下图是科研人员利用乙烯合成酶的反义基因，通过转基因技术获得耐储存的转基因番茄的过程。下列相...

下图是科研人员利用乙烯合成酶的反义基因，通过转基因技术获得耐储存的转基因番茄的过程。下列相关叙述错误的是（　　 ）

A.该转基因技术所用的目的基因是乙烯合成酶基因

B.乙烯合成酶的反义基因与乙烯合成酶基因的区别是转录mRNA的模板链不同

C.由图可知过程⑤依据的原理是碱基互补配对原则

D.转基因番茄中乙烯含量低的原因可能是乙烯合成酶基因的翻译过程受阻

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科研人员利用基因工程技术获得了耐储存的转基因番茄，其原理如下图所示：

请回答下列问题。

（1）培育该转基因番茄过程中，目的基因是___________，核心步骤是___________。若要迅速获得大量目的基因，常用的技术是____________。

（2）重组质粒导入番茄细胞时，可以先让番茄细胞经过脱分化得到愈伤组织，再把愈伤组织浸入到含有重组质粒的___________菌液中，通过该菌的___________作用使目的基因进入番茄细胞。这种方法往往需要将目的基因结合到___________上，并最终将目 的基因插入到番茄细胞的___________上。

（3）据图分析，乙烯合成酶的反义基因与乙烯合成酶基因的异同是___________。

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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟过程中PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：

（1）基因工程的核心是_____________。若已获取PG的mRNA，可通过__________法获取PG基因。在该基因上游添加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有_______________的识别和结合位点。

（2）构建PG反义质粒的过程中需要用到的工具酶有_____________、________________。

（3）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______________的培养基进行筛选，培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞______________现象来鉴别细胞壁是否再生。培养再生植株过程依据的原理是________________。

（4）导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄________，则可确定转基因番茄成功。

（5）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用_____________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。若想培育出一种地上结番茄，地下长马铃薯的植株，可以利用__________技术。

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乙烯生物合成酶基因可以控制乙烯的合成，科学家将该基因的反义基因导入番茄细胞内，培育转基因延熟番茄，延长其储藏期。反义基因的作用机制如下图所示，下列说法错误的是（　　 ）

A.有意义mRNA和反义mRNA是通过相应基因转录而来的

B.乙烯生物合成酶基因的模板链的序列与反义基因的是互补的

C.乙烯是乙烯生物合成酶基因的表达产物，可促进果实成熟

D.因为mRNA形成双链后无法进行翻译，所以无乙烯生物合成酶生成

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ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的关键酶。转反义ACC合成酶基因的番茄果实中乙烯含量显著降低，具有耐储存、宜运输的优点。如图为反义ACC合成酶基因表达载体的部分结构示意图。其中35S为特异启动子，ACC合成酶基因反向接在35S后构成反义ACC合成酶基因。下列相关叙述正确的是（　　 ）

A.若提取ACC合成酶的mRNA，不宜选用成熟番茄的组织

B.可用ACC合成酶基因片段做探针去检测反义基因是否整合到番茄植株染色体DNA上

C.反义基因转录的mRNA与ACC合成酶基因转录的mRNA碱基排列顺序完全相反

D.反义基因转录的mRNA与ACC合成酶基因转录的mRNA结合，阻断ACC合成酶合成

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番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。

例1  在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。

例2  通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是________。

(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。

向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

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科研人员利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗， 其技术流程如图。 请回答：

⑴ 过程①获得重组胚胎之前需要通过______技术获得重组细胞， 接受细胞核的卵母细胞应处于时期， 并用微型吸管吸出______。

⑵ 步骤②中， 重组胚胎培养到囊胚期时， 可从其______分离出 ES 细胞， ES 细胞在形态上表现为细胞核______ 、明显， 在功能上具有______。

⑶ 步骤③中， 需要构建含干扰素基因的______， 构建之前可以利用______技术对目的基因进行扩增。

⑷ 步骤③中将基因导入 ES 细胞的方法通常是______法， 为了检测 ES 细胞的 DNA 上是否插入了干扰素基因， 可采用______技术。 在正常的小鼠体内， 干扰素是在______(填一种细胞器)上合成的。

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实验证实，丙酮酸羧化酶（PEP）能催化丙酮酸合成蛋白质，而丙酮酸经其他代谢途径也可生成油脂。为提高油菜籽的含油量研究人员合成了一种反义RNA，它不能与核糖体结合参与翻译过程，而是在油菜籽细胞中与PEP基因转录出的mRNA结合。根据以上信息，下列判断错误的是（　　 ）

A.题中事例表明，基因可以通过控制酶的合成来间接控制生物体的性状

B.研究人员可向油菜籽细胞中导入反义基因，从而转录形成反义RNA

C.反义RNA能特异性结合PEP基因转录出的mRNA源于其特殊的碱基序列

D.反义RNA是通过抑制PEP基因的翻译过程，进而增加油菜籽的含油量

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利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，试图培育出耐寒能力强的番茄。下列相关说法，错误的是

A.可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因

B.将抗冻蛋白基因与相应载体连接构建基因表达载体

C.利用农杆菌转化法将基因表达载体导入受体细胞

D.检测到番茄细胞中具有抗冻蛋白基因，培育出的番茄一定具有杭寒能力

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我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答。

（1）为了在短时间内获得大量铁结合蛋白基因，可以采用__________技术。与细胞内DNA复制时的解旋过程相比，该技术的DNA解链过程有何不同？__________________（写出一点即可）

（2）构建重组Ti质粒时，通常先要用________分别切割含目的基因的DNA片段和质粒，以使目的基因能插入农杆菌Ti质粒的______中。将重组Ti质粒导入农杆菌时，可以用________处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入。然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上．

（3）将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得________；检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因稻米________。

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