已知限制酶BamH Ⅰ、Bcl Ⅰ、Sau3A I、HindⅢ识别的碱基序列和酶切位点分别...

已知限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________。若要使目的基因在受体细胞中稳定遗传并表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________（答两点）

（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用__________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶__________切割质粒，选用两种限制酶___________________切割含目的基因的DNA片段。

（3）利用PCR技术扩增目的基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取__________作为引物。

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已知限制酶BamH Ⅰ、Bcl Ⅰ、Sau3A I、HindⅢ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓ GATCA、↓GATC、 A↓ AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）基因工程中目的基因的来源除了用人工的方法合成，还可以从____________________________________中分离出来。

（2）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________________和_____________________________。

（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用_________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶____________________________（填酶的名称）切割质粒，选用Sau3A I、HindⅢ切割含目的基因的DNA片段。然后用从大肠杆菌中分离得到的____________________________连接构成重组质粒。

（4）由于Taq酶是从引物的3'端开始延伸DNA链，所以PCR过程中，可以从图2中的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_________作为引物。

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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选__________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于_____态的大肠杆菌．

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加___平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中___．

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 _______，对于该部位，这两种酶 ______（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开．

（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得______种大小不同的DNA片段．

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下表为常用的限制酶及其识别序列和切割位点，据表分析以下说法正确的是（　　）

（注：Y表示C或T，R表示A或G）

A.一种限制酶只能识别一种脱氧核苷酸序列

B.限制酶的切点一定位于识别序列的内部

C.不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端

D.限制酶切割后不一定形成黏性末端

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图1表示含有目的基因D的DNA片段，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）用限制酶SmaⅠ完全切割图1的DNA片段，产物中至少有_______种不同DNA片段。

（2）为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因，在此过程中，要有一段_________________，以便根据这一序列合成引物。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_______。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加抗生素B的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含______的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若要将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，___________（是/否/不一定）能用BamHⅠ，为什么?__________。

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如表为几种限制酶的切割位点，相关叙述不正确的是

A. 限制酶能够水解DNA上特定的磷酸二酯键　　 B. BamH I切割的序列一定能被Sau3A I切割

C. Bcl I切割的序列一定能被Sau3A I切割　　 D. 以上信息说明限制酶没有特异性和专一性

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（10分）．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有____，____个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________

________________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。

(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

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下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题

(1)一个图Ⅰ所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有________个游离的磷酸基因

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________.

(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。

(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测

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下图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶。它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。现要培育含目的基因D的大肠杆菌，请回答下列问题：

（1）为了提高试验成功率，需要通过PCR纩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该过程除需目的基因和dNTP （包括dATP、dGTP, dCTP、dTTP）之外还需提供______________。

（2）图2中，启动子的作用是______________．

（3）分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段，能形成黏性末端的是______________。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是___________。为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率，需将大肠杆菌用___________进行处理。

（5）为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养，得到如图3的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到图4所示的培养基上培养，得到如图4的结果（空圈表示与图3对照无菌落的位置）。请推测：图3培养基里含的抗生素是_　　 _，

图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D？______________。

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Ⅰ．下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是____________。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_______。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用_______方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶_______（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

Ⅱ．微卫星DNA是广泛分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度特异性并且数量丰富，因此，微卫星DNA可以作为分子标记，并有着广泛应用。

（5）为了分离捕获到某种生物的微卫星DNA分子标记，可以用生物素标记的特定简单重复序列作为探针，与该生物的_______（填“基因组”或“cDNA”）文库进行杂交，然后再经多个步骤筛选获取微卫星DNA，对微卫星DNA进行体外扩增的基本反应步骤为__________________。

（6）扩增分离到的微卫星DNA序列的技术为PCR技术，其原理是______________。

（7）根据“微卫星DNA”的特点判断，这种分子标记可应用于___________（填字母）。

A．人类亲子鉴定　　　　　　　　　　 B．种群遗传多样性研究

C．诱导基因突变　　　　　　　　　　 D．冠状病毒遗传物质测序

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