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如图为某质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点．又知植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关．若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性．已知耐旱基因两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点．据图回答：
（1）获得耐旱基因常用基因文库法．理论上，_________________（填基因文库种类）中含有该生物的全部基因；而_________________（填基因文库种类）中含有生物的部分基因．将含有耐旱基因的DNA与该质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶处理后，两两连接的产物有_________种。
（2）将上述连接产物导入无任何抗药性的宿主细胞后，将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能正常生长的宿主细胞所含有的连接产物是___________________________。
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_______________，其合成的产物是_______________。
（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_______________。
（5）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱植株与不耐旱植株的数量比为3：1时，则可推测该耐旱基因整合到了_______________________（填“同染色体的一条上”或“同染色体的两条上”）。
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下图中甲是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止 。
（2）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入______酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
（3）从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是 。
（4）该雌性转基因牛经与普通雄性个体交配所产的雌性后代是否也能分泌含人乳铁蛋白的乳汁？为什么？ 。
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回答有关生物工程的问题。
转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。
⑴若要获得抗病基因，能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割？_____，说明理由______________________________________________________________。要获得含抗病基因的重组质粒能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割质粒？________。
⑵卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有___________基因，作为标记基因。
⑶利用组织培养技术能将香蕉组织细胞培育成植株，这是因为香蕉组织细胞具有__________，图中①→②、②→③依次表示香蕉组织细胞的___________和_____________的过程。
⑷②、③阶段是否可使用同种培养基？ _________；
理由是____________________________________________________________________。
④阶段是否可使用不添加植物激素的培养基？_________；理由是_____________________。
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(9分)回答下列有关生物工程的问题。
下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点；图2是转基因香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。
1．图1是用限制酶_________________进行切割得到的目的基因，可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后____。
2．从图2中反映质粒作为运载体的特点是___________________。基因工程中还可以用___________________作为运载体。
3．图2中构建重组质粒不能使用SmaI酶切割的原因是 ________________。
4．图2中④表示组织培养过程中的________，它对植物激素调节的要求是______________。
5．图2中的农杆菌是基因工程中的________________。判断该转基因工程是否成功的依据是_________。
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回答下列关于基因工程的问题
下图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
（1）若对图2中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性如何变化，为什么？________
（2）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止________。
（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。
（4）图1过程①可采用的操作方法是________，过程②可采用的生物技术是________。过程③可采用的生物技术是________。
（5）分别从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是_______________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
转基因抗病香蕉的培育过程如图1所示，图2表示PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ四种限制酶的识别序列及酶切位点。请据图回答下列问题：
（1）质粒的化学本质是______________。
（2）利用基因工程培育转基因抗病香蕉的核心步骤是形成重组质粒，即______________；将目的基因导入受体细胞的方法是______________。
（3）将抗病基因从含抗病基因的DNA中切割下来，使用的限制酶是______________，一个质粒被限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ同时切割后得到的DNA片段和黏性末端分别为___________个。请写出单独用ApaⅠ切割质粒后的片段：______________________。
（4）转基因抗病香蕉的培育是否发生了染色体（数目）的变异？______________。卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可以利用含卡那霉素的培养基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞。由此推断，重组质粒中应含有______________基因作为标记基因。
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研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示。限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图。请回答下列问题。
（1）图1质粒中没有标注出来的基本结构是 。
（2）用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，应选用限制酶 切割质粒，选用 限制酶切割含目的基因的DNA片段。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 键。
（3）将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，导入受体受体细胞，受体细胞的类型（对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S）包含 （不考虑基因突变）。
①XR、YR ②XR、YS ③XS、YR ④XS、YS
（4）将图3过程 （填序号）中发生了基因重组，过程②、③所用的培养基中，通常要调控好 两类激素的比例。
（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是 。
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如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶 EcoRI、 BamHI、SamI的酶切位点，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点，已知目的基因的两端分别有包括coRI、 BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到
或
中会导致相应的基因失活（表示氨苄青霉素抗性基因，表示四环素抗性基因）。回答下列问题：
（1）基因工程中获取目的基因常用的方法有_______________________（答出两点即可）。
（2）在基因工程中使用的载体除质粒外，还有__________、__________等。构建重组质粒时，为避免出现自身环化，通常选用____________酶对该质粒和目的基因进行切割，质粒被切割后断开了_________个磷酸二酯键。被切割后的质粒和目的基因经DNA连接酶连接后首先导入大肠杆菌中，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用含_____________的培养基进行培养。
（3）将含有目的基因的重组质粒导入植物细胞最常用的方法是__________，为检测目的基因是否在受体细胞中表达，通常选用____________的方法进行分子水平的检测，此外有时还需要进行___________的鉴定。
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如图为某种质粒，小箭头所指为限制性内切酶EcoRⅠ的酶切位点，ampR为氨苄青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端包括EcoRⅠ在内的多种酶的酶切位点。请根据图
回答下列问题。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_________、_________、_________三种。将此三种连接产物与无任何抗药性的细菌A接种到含四环素的培养基中，能生长的细菌A所含有的连接产物是_________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长繁殖的细菌A所含有的连接产物是_________。
（2）假设人的生长激素基因，与上述质粒构建表达载体后导入细菌B（本身不含有氨苄青霉素和四环素抗性质粒），然后接种在一个只含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果（圆点表示菌落），该结果说明能够生长的细菌中已经导入了_________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到只含有四环素的培养基上培养，得到如图b所示结果（空心圆圈表示与图a中培养基上对照没有菌落的位置）。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是_________，这些菌落则是导入了_________的工程菌。
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[生物——选修3:现代生物科技专题]科学家从某细菌中提取抗冻基因，转入番茄并培育出抗冻番茄。下图是转抗冻基因番茄的培育过程,含抗冻基因的DNA片段和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。分析回答问题：
（1）若要获得抗冻基因,可以从细菌中提取；也可以通过分析抗冻蛋白 的序列推测基因的结构，进而人工合成抗冻基因。对获得的抗冻基因可用 技术进行扩增。
⑵上述两种途径获得的抗冻基因 （填“是”或“否”）一定相同，原因是 。
（3）用图中的质粒和抗冻基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是 。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用 酶对外源DNA、质粒进行切割。
（4）图中过程⑤表示 。
或
中会导致相应的基因失活（