我国现己成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国。根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为...

我国现已成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国．根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为原料的第1代生物乙醇和以秸秆等纤维素为原料的第2代生物乙醇．两者的生产过程都需要多种微生物参与，且在较高温度下反应能提高产率．

（1）生产第1代生物乙醇时，首先利用微生物或酶将淀粉材料彻底水解为　　　　 ，才能利用酵母菌在　　　　 条件下将其转化为乙醇．

（2）生产第2代生物乙醇时需要纤维素分解菌，为此，小明同学设计了两种培养基．甲培养基含纤维素粉5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g、无机盐适量；乙培养基含CMC﹣Na10g、酵母膏1g、琼脂15g、土豆汁100mL、无机盐适量．

①在上述　　　　 （填“甲”或“乙”）种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，筛选该菌落时常需要向该培养基中添加　　　　 ；另外一种培养基的作用是　　　　 ．

②为防止杂菌污染，除要对培养基进行　　　　 灭菌，还需要对操作者的双手进行清洁和　　　　 ．

③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供　　　　 条件．

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我国现己成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国。根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为原料的第1代生物乙醇和以秸秆等纤维素为原料的第2代生物乙醇。两者的生产过程都需要多种微生物参与，且在较高温度下反应能提高产率。

（1）生产第1代生物乙醇时，首先利用微生物或酶将淀粉材料彻底水解为　　　　　　　　　　 ，才能利用。酵母菌在　　　　　　　 条件下将其转化为乙醇。

（2）生产第2代生物乙醇时需要纤维素分解菌，为此，小明同学设计了两种培养基。甲培养基含纤维素粉5g、酵母膏0．5g、水解酪素0．5g、无机盐适量；乙培养基含CMC-NalOg、 酵母膏1g、琼脂15g、土豆汁]00mL、无机盐适量。

①在上述　　　　　　 （填“甲”或“乙”）种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，另外一种培养基的作用是　　　　　　　　 。

②为防止杂菌污染，除要对培养基进行　　　　　　　　 灭菌，还需要对操作者的双手进行清洁和　　　　　　　 。

③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供　　　　　　　　　　　 条件。

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生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精。它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料。我国成功利用农作物废弃物—秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产。其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏。

（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入_______________的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖。从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过_______________法直接筛选出该微生物。

（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用______________法接种到平板上。如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为____________，通常运用该方法统计出的菌落数目______（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是__________________________________________________。

（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是___________，该微生物在_______________的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

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生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精。它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料。我国成功利用农作物废弃物—秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产。其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏。

（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入_______________的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖。从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过_______________法直接筛选出该微生物。

（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用______________法接种到平板上。如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为____________，通常运用该方法统计出的菌落数目______（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是__________________________________________________。

（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是___________，该微生物在_______________的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

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利用植物为原料生产的燃料乙醇和生物柴油等 “绿色能源”，其应用在一定程度上能够减缓人类对煤、石油等燃料的消耗。科学家发现，在微生物A和微生物B的作用下，利用植物秸秆为原料可生产燃料乙醇（如下图甲）；在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图乙)。请据图回答：

（1）图甲中微生物A利用自身合成的____酶、____酶和______酶等，把作物秸秆中________分解成葡萄糖；微生物B利用葡萄糖发酵生产乙醇应控制的条件是_________。

（2）图乙中用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用______、____等方法从油料作物中提取；筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供________，培养基灭菌采用的最适方法是______________法。

（3）测定培养液中微生物数量，可选用_________法直接计数。

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生物乙醇是汽油的良好替代品，美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮，不与粮争地”的原则，利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料，其主要技术流程为：

秸秆→秸秆颗粒反应罐水解压滤出渣酒精发酵蒸馏

（1）过程①加入了微生物，其作用是把秸秆颗粒分解。从土壤中获取①所需微生物的过程 称为微生物的_________，选择培养基应以__________为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液用_______法或　　　　　　　　　　　　 法接种到培养基上。

（2）酒精发酵阶段接种的微生物是______________，生产酒精要控制的必要条件是　　　　　　　　 。

（3）在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是________________、__________________。

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A．(生物技术实践，9分)生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→-成品。

(1)纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择怎样的环境采集土样? ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

②以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaN031g、Na2HP04。7H201.2g、KH2P040.9g、MgSO4·7H2O0.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g(蒸馏水定容到1000ml)。该

培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入________________________________________________________________________________________________ 染液，

将筛选获得的茵液稀释后用 ________________________________________________________________________________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养。

④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?请设计实验进行检测。________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

(2)乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是 ________________________________________________________________________________________________________________________。

(3)发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质? ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

B．（现代生物科技，9分）下图是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，请分析回答：

（1）在基因工程的操作程序中，基因工程的核心是________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 。

（2）在获取目的基因和构建目的基因表达载体的一个目的基因表达载体的组成包括标记基因和  ________________________________________________________________________________________________________________________________   ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________。

（3）一般将受精卵作为目的基因的受体，将目的基因导入受精卵常用的方法C称________________ 　________ 法。

（4）流程A和B分别指________________________________________________________________________________ 和________________________________________________________________________ 。

（5）农场放牧要考虑环境承载力，牛粪可以用于沼气生产，它们分别应用了生态工程的_____和__________原理。

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生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化让产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

（1）最好选择怎样的环境采集土样？________。

（2）以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaNO₃ 1g、Na₂HPO₄•7H₂O 1.2g、KHPO₄ 0.9g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000ml）。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是________。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入____染液，将筛选获得的菌液稀释后用________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（4）纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢？在生产中需要定量检测，请提出定量检测纤维素酶含量的实验思路。____________。

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生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。如果向含有纤维素培养基中加入刚果红染液时，刚果红会与纤维素形成红色复合物，而呈现红色，如果纤维素被降解，则培养基表面会形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。　请分析回答下列问题：

71、纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择________环境采集土样。

②配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行________，接种前要进行________。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是________ 。

③以下是两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择________(填编号) 培养基配方，从功能看该培养基属于________培养基。

④为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用________　　 法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________　 的菌落作为菌种进行扩大培养。

72、进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用酶固定化技术，其具体方法包括如下图所示的三种，则①表示________、②表示________、③表示载体结合法。

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[生物——选修1：生物技术实践]乙醇是目前世界上生产规模最大的生物能源，由于石油面临枯竭，可再生的乙醇作为可替代石油的新能源已成为全球关注的焦点。科研工作者研制出利用微生物降解秸秆生产乙醇的技术，大致流程如下图所示。

（1）若要从土壤中分离出能降解植物秸秆的微生物，培养基中的碳源是____，对该培养基可采取______的方法进行灭菌。

（2）某小组对分离得到的微生物培养液进行数量测定，在稀释倍数为105对应的培养基中测定平板上菌落数的平均值为234，则每毫升样品中的细菌数是（涂布平板时稀释液的体积为0.2mL）______个。

（3）用上述方法测定目的菌的密度，实际活菌数量要比测得的菌落数量多，原因是_________。

（4）上述流程图中，糖液发酵产生乙醇需要的菌种是_____，乙醇是在目的菌的______（结构）中产生的。

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