硝基苯酚（PNP)呈黄色，是一种工业污染物，可被微生物降解为无色物质。目前最有前途的处理方...

硝基苯酚（PNP)呈黄色，是一种工业污染物，可被微生物降解为无色物质。目前最有前途的处理方法是用高效PNP降解菌处理含PNP的废水。请回答下列问题：

（1）欲获得PNP降解菌，所选用的固体培养基中应加入_______________做为唯一碳源，从功能上看该培养基属于______________培养基。

（2）将含PNP降解菌的培养液接种在此固体培养基止，常釆用的方法有_________________________，PNP降解菌的降解效率可通过___________________鉴别。

（3）实验操作中获得纯净培养物的关键是______________；实验室中常用到的灭菌方法有__________(至少答出两项）。

（4）若某同学培养的菌落数明显低于班级平均值,原因可能是_____________________________。

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硝基苯酚（PNP）是硝基苯酚类化合物中的一种，呈黄色，对动植物、微生物均有毒性。某研究小组欲从废弃物中分离筛选能高效降解硝基苯酚（PNP）的菌株。回答下列问题。

（1）各种微生物培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、_________（答出两点即可）。要从废弃物中对硝基苯酚（PNP）降解菌进行分离，应在以适量的_________为唯一碳源的培养基中培养。

（2）把从废弃物中采集的样品进行接种、连续富集、转接等操作，最后通过_________（填方法）接种到配制好的迭择培养基中，以便对菌落进行分离和计数，可通过_______（填颜色）消失的情况判断菌株的降解能力，进而筛选出高效菌株。

（3）研究和应用微生物的前提是________________________。在实验室培养微生物时，对玻璃器皿和试管口等容易被污染的部位常用的灭菌方法分别是________________。

（4）微生物接种的方法很多，在平板划线操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，原因是_____________________。

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对硝基苯酚（pNitrophenol，PNP）属于硝基苯酚类化合物（水溶液为黄色），主要来源于农药、医药、染料、塑料等生产企业的排放，对植物、微生物、动物均有毒性。某研学小组从活性污泥中分离到一株PNP降解菌，对其形态、生理生化及降解特性进行研究。回答下列问题：

（1）取采自污水处理厂的活性污泥转接至富集培养液中，培养液配方如下表：

该培养液________（填“是”或“不是”）以PNP为唯一碳源，富集过程中连续转接至新鲜的富集培养液中5次，该步骤的目的是______________________________。

（2）将富集液进行梯度稀释，取适量稀释菌液在LB固体培养基上利用稀释涂布平板法进行分离，需要用到下图中的实验器材有________。在培养过程中，需放置________培养基一起培养，来检验培养基是否受到污染。

（3）挑取LB培养基上的单菌落转接到300 mg/L PNP的固体培养基上，按功能划分，该培养基属于________培养基；以菌落周围产生________作为筛选标记，最终得到一株降解能力较强的降解菌，命名为P62。

（4）下图是探究环境因素影响P62降解效果的实验数据。据图1分析，当温度在30 ℃左右时，P62的降解效果较好，推测可能的原因是________。据图2分析，在250 mL锥形瓶中的装液量为180 mL时，会明显抑制降解效果，推测________对降解效果影响较大。

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对硝基苯酚(PNP)颜色为黄色，若被分解则颜色消失，属于硝基苯酚类有机化合物的一种，主要来源于农药、医药、染料、塑料等生产企业排放，并广泛分布于环境中，对植物、微生物和动物均有毒性。某生物兴趣小组提出从污水厂曝气池长期驯化的污泥中分离出对硝基苯酚降解菌并研究其降解特性。回答下列问题：

(1)分离对硝基苯酚降解菌的选择培养基成分有：NH4NO3、KH2PO4、K2HPO4、NaCl、FeSO4、MgSO4·7H2O、PNP和琼脂；试从成分分析该选择培养基能起到筛选作用的原因是________________________。

(2)利用________________(方法)分离纯化得到单一的对硝基苯酚降解菌菌落，可以将在菌落周围是否产生____________作为筛选标记。

(3)若分离纯化后得到了两个菌落，这两个菌落的形态、大小、光泽度、颜色等________(填“一定”或“不一定”)相同。

(4)研究不同的糖类对硝基苯酚降解菌对PNP降解率的影响，得到的结果如表所示：

从表中可得出的结论是____________________________。

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对硝基苯酚（PNP）（分子式为C6H5N03）颜色为黄色，若被分解则颜色消失，属于硝基苯酚类有机化合物的一种，主要来源于农药、医药、染料、塑料等生产企业排放，并广泛分布于环境 中，对植物、微生物和动物均有毒性。某生物兴趣小组提出从污水厂曝气池长期驯化的污泥中 分离出对硝基苯酚降解菌并研究其降解特性。回答下列问题：

（1）分离对硝基苯酚降解菌常用________________培养基进行筛选，此培养基成分应如何设置才能达到分离的目的？_________。

（2）制备培养基的过程包括：计算→称重→溶化→灭菌→________，常用________方 法对培养基进行灭菌。

（3）利用________（方法）分离纯化得到单一的对硝基苯酚降解菌菌落，可以将在菌落周围是否产生________作为筛选标记。

（4）分离纯化所得菌种如需长期保存可采用________的方法。

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近年来，在处理富营养化水体的污水过程中，与化学、物理除氮方法比较，目前认为微生物反硝化去除氮素污染更为经济有效。科研工作者采用基因工程技术构建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，进行了相关研究。请回答问题。

（1）微生物的反硝化作用，是氮循环中一个重要的生物过程。亚硝酸盐还原酶（Nir）是该过程的关键酶，是由野生菌株YP4的反硝化基因（nirS）转录后，再翻译出具有___________作用的蛋白质。

（2）工程菌的构建

①研究者利用NCBI数据库查到nirS基因的碱基序列，设计引物，利用PCR技术扩增nirS基因。PCR技术利用了___________的原理，使用耐高温Taq酶而未使用普通DNA聚合酶的主要原因是______________________。

②研究者用HindⅢ和BamHI两种限制酶处理nirS基因与p质粒，在_______________酶的作用下进行体外连接，用连接产物转化大肠杆菌DH5，在含庆大霉素的培养基中进行培养并提取质粒，如果用HindⅢ和BamHI双酶切，得到两个片断电泳结果分别与_______________电泳结果基本一致，说明获得重组质粒pYP4S。

③将pYP4S转化到野生菌株YP4中形成工程菌YP4S，培养后进行PCR鉴定。为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图1所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的最佳一对引物组合是_________。某学生错选了图中的另外一对引物组合，扩增出长度为2．1kb的片段，原因是_______________。

（3）检测工程菌YP4S除氮的效能

①工程菌株YP4S在已灭菌的模拟污水中培养36h后，检测结果如图2。结果表明___________________。

②要进一步证明工程菌对含氮污水治理更有效，应___________________________。

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近年来，在处理富营养化水体的污水过程中，与化学、物理除氮方法比较，目前认为微生物反硝化去除氮素污染更为经济有效。科研工作者采用基因工程技术构建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，进行了相关研究。请回答问题。

（1）微生物的反硝化作用，是氮循环中一个重要的生物过程。亚硝酸盐还原酶（Nir）是该过程的关键酶，是由野生菌株YP4的反硝化基因（nirS）转录后，再翻译出具有___________作用的蛋白质。

（2）工程菌的构建

①研究者利用NCBI数据库查到nirS基因的碱基序列，设计引物，利用PCR技术扩增nirS基因。PCR技术利用了___________的原理，使用耐高温Taq酶而未使用普通DNA聚合酶的主要原因是______________________。

②研究者用HindⅢ和BamHI两种限制酶处理nirS基因与p质粒，在_______________酶的作用下进行体外连接，用连接产物转化大肠杆菌DH5，在含庆大霉素的培养基中进行培养并提取质粒，如果用HindⅢ和BamHI双酶切，得到两个片断电泳结果分别与_______________电泳结果基本一致，说明获得重组质粒pYP4S。

③将pYP4S转化到野生菌株YP4中形成工程菌YP4S，培养后进行PCR鉴定。为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图1所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的最佳一对引物组合是_________。某学生错选了图中的另外一对引物组合，扩增出长度为2．1kb的片段，原因是_______________。

（3）检测工程菌YP4S除氮的效能

①工程菌株YP4S在已灭菌的模拟污水中培养36h后，检测结果如图2。结果表明___________________。

②要进一步证明工程菌对含氮污水治理更有效，应___________________________。

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苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．某学校科研兴趣小组准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选出苯酚高效降解菌株．回答下列问题：

（1）甲图中苯酚降解菌的富集培养基应含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____．

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____．以达到获得苯酚高效降解菌的目的．应采用______方法来进行该菌种的计数与分离，统计的菌落数往往比活菌的实际数目要_____．

（3）制备平板培养基时除了需要水、碳源、氮源、无机盐和特殊营养物质外，还必须添加_____．培养基的灭菌方法为_____．

（4）乙图为连续划线法示意图，在该图中_____（填序号）区域最易获得单菌落．如需要长期保存该菌种，应采用甘油管藏的方法，保存温度为_____．

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Ⅰ.苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学设计实验从处理废水的活性污泥中分离筛选苯酚降解高效菌株，请回答下列问题：

（1）苯酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HP04、MgS04、苯酚和水，其中可作为碳源的有__________。

（2）将采集到的样品进行选择培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐____________，以达到增加苯酚降解菌浓度的目的。

（3）下图为平板划线法示意图，在图中____________（填图中序号）区域更易获得单菌落。制备平板培养基时除了需要水、无机盐及各种营养物质外，还必须添加______________________。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中2〜5号比色管的苯酚浓度应分别为______________________。

Ⅱ.番茄红素是一种类胡萝卜素（脂溶性），不溶于水，化学性质比较稳定，主要存在于番茄、西瓜等植物中。

（1）提取番茄红素常用____________（填“乙醇”或“石油醚”）萃取，理由是____________________。

（2）番茄红素提取实验的流程为：植物→粉碎→①→萃取→②→浓缩→番茄红素，其中，①表示________，②表示_____________。

（3）该实验操作过程中萃取环节采用水浴加热的原因__________________________。

（4）番茄红素粗品的鉴定方法是__________________________。

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苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．小明同学准备依据图1操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）甲图中苯酚降解菌的富集培养基应含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐________。以达到获得苯酚高 效降解菌的目的。应采用_____________ 方法来进行该菌种的计数与分离，统计的菌落数往往比活 菌的实际数目要_________________。

（3）制备平板培养基时除了需要水、碳源、氮源、无机盐和特殊营养物质外，还必须添加_____。培养基的灭菌方法为_____________________。

（4）乙图为连续划线法示意图，在该图中_____（填序号）区域最易获得单菌落。如需要长期保存该菌种，应采用甘油管藏的方法，保存温度为_____。

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