P450是石油降解的关键酶，用SalI和NdeI联合酶切获得的P450基因，与图甲所示的质...

P450是石油降解的关键酶，用SalI和NdeI联合酶切获得的P450基因，与图甲所示的质粒(pCom8)重组，导入土著菌种Y9，获得了基因工程菌P450/Y9.图中mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的菌落变成黑色，aacCl 是庆大霉素(一种抗生素)抗性基因，限制酶NdeI. XhoI和SspI在原质粒上均只有一个酶切位点，数字表示酶切位点间的碱基对数。图乙表示几种限制酶的识别序列和切割位点,请回答下列有关问题:

(1)基因表达载体除了含有图甲所示的条件外，还应该含有__________、___________。

(2) Sall切割目的基因形成的黏性末端是__________.构建pCom8重组质粒时，需用_______(限制酶)对图示质粒进行处理，才能与P450基因在___________的作用下形成重组质粒。

(3)经测定原质粒为7.6kb (Ikb 为1000个碱基对)，重组质粒经Nde|、Ssp I联合酶切后获得了6.0kb和1.2kb的两个片段，则目的基因的长度为_____kb.

(4)为了扩增重组质粒，需将其转入用____________预先处理的土著菌种 Y9中，提高质粒导入率, .以便获得更多基因工程菌P450/Y9.为了筛选出转入了重组质粒的基因工程菌P450/Y9,应在筛选平板培养基中添加___________，选择颜色为___________的菌落扩 大培养，进而筛选出所需的工程菌.

(5)为检测基因工程菌降解石油的能力，科研人员做了如下4组实验，测定不同时间各组的石油降解率，实验结果见下图。据图分析以下说法正确的有___________。

A.单独使用P450/Y9对石油的降解能力比单独使用Y9略强

B.作用时间越长，P450/Y9 对石油降解的能力越强

C.联合使用时，P450/Y9 能显著增加四种菌的整体降解石油的能力

D.为达到更好的效果，最好单独使用基因工程菌P450/Y9

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人们试图利用基因工程的方法，用乙种生物生产甲种生物的一种蛋白质。生产流程是：形成甲生物蛋白质的mRNA目的基因与质粒DNA重组导入乙种生物的细胞获得甲种生物的蛋白质。下列说法正确的是

A．②要用限制酶切割质粒DNA，再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接在一起

B．①过程需要的酶是逆转录酶，原料是A、U、G、C

C．如果受体细胞是细菌，可以选用枯草杆菌、炭疽杆菌等

D．④过程中用的原料不含有A、U、G、C

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屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的__________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列__________（填“相同”或“不同”）。

（2）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用SmaⅠ切割，原因是__________。构建重组质粒时在其目的基因前需要添加特定的启动子和终止子，启动子的作用是______________________。终止子的化学本质是一段有特殊结构的___________。

（3）基因表达载体导入组织细胞后，要通过__________技术培育出转基因青蒿幼苗，鉴定该基因工程是否成功还要进行____________实验，但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察，其原因是______________。

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研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作 合理的是（　　 ）

A.若目的基因的获取用双酶切处理获得，则载体质粒就不必用两种酶进行切割处理

B.利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶构建基因表达载体

C.将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca2+处理细胞

D.运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达

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下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是__________，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经__________处理的处于__________态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用__________方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bc1 I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为__________，对于该部位，这两种酶__________（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

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下列有关基因的“剪刀”——限制酶的叙述不正确的是

A.用限制酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，水解磷酸二酯键4个

B.限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大

C.－CATG↓－和－G↓GATCC－序列被限制酶切出的黏性末端碱基数不同

D.用不同限制酶处理的含目的基因的片段和质粒，也可能形成重组质粒

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下列关于生物工程相关知识的叙述，正确的是（　 ）

A. 基因工程操作为了获得重组质粒，一般用相同的限制酶切割目的基因和质粒，使露出的黏性末端相同

B. 若要生产转基因抗病水稻，可将目的基因先导入到大肠杆菌中，再转入水稻细胞

C. 植物体细胞杂交，能克服远源杂交不亲和的障碍，培育出的新品种可能是单倍体

D. 基因治疗主要是对具有缺陷的体细胞进行全面修复

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下列关于基因工程的说法正确的是

A. 天然质粒都含有标记基因和限制酶识别位点，故常作为基因工程的载体

B. 噬菌体作为基因工程载体可以将重组DNA导入到动物受体细胞而获得转基因动物

C. 农杆菌可将以其质粒为载体的重组质粒导入植物细胞以获得相关转基因植物

D. 采用乳腺细胞为目的基因的受体细胞，可获得乳汁中含有相应的产物的转基因动物

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下列关于基因工程的说法正确的是

A．质粒都含有标记基因和限制性内切酶识别位点，故常作为基因工程的载体

B．噬菌体作为基因工程载体可以将重组DNA导入到受体细胞获得转基因动物

C．农杆菌可将以其Ti质粒为载体的重组质粒导入植物细胞以获得相关转基因植物

D．采用乳腺细胞为目的基因的受体细胞，可获得乳汁中含有相应的产物的转基因动物

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科研人员利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图1所示，①-④为操作步骤，载体上BamHⅠ、BglⅡ、EcoRI酶切位点唯一，识别序列和切割位点见表1。

（1）步骤①为__________，其目的是__________ 。

（2）若目的基因用BamH I和Bgl Ⅱ剪切，质粒用BamH I剪切，剪切后的目的基因和 质粒能连接在一起，原因是__________。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用_____酶对两种重组质粒进行剪切，通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如图2所示，图中_____(样品1/样品2)为所需基因表达载体。

（3）步骤②用__________处理农杆菌后获得感受态细胞，以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加__________以便筛选岀含目的基因的甘蓝植株。若要检测甘蓝是否具有抗除草剂的性状，需要在个体水平通过________进行检测。

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