用限制酶E将长度为5.0kbp（千碱基对）质粒的一处切断；接着，用限制酶E获得含1.5kbp的目的基因；再用DNA连接酶连接成为重组质粒，扩增。现用限制酶B、E、H（组合）对克隆的重组质粒进行切割，电泳分离的结果如下图。则用限制酶B和限制酶H共同完全切割一个重组质粒，预计产生的断片长度（kbp）是（ ）
①2.0、3.0、1.0和0.5 ②2.0、3.0、0.5、0.5和0.5
③3.0和3.5 ④2.5和4.0
A.①或② B.①或③ C.③和④ D.③或④
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用限制酶E将长度为5.0kbp（千碱基对）质粒的一处切断；接着，用限制酶E获得含1.5kbp的目的基因；再用DNA连接酶连接成为重组质粒，扩增。现用限制酶B、E、H（组合）对克隆的重组质粒进行切割，电泳分离的结果如下图。则用限制酶B和限制酶H共同完全切割一个重组质粒，预计产生的断片长度（kbp）是（ ）
①2.0、3.0、1.0和0.5 ②2.0、3.0、0.5、0.5和0.5
③3.0和3.5 ④2.5和4.0
A.①或② B.①或③ C.③和④ D.③或④
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用限制酶E将长度为5.0kbp（千碱基对）质粒的一处切断；接着，用限制酶E获得含1.5kbp的目的基因；再用DNA连接酶连接成为重组质粒，扩增。现用限制酶B、E、H（组合）对克隆的重组质粒进行切割，电泳分离的结果如下图。则用限制酶B和限制酶H共同完全切割一个重组质粒，预计产生的断片长度（kbp）是（ ）
①2.0、3.0、1.0和0.5 ②2.0、3.0、0.5、0.5和0.5
③3.0和3.5 ④2.5和4.0
A.①或② B.①或③ C.③和④ D.③或④
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下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
A．DNA连接酶能将碱基互补的两个黏性末端的碱基对连接起来
B．获得目的基因一定要使用限制性核酸内切酶
C．目的基因和受体细胞均可来自动植物或微生物
D．利用质粒上的标记基因可用来筛选含重组DNA的细胞和转基因植物
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在基因工程的操作过程中，获得重组质粒不需要 （ ）
①DNA连接酶 ②限制性内切酶 ③RNA聚合酶 ④具有标记基因的质粒 ⑤目的基因 ⑥四种脱氧核苷酸
A．③⑥ B．②④ C．①⑤ D．①③⑥
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 （基团）连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有 种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。
（5）有关质粒描述错误的是（ ）
A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子
B、质粒是唯一的运载体
C、质粒上有多个酶切位点
D、质粒可在宿主外单独复制
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是_____末端，其产物长度为_____。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有_____种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_____的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是_______________。
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿连接。
（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿＿末端，其产物长度为＿＿＿＿＿。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
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如图表示用化学方法合成目的基因Ⅰ的过程。据图分析，下列叙述正确的是( )
A. 过程①需要DNA连接酶
B. 过程②需要限制性核酸内切酶
C. 目的基因Ⅰ的碱基序列是已知的
D. 若某质粒能与目的基因Ⅰ重组，则该质粒和目的基因Ⅰ的碱基序列相同
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
1.用图1中的外源DNA（含有目的基因D）和图2中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和 。前者（酶）的专一性很强，其作用特点是 。
2.应该使用限制酶BamHⅠ同时处理质粒、外源DNA，而不选择其他3种，原因在于（ ）。（多选）
A.若使用SmaⅠ或者MspⅠ会破坏目的基因
B.若使用SmaⅠ切割质粒，能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低
C.若使用MboⅠ切割质粒，质粒上会有2处被切开，会将质粒切成两段不利于筛选
D.使用限制酶BamHⅠ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端，以便目的基因和运载体定向连接，不至于反向连接
E．使用BamHⅠ切割质粒，质粒上会有1处被切开，破坏抗生素A抗性基因，保留抗生素B抗性基因，以便于将来筛选含目的基因的受体细胞
F．只有使用BamHⅠ切割，才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端。
3.若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有 种不同DNA片段。若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒，则可得到 个DNA片段。
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中，相邻两个脱氧核苷酸之间由 键连接。
（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿末端，其产物长度分别为＿＿＿。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子体细胞内分离出图1所示的DNA片段及其同源片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为____________________。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有__________种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过__________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是__________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加__________的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含__________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamHⅠ?__________。为什么？____________________。
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