刚果红能够与纤维素形成红色复合物，可用其鉴定纤维素分解菌。某研究小组将滤纸埋在土壤中，30...

刚果红能够与纤维素形成红色复合物，可用其鉴定纤维素分解菌。某研究小组将滤纸埋在土壤中，30天后从滤纸上取6 g土壤样品加入30 mL生理盐水中溶解，得到了富有纤维素分解菌的菌原液，并进行如下实验，回答下列问题：

(1)稀释菌原液：为确定合适的稀释倍数，小组成员取1 mL菌原液进行如下图所示的操作，在统计菌落时，发现平板上的平均菌落数为40个，则每毫升菌原液中的细菌数大约为________个。

(2)培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，________，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至50℃左右时倒平板，在培养基凝固之前加入灭菌的刚果红，从功能上来看，该培养基属于________培养基，培养基中碳源主要是________。　

(3)接种与观察：在无菌条件下，用________取0.1 mL稀释后的菌悬液进行图1中________所示的操作，室温放置2～3分钟后倒置于恒温箱中培养，室温放置2～3分钟的目的是__________________。培养过程中定期观察菌落特征和透明圈的大小，图2中D/d的值越________，表示该菌对纤维素分解能力越强。

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生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。如果向含有纤维素培养基中加入刚果红染液时，刚果红会与纤维素形成红色复合物，而呈现红色，如果纤维素被降解，则培养基表面会形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。　请分析回答下列问题：

71、纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择________环境采集土样。

②配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行________，接种前要进行________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是________ 。

③以下是两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择________(填编号) 培养基配方，从功能看该培养基属于________培养基。

④为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用________　　 法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________　 的菌落作为菌种进行扩大培养。

72、进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用酶固定化技术，其具体方法包括如下图所示的三种，则①表示________、②表示________、③表示载体结合法。

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某生物科技小组的同学用刚果红染色法从土壤中分离得到了能够分解纤维素的微生物，下列有关此实验历程的阐述中，错误的是（　　 ）

A．本实验既可以起到选择培养的作用又可以起到鉴别培养的作用

B．纤维素的分解产物纤维二糖和葡萄糖能与刚果红作用形成红色的复合物

C．涂布平板时，应用涂布器沾少量菌液并转动培养皿以使菌液涂布均匀

D．应只选择平板中有较大透明圈的菌落进行计数

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植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈 。

为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。

（1）据表判断，培养基　　 　 （“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是　　 　　 　 ；配制培养基时，在各种成分都熔化后灭菌前，要进行的是　　　　　　 。实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是　　　 　　 　 。

（2）在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是 　　　　　　 (多选)。

A．酒精灯

B．培养皿

C．显微镜

D．无菌水

E．无菌滴管

F．接种环

G．玻璃刮铲

（3）有同学在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落如左下图。 图中降解纤维素能力最强的菌株是　　　　　　 。

（4）教师用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度条件进行纤维素分解发酵,测得发酵液中酶活性的结果见右下图,推测菌株　　　　　　　 更适合夏季分解植物桔杆,理由是　　　　　　　　 。

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在鉴别纤维素分解菌的培养基中，常常加入水溶性的羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。下列叙述错误的是

A．羧甲基纤维素钠（CMC-Na）主要为细菌提供氮源

B．刚果红染液能与培养基中的纤维素形成红色复合物

C．刚果红可在倒平板时加入,加入前需要将刚果红溶液灭菌

D．纤维素酶至少包括三种组分,即C,酶,Cx酶和葡萄糖苷酶

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分离纤维素分解菌的实验过程中,操作有误的是(　 )

A.经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

B.富集培养这一步可省略,但所培养的纤维素分解菌少

C.经稀释培养后,用刚果红染色

D.对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上

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分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是(    )

A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

B．富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少

C．经稀释培养后，用刚果红染色

D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上

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下列说法中正确的是（　　 ）

A.鉴定纤维素分解菌的培养基含有的染料是刚果红

B.植物组织培养中形成的愈伤组织加上人工种皮可以制成人工种子

C.制作腐乳时所加卤汤中酒精的含量为20%左右适宜

D.利用胚胎分割技术可以从桑椹胚中的截取滋养层细胞做DNA分析鉴定性别

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下列有关培养基和菌种鉴定的叙述不正确的是(　　)。

A．动物细胞培养和胚胎培养常用的都是液体培养基

B．鉴别大肠杆菌利用的是伊红美蓝固体培养基

C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌

D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌

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果胶酶在工业上可用于果汁、果酒的澄清提取、果实脱皮，某实验小组通过富集培养结合刚果红染色法，初步筛选出具有果胶分解能力的菌株，回答下列问题。

（1）分离果胶分解菌，可以从含腐殖质丰富的桔子园土壤中取样，原因是____________________。

（2）实验室对培养基灭菌的一般方法为___________________，筛选果胶分解菌需要将稀释后的土壤溶液接种到以_________为唯一碳源的液体培养基上，培养基中还需要加入K2HPO4和KH2PO4，其作用是_______。

（3）在含有果胶的培养基上加入刚果红，果胶和刚果红能形成红色复合物，用该培养基培养果胶分解菌时会出现以该菌的菌落为中心的_________，形成原因是_________。

（4）实际生产中若要对筛选的果胶分解菌进行重复利用，可用_________法固定化果胶分解菌，固定化果胶酶时不宜采用该方法的原因是___________________________。

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