，为肺癌治疗新靶点奠定了基础。
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《科学》杂志评出“饿死肿瘤研究”为“2004年世界十大科技突破”之一。临床试验结果显示：一种抑制肿瘤血管生长的药物与传统化疗药物结合，可延长结肠癌患者存活期。这里利用的原理不包括( )
A．诱发癌细胞基因突变 B．减少癌细胞的营养供应
C．阻止癌细胞的增殖 D．抑制癌细胞的分裂
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科学家找到了一种基因治疗肿瘤的新疗法：将一种基因工程病毒——水疱型口炎病毒（VSV）注入肿瘤细胞，以此破坏肿瘤细胞生长。该病毒中添加了人类干扰素β基因与NIS蛋白质基因，使基因工程病毒既能准确侵染肿瘤细胞又能保护正常细胞，据此回答下列问题：
（1）基因治疗方法包括________________________________________________，无论哪种方法都_____ （填“是”或“不是”）直接对致病基因进行修饰与改造的。
（2）该水疱型口炎病毒（VSV）能破坏肿瘤生长的理论基础是_________________________________；为保证人体安全，VSV应__________________________________________________。
（3）用__________________技术可快速大量扩增人类干扰素β基因，因为该方法使目的基因数量呈___________形式增长。
（4）如果人类干扰素β基因产物既能保护正常细胞又能对抗肿瘤细胞，那么NIS基因的功能可能是 __________________________________________，该过程体现了细胞膜具有________的功能。
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最近科学家发现名为WWP2的基因与癌细胞扩散有关，它主要攻击和分解体内的一种可阻止肿瘤细胞扩散的天然抑制剂。如果用药物抑制这一基因的作用，癌细胞可被有效控制在原发部位。下列相关叙述，正确的是（ ）
A．癌细胞是原癌基因和抑癌基因选择性表达的结果
B．WWP2基因负责调控细胞周期，控制细胞生长和分裂过程
C．癌细胞易于扩散的原因是细胞之间的黏着性下阵
D．WWP2基因的表达可能使癌细胞表面糖蛋白增多
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血管内皮生长因子（VEGF）是在肿瘤细胞中通过表达，分泌到血液中的蛋白类生长因子，促进肿瘤血管的生成，进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。
研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了PVAX1—VEGF的DNA疫苗，为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题：
（1）首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA，通过_______法获得VEGF基因。
（2）对获取的VEGF基因进行PCR扩增前，需要根据VEGF基因序列设计两种引物，其原因是_________。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接，引物中要增加适当的__________。扩增时，每个循环一般需要经过“变性、退火、延伸”三个过程，其中______过程的温度设定是扩增成败的关键。
（3）构建的PVAX1—VEGF上应含有特定的______（填“复制原点”或“启动子”或“标记基因”），它能被受体细胞的_______所识别，以便于催化转录过程。
（4）DNA疫苗制备简单，价格低廉，且免疫强度高，应答持久，但同时也可能存在着不可忽视的潜在危险。你认为可能存在的潜在危险是________________。
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最近科学家发现名为WWP2的基因与癌细胞扩散有关，它主要攻击和分解体内的一种可阻肿瘤细胞扩散的天然抑制剂。如果用药抑制这一基因的作用，癌细胞可被有效控制在原发部位。下列相关叙述，正确的是
A．癌细胞是原癌基因和抑癌基因选择性表达的结果
B．WWP2基因负责调控细胞周期，控制细胞生长和分裂过程
C．癌细胞易于扩散的原因是细胞之间的黏着性下降
D．WWP2基因的表达可能使癌细胞表面糖蛋白增多
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研究发现，利用抗体抑制肿瘤细胞表面的CD47蛋白的活性，可促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。为制备抗CD47抗体，研究人员先利用基因工程方式制备CD47蛋白，图为含CD47基因的外源DNA、质粒DNA的有关信息， EcoRI、BamHI、SalI、XhoI 均为限制酶，Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。
（1）为了形成合适的重组质粒，应该选用限制酶________切割外源DNA和质粒DNA。
A．EcoRI和XhoI B．BamHI和XhoI
C．EcoRI和SalI D．BamHI和SalI
（2）重组质粒导入大肠杆菌的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的大肠杆菌，以下菌种为所需菌种的是________。
A．能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
B．能在含四环素的培养基上生长的菌种
C．能在含卡那霉素的培养基上生长、而不能在含四环素的培养基上生长的菌种
D．能在含四环素的培养基上生长、而不能在含卡那霉素的培养基上生长的菌种
下图为制备抗CD47单克隆抗体的过程示意图，A、B、C 表示细胞，①、②表示过程。
（3）给小鼠注射的抗原物质是________________，该物质被小鼠的免疫细胞识别，引起下列四项中的________过程，形成细胞A。
A．天然免疫 B．非特异性免疫 C．细胞免疫 D．体液免疫
（4）过程①表示________________过程，形成的细胞C称为________________。过程②表示用________________技术获得大量细胞。共同培养巨噬细胞和癌细胞，加入不同浓度的抗CD47抗体，测定巨噬细胞吞噬癌细胞的吞噬系数，得到了如图所示的结果。
（5）结合图及题干信息分析，以下描述正确的是________（多选）。
A．癌细胞表面的CD47蛋白能影响巨噬细胞吞噬癌细胞
B．较高浓度的抗CD47抗体有利于巨噬细胞吞噬癌细胞
C．使用抗CD47抗体治疗癌症需要严格控制抗体的浓度
D．抗CD47抗体能有效抑制癌细胞的增殖达到治疗目的
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苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得的，许多学者做了大量研究，得到不同浓度SW对细胞存活率的影响曲线如图所示，为了验证SW具有抑制肿瘤细胞生长的作用，某生物兴趣小组重复了学者们所做的实验，其过程如下，请完善相关内容。
(1)实验目的：____________________________________________________________。
(2)实验操作：
实验组：取小鼠肝癌Hepal6细胞，培养24 h后加入等量不同浓度的SW溶液分别培养，并分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液，观察结果。
对照组：________________________________________________________________。
(3)该兴趣小组所得的实验结果与图中相似，该实验的结论为____________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
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干扰素α—1b是我国第一个批准生产的基因工程药物，该药物利用大肠杆菌作为受体获得，具有抗病毒、抑制肿瘤细胞增生、调节人体免疫功能的作用，广泛用于病毒性疾病和多种肿瘤的治疗，是当前国际公认的病毒性疾病治疗的首选药物和肿瘤生物治疗的主要药物。
（1）原核生物经常作为受体细胞是由于其具有其他生物没有的特点： 、 、 等。
（2） 是基因工程的核心，其目的是使目的基因在 中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够 和发挥作用。
（3）为使干扰素基因在大肠杆菌细胞内表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的 和 之间。
（4）采用 技术可检测干扰素基因是否成功导入大肠杆菌的DNA上。
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经研究表明，在多种肿瘤细胞中的TOP2A蛋白大量表达，因此成为抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答：
(1)利用基因工程制备TOP2A蛋白：将TOP2A蛋白基因和质粒用___________处理并连接成重组质粒，然后导入经_________处理的大肠杆菌，
并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中培养，经离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。(2)TOP2A蛋白单克隆抗体的制备:将TOP2A蛋白反复多次注射到小鼠体内，使其发生_________，取经过免疫的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在物质_________介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、___________后，获得能产生单一抗体的__________
A.连续细胞系B.有限细胞系C.连续细胞株D.有限细胞株
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并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中培养，经离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。