啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：（1）科研人员将表达乙肝...

啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：

（1）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入___，发酵生产 转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有 __（A．1 个　　 B．2 个　　 C．3个D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为___。该转基因技术实践应用的成功标志是 __。

（2）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与 __融合，得到___，并促使其在体外分裂发育成 __，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是 __。

（3）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为 __，其作用是 __。

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转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原（HbsAg)亚单位疫苗，它采用转基因的方法将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，转入啤酒酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位。转基因酵母的产生过程如图所示。质粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四种限制性酶切割位点,且酶切序列如表所示。请回答：

(1)由于HBsAg基因序列已知，因此过程①可通过___________得到大量HBsAg基因，此外也可将其连接在________上，通过大肠杆菌培养扩增。

(2)构建含抗病基因的重组质粒时，应选用限制性核酸内切酶__________(不定项选择）（A.SnaBⅠ B.AvrⅡ C.SacⅠ D.BglⅡ)对含HBsAg基因的DNA和质粒进行切割，切割一个含HBsAg基因的DNA分子需要消耗

_______个水分子。

(3)不同的微生物通常需要不同的培养基进行培养，已知酿酒酵母培养基配方为:酵母提取物10g，蛋白胨20g,葡萄糖20g,定容至1L，加入1.5%琼脂粉制成固体培养基。则其灭菌条件应为（______）

A.高压蒸汽灭菌法，且温度为121℃,压力为1kg/cm2,灭菌15分钟

B.高压蒸汽灭菌法，且温度为95℃,压力为500g/cm2，灭菌30分钟

C.将配好的培养基放在超净台中，打开紫外灯和过滤风，灭菌30分钟

D.在超净台中,打开过滤风，在酒精灯火焰旁用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌

(4)将重组质粒导入酵母菌后，可用________法接种到固体培养基上。某同学在接种后得到如图所示的菌落分布，推测该同学接种时可能的操作失误是__________。若欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入HBsAg基因的酵母菌,则应使重组质粒中含有_______作为标记基因，这种培养基属于__________培养基。

(5)已知酵母菌的最适培养温度是28℃，在培养时可将培养皿倒置并放入__________进行培养。若不倒置培养将导致______________________。

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【加试题】啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：

（1）若实验室中啤酒酵母菌种被杂菌污染，可采用__进行纯化培养：接种时，先将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其______后，蘸取带菌培养物放到新的培养基中。倒置培养皿恒温培养直到出现____，再进行菌种鉴定。

（2）为实现啤酒发酵连续生产，酵母细胞固定化技术已在啤酒工业中广泛应用。例如，将啤酒酵母和海藻酸钠混合均匀，经CaCl2处理形成凝胶颗粒，而酵母细胞则被固定在其内部。这种固定化方法称为 ______（A．吸附法　　 B．包埋法　　 C．交联法　　 D．共价偶联法）。

（3）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入______，发酵生产转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有_______（A．1 个　　 B．2 个　　 C．3个　　 D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为_____。该转基因技术实践应用的成功标志是______。

（4）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与_____融合，得到_______，并促使其在体外分裂发育成________，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是____________。

（5）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为____________，其作用是____________________。

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啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：

（1）若实验室中啤酒酵母菌种被杂菌污染，可采用___进行纯化培养：接种时，先将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其__ 后，蘸取带菌培养物放到新的培养基中。倒置培养皿恒温培养直到出现___，再进行菌种鉴定。

（2）为实现啤酒发酵连续生产，酵母细胞固定化技术已在啤酒工业中广泛应用。例如，将啤酒酵母和海藻酸钠混合均匀，经CaCl2处理形成凝胶颗粒，而酵母细胞则被固定在其内部。这种固定化方法称为 __
A．吸附法 B．包埋法 C．交联法 D．共价偶联法

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回答有关现代生物技术的问题

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种慢性传染病，主要采用基因工程乙肝疫苗进行防治。科研人员采用转基因技术将乙肝病毒表面抗原（HBsAg）基因片段导入酵母细胞或中国仓鼠卵巢细胞（CHO），让重组后的酵母或CHO细胞在体外培养过程中产生HBsAg，将其分离、提纯之后制成乙肝疫苗，部分生产过程如图。

（1）下列①～④表示获得重组CHO细胞的步骤，其中步骤④是______；①-④步骤的正确排序是______。

①重组DNA分子导入CHO细胞

②筛选成功导入HBsAg基因的CHO细胞

③人工合成HBsAg基因

④______

（2）大量培养重组酵母和重组CHO细胞生产乙肝疫苗过程中，需将培养液中HBsAg与其他杂质分离，可采用的方法是______（多选）。

A．破碎细胞 B．加入硫酸铵 C．改变pH D．冷冻干燥

（3）利用重组酵母和重组CHO细胞生产乙肝疫苗，分别属于生物工程中的______、______领域。

（4）利用重组CHO细胞和重组酵母生产基因工程乙肝疫苗，目前都在进行规模化生产，但两种方法各有不足和优势。请在下列选项中选择合适的编号填入表对应的空格中，以表示你对此问题的分析（编号可重复选用）：

①结构简单、遗传操作较为容易

②表达的HBsAg更接近天然形式，疫苗稳定性好

③表达的HBsAg与天然形式存在差异

④培养条件要求高，生产成本较高

⑤可将HBsAg分泌到胞外，易于分离提纯

⑥易于培养、繁殖迅速，生产成本较低

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乙型肝炎病毒感染引发的乙型肝炎（以下简称乙肝）是医学上难以攻克的疾病，给人类的生活、学习和工作等造成较大的影响。请回答下列有关问题：

（1）医学上常用重组酵母菌表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）经纯化、加试剂吸附后制成重组乙肝疫苗，用于预防乙肝，这样的疫苗既安全又有效，其主要原因是_______________________________。重组酵母是通过___________工程培育成的，此项工程技术用到的工具酶有______________________。

（2）为了治疗乙肝，科研人员利用经乙肝病毒感染后的小鼠的___________细胞和骨髓瘤细胞进行杂交。然后进行两次筛选，从而获得专一的抗体，第二次筛选的目的是______________________，此抗体的主要优点是_____________________。

（3）肝脏是蛋白质代谢的重要器官，多种转氨酶存在于肝脏细胞中。在肝功能检查时，血液中转氨酶常作为诊断肝炎的一个重要参考指标，这主要是由于肝脏发生病变时，______________________，肝细胞中的转氨酶会大量进入血液，使血液中转氨酶的量增加。

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人参是珍贵的药用植物，研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原( HBsAg)的人参细胞表达系统，为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路，其构建过程如图所示，图中SmaⅠ、SstⅠ、 EcoRV为限制酶。请回答相关问题：

(1)②的构建过程除限制酶外还需要___________酶；想要从②中重新获得 HBSAg基因，所用的限制酶不能是EcoRⅤ或SmaⅠ，原因是_________________________________。

(2)将重组质粒转入农杆菌常用___________处理細胞：要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上，该过程所采用的质粒应含有______________________。

(3)分析图可知，②中应含有的标记基因是___________；过程⑤的目的是___________。

(4)研究人员将 HBsAg基因表达蛋白上的某位点氨基酸进行替换，通过一定的方法获得了新 HBsAg基因，进而获得了免疫效应更强的疫苗，请按照蛋白质工程的原理写出获得新 HBsAg基因的基本途径___________。

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人参是珍贵的药用植物，研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统，为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路，其构建过裎如图所示，图中SmaⅠ、SstⅠ、EcoRV为限制酶。请回答相关问题：

（1）②的构建过程除限制酶外还需要_________酶；想要从②中重新获得HBsAg基因，所用的限制酶不能是EcoRV或SmaⅠ，原因是_____________________________。

（2）将重组质粒转入农杆菌常用__________处理細胞；要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上，该过程所采用的质粒应含有____________________。

（3）分析图可知，②中应含有的标记基因是_______________；过程⑤的目的是______________。

（4）该疫苗进入机体后可刺激机体产生能与乙肝病毒特异性结合的_____________，同时还能产生______使机体长期对乙肝病毒具有免疫力。

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人参是珍贵的药用植物，研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统，为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路，其构建过裎如图所示，图中SmaⅠ、SstⅠ、EcoRV为限制酶。请回答相关问题：

（1）②的构建过程除限制酶外还需要_________酶；想要从②中重新获得HBsAg基因，所用的限制酶不能是EcoRV或SmaⅠ，原因是_____________________________。

（2）将重组质粒转入农杆菌常用__________处理細胞；要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上，该过程所采用的质粒应含有____________________。

（3）分析图可知，②中应含有的标记基因是_______________；过程⑤的目的是______________。

（4）该疫苗进入机体后可刺激机体产生能与乙肝病毒特异性结合的_____________，同时还能产生______使机体长期对乙肝病毒具有免疫力。

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将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，为预防乙肝开辟了一条新途径。请回答下列问题：

（1）获得乙肝病毒表面抗原基因后，常利用______技术进行扩增。构建的基因表达载体要有________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。把基因转人农杆菌内时常用________处理农杆菌。

（2）使用农杆菌将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中后，还需要采用__________技术培育成植株。培育过程中器官发生和形态建成，主要通过平衡的_________进行调控。从变异角度看，转基因育种的原理是_______________。

（3）在分子水平上，可采用____________的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。

（4）假定抗虫基因插入宿主染色体的部位是随机的。且整合到染色体上的抗虫基因均正常表达。对这些转基因草莓进一步研究发现，其中一些植株体细胞中含两个抗虫基因。让这些转基因草莓植株自交，发现大约有1/16的子代果实中未提取到相应的抗原，可能的原因是______________________________。

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