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（生物——选修3：现代生物科技专题）

草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治药物。下图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图。图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向。PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）。请回答下列问题：

草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表

（1）制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗，获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增，该技术除需要原料、模板、_____________外，还必须用____________酶。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段，其中变性是指____________条件下，DNA分子____________的过程。

（2）使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，是为了防止____________，用不同限制酶先后两次切割质粒，是为了防止____________，有利于提高核酸疫苗构建的成功率。

（3）攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内，通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白，使草鱼生成抗体和记忆细胞，同时给草鱼注入相同浓度的GCRV，我，统计草鱼免疫保护率，实验结果说明____________。导入空载体（普通质粒）的草鱼免疫保护率达到70%，但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是________________________。核酸疫苗注射后，科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达，至第49天核酸疫苗仍没有被降解，仍能检测到PV7双基因的转录。综上所述，与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗所具备的优点有________________________。

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草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治药物．如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图．图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．请回答下列问题：

草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表

（1）制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗，获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增，该技术除需要原料、模板、________外，还必须用________酶．PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段，其中复性降低温度的作是______．

（2）使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，是为了防止_____________，用不同限制酶先后两次切割质粒，是为了防止_____________，有利于提高核酸疫苗构建的成功率．

（3）攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内，通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白，使草鱼生成抗体和记忆细胞，同时给草鱼注入相同浓度的GCRV，我，统计草鱼免疫保护率，实验结果说明_______________ ．导入空载体（普通质粒）的草鱼免疫保护率达到70%，但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是________________________．核酸疫苗注射后，科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达，至第49天核酸疫苗仍没有被降解，仍能检测到PV7双基因的转录．综上所述，与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗所具备的优点有_____．

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草鱼病毒性出血病是由草鱼呼肠弧病毒(GCRV)引起的，草鱼患病后死亡率非常高，目前尚未找到防治药物，该问题一直是草鱼养殖的“瓶颈”，科学家尝试制备核酸疫苗打破该“瓶颈”，下图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果过程示意图。回答下列问题：

草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表

[注：1.图中P10和P11为启动子，箭头表示转录方向　　 2.PV71和PV72为草鱼呼肠弧病毒外壳蛋白基因(DNA片段）]

（1）DCRV的遗传物质是双链RNA，可通过设计一对引物，通过_______技术获取大量的PV7基因。

（2）制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗时需将PV7双基因与质粒进行连接，将两个PV7基因先后连接到质粒上时切割质粒所使用的限制酶_____(填“相同”或“不同”），这样做的目的有利于____________。

（3）攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内，通过转录和翻译产生草鱼呼肠弧病毒外壳蛋白，使草鱼生成抗体和_____细胞，同时给草鱼注入相同浓度的GCRV，统计草鱼免疫保护率，实验结果说明__________，导入空载体(普通质粒)的草鱼免疫保护率到70%，但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能原因的是_________________。

（4）核酸疫苗注射入草鱼_________后，科学家发现PV7基因在启动子的驱动下持续表达，至第49天核酸疫苗仍没有被降解，仍能检测到PV7基因的转录，综上所述，与常规的基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗所具备的优点______________。

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[生物一一选修3:现代生物科技专题]口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种动物传染病，目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VP1。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗。请回答下列问题：

（1）口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，则获得可重组到质粒的VP1基因必须用到________酶。要获得大量该VP1基因，可利用____________技术进行扩增。

（2）下图是插入VP1基因的农杆菌Ti重组质粒结构示意图，构建具有VP1基因的基因表达载体还需要在质粒中插入____________。

（3）VP1基因应插入到农杆菌Ti质粒的__________上，通过___________作用进入番茄细胞并插入到染色体DNA，使VP1基因能够稳定维持并发挥作用。

（4）通常用BamHⅠ、HindⅢ两种限制酶切割VP1基因和Ti质粒的目的是_____________；要筛选出含有该目的基因表达载体的番茄细胞，首先需要在含的_____________培养基上进行。

（5）检测发现染色体DNA上插入VP1基因的某些番茄细胞死亡了，导致这些转基因番茄细胞死亡的最可能原因是______________________。

（6）将成功转入VP1基因的受体细胞进行培养，获得转基因植株。若要快速繁殖大量这种转基因种苗，应选取幼枝的_____________部位进行组织培养。

（7）获得表达VP1蛋白的番茄植株以后，要进行免疫效力的测定，具体方法是：将从转基因番茄叶片中提取的VP1蛋白质注射到一定数量的豚鼠体内，每半个月注射一次，三次注射后检测豚鼠血液中产生的

_______________数量，为了使结果可信，应设置空白对照组，注射等量生理盐水。

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[选修Ⅲ：现代生物科技专题]

埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，其遗传物质为RNA，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题。

（1）途径一：在制备抗EBOV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的脾脏中获取　　　　　　　　 细胞，将获得的细胞与小鼠的　　　　　　　　　 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。诱导细胞融合的化学方法一般是用　　　　　　　　　 作为诱导剂来诱导融合。

（2）途径二：可将无限增殖的基因用　　　　　　　　　　 技术导入能产生抗EBOV抗体的小鼠免疫细胞中，以便源源不断地产生抗EBOV的单克隆抗体，此项工程所需要的工具是　　　　　　　 　　　　　　　　 。

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[生物——选修3:现代生物科技专题]

埃博拉病毒(EBO)是一种能够引起人类产生埃博拉出血热的强致死性RNA病毒。回答下列问题：

（1）提取EB0的RNA，通过_______________形成DNA，然后采用PCR技术进行扩增。PCR是_________的缩写，是一项在体外复制_____________的核酸合成技术。在反应体系中需要加入DNA模板_________、_________、核苷酸原料等。

（2）利用基因工程方法制备EBO外壳蛋白，以EBO外壳蛋白为抗原制备疫苗是预防埃博拉出血热的一种有效策略。为了从牛分泌的乳汁中生产EBO外壳蛋白，在将基因导入牛受体细胞前，基因的前端段必须含有使其能在牛的乳腺细胞中特异性表达的_____________，才能驱动转录过程。这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为____________。

（3）利用EBO作为抗原处理小鼠，然后提取小鼠的____________与骨髓瘤细胞进行融合形成杂交瘤细胞，以制备大量特异性强、灵敏度高的___________。

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【生物——选修3现代生物科技专题】（15分）

干扰素在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，几乎能抵御所有病毒引起的感染。传统生产方法成本高、产量低，获得的干扰素在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题。

（1）利用基因工程生产干扰素，过程是：

①从健康人体外周静脉血分离能合成干扰素的免疫细胞，从中提取________，经反转录获取目的基因，此过程需要的原料是________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用________酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用________处理，使其成为_____________，一定温度作用下，完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，离心后取________（上清液/菌体），经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用________技术。

（2）利用蛋白质工程对干扰素进行改造，基本途径是：

预期蛋白质功能→_____________→_____________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

（3）利用细胞工程生产干扰素，思路是：

将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选______细胞，经细胞培养可获得大量干扰素。

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（15分）生物——选修3 现代生物科技专题

干扰素在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，几乎能抵御所有病毒引起的感染。传统生产方法成本高，产量低，获得的干扰素在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题。

（1）利用基因工程生产干扰素，过程是：

①从健康人体外周静脉血分离能合成干扰素的免疫细胞，从中提取 ，经反转录获取目的基因，此过程需要的原料是________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用________酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法使用________处理，使其成为________，一定温度作用下完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，离心后取________（上清液/菌体），经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用________技术。

（2）利用蛋白质工程对干扰素进行改造，基本途径是：

预期蛋白质功能→________→________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

（3）利用细胞工程生产干扰素，思路是：

将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选________细胞，经细胞培养可获得大量干扰素。

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【现代生物科技专题——选修3】（15分）“今又生”是我国为数不多的首创基因治疗药物之一，其本质是利用腺病毒和人P⁵³基因（抑癌基因）拼装得到的重组病毒。人的P⁵³蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复，使其恢复正常，或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡，阻止细胞癌变。“今又生”的载体采用第一代人5型腺病毒，其致病力很弱，其基因不整合到宿主细胞的基因组中，无遗传毒性；载体经基因工程改造后，只对细胞实施一次感染，不能复制，不能污染。请回答下列问题：

（1）在“今又生”的生产中，为了获得更高的安全性能，在载体一般应具备的条件中，科学家选择性地放弃了一般载体都应该具有的________。检测P⁵³基因的表达产物，还可以采用________技术。

（2）如果要获取人类基因组中抑癌基因P⁵³，可以采取的方法通常包括________和通过化学方法人工合成。目的基因的大量扩增则可以采用________，该技术中需使用的一种特殊的酶是________。

（3）在研究中如果要获得胚胎干细胞进行研究，则胚胎于细胞可来源于囊胚期的_________，或胎儿的原始性腺，也可以通过________技术得到重组细胞后在进行相应处理获得。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是________。

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（生物——选修3现代生物科技专题）

材料一 科学家巳培育出能够完全抵御一种毁灭性和致命性病毒的“超级猪”。这种转基因猪不会感染“猪蓝耳病”（由能够引发严重呼吸问题的病毒感染所致）。

材料二 世界上第二个“三亲宝宝”于2017年1月5日出生。为了避免夫妻把生理缺陷遗传给孩子，医生去除女性捐赠者的卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育。这样诞生的孩子将会继承一位父亲和两位母亲的遗传基因。

（1）结合材料一回答下列问题：①PCR扩增抗病毒基因时使用的酶是________。迄今为止，_______是转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。②代孕猪对移入子宫的外来胚胎基本上不发生___________，这为转基因猪胚胎在代孕猪体内存活提供了可能。在进行转基因猪胚胎移植时，要对受体猪进行___________处理。在胚胎移植前，通过___________技术可获得较多转基因猪胚胎。

（2）结合材料二回答下列问题：①分析材料可得出，“三亲宝宝”是为了治疗__________（填：细胞核基因/细胞质基因）有缺陷的患者。②_______的精子和培养成熟的卵子，一般情况下都可以在_________溶液中完成受精过程。精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查________。

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