人体器官移植目前主要受制于免疫排斥问题和供体不足的问题，未来可以利用转基因克隆猪为人类提供...

人体器官移植目前主要受制于免疫排斥问题和供体不足的问题，未来可以利用转基因克隆猪为人类提供能用于移植的器官。转基因克隆猪的培育过程如下图所示。请据图回答以下有关问题：

（1）虽然小型猪的器官可用来替代人体器官进行移植，但小型猪器官表面的某些抗原蛋白仍可引起免疫排斥。利用基因工程方法对猪器官进行改造时，可将器官供体基因组导入某种调节因子，该调节因子属于基因工程中的_____________。

（2）若过程①的受体细胞是胚胎细胞，则之后进行核移植的难度___________（填“高于”或“低于”）体细胞核移植，因为胚胎细胞_________________________________。

（3）从猪的卵巢中采集到的卵母细胞需要置于含有_________________混合气体的培养箱中进行培养，其中CO2的主要作用是____________________________。

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人体移植器官短缺是一个世界性难题。目前科学家正试图利用基因工程方法对哺乳动物器官进行改造，已培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官，其操作过程如图：

（1）过程一：获取供体组织块并剪碎后，需用_______处理，使组织细胞分散。

（2）过程二中需要用Cas9将a-Gal抗原基因从供体DNA中敲除，则Cas9是_____酶。可将含有a-Gal抗原基因的DNA片段用放射性同位素标记作为探针，使探针与②细胞的DNA杂交，若_______，则表明该基因已成功敲除。

（3）过程三：将人类基因导入受体细胞常用_______技术，在工具酶______的作用下将该基因与②细胞的DNA进行定点整合。检测人类基因是否成功表达，可用_______技术。

（4）过程五：通常需要将早期胚胎培养至_______阶段才可进行胚胎移植。进行核移植后的重组细胞可以发育成基因修饰克隆供体是因为_______。

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通过对胚胎干细胞体外诱导分化，可以培育出人造组织器官，用来解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。流程如下图所示。

（1）过程①和②需要对动物细胞进行培养，为防止培养过程中的污染，通常在细胞培养液中添加一定量的__________。此外还应定期更换培养液，其目的是______________________________。

（2）过程③常采用__________的方法，该过程一般要在卵母细胞培养至__________再进行。在进行过程⑤之前要先进行过程③的原因是________________________________________。

（3）在胚胎干细胞的培养液中加入__________，可以诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。

（4）早期器官移植失败的原因是免疫系统会对来自其他人的器官进行攻击，免疫系统的组成包括________。图示流程为解决器官移植后免疫排斥的问题带来了希望，若将图中获得的组织器官移植给个体________（填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应。

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供体细胞的抗原决定基因能编码抗原或与抗原形成的关的酶，导致器官移植过程中出现免疫排斥。科学家利用基因工程方法对猪的基因组进行改造，以解决人体移植器官的短缺和免疫排斥问题。回答下列问题：

（1）对猪基因组进行改造，可以选择某种有调控作用的目的基因，重组后导入爱体细胞，以达到抵制猪抗原决定基因_______________的目的。进行DNA重组时需要使用的工具酶是___________。

（2）选择猪胚胎干细胞作为受体细胞，胚胎干细胞是由_____________或______________中分离出来的一类细胞。将目的基因导入后，利用标记基因的作用_____________________含有目的基因的受体细胞。

（3）将含有目的基因的胚胎干细胞注入猪囊胚，而后将囊胚通过________________技术移入受体子宫，获得转基因猪。

（4）采用核移植技术克隆转基因猪时，应选用处于______________期的卵母细胞作为受体细胞；随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞，经诱导分化形成多种器官，这是利用了胚胎干细胞的_________________。

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人体移植器官短缺是一个世界性难题。目前，科学家正试图利用基因工程方法对猪的器官进行改造，再结合克隆技术，培养出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。下图为科学家借助CPISPR－Cas9 基因编辑技术剔除猪抗原决定基因的示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列），请回答下列问题：

（1）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和_________________。图中充当该酶的物质是_________________。

（2）Cas9－sgRNA 复合体能够精准识别某核苷酸序列的原因可能是_________________。

（3）培育转基因猪时，应使用_________________技术将剔除了猪抗原决定基因的基因表达载体导入猪成纤维细胞中，再将该细胞的细胞核注入_________________期的去核卵母细胞中，构建重组胚胎。

（4）胚胎培养液中除了一些无机盐和有机盐外，还需要添加“两素”（维生素、激素）、“两酸”等营养成分，以及血清等物质，其中“两酸”是指_________________。

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“治疗性克隆”可用胚胎干细胞克隆出人体不同组织细胞，以用于医学研究和治疗。下列相关叙述错误的是(　　 )

A．该技术解决了临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题

B．人类治疗性克隆的核心技术是胚胎干细胞培养技术

C．胚胎干细胞可克隆出不同组织细胞的根本原因是基因的选择性表达

D．中国政府既反对克隆人或动物，又反对治疗性克隆

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“治疗性克隆”可用胚胎干细胞克隆出人体不同组织细胞，以用于医学研究和治疗。下列相关叙述错误的是

A. 该技术解决了临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题

B. 人类治疗性克隆的核心技术是胚胎干细胞培养技术

C. 胚胎干细胞可克隆出不同组织细胞的根本原因是基因的选择性表达

D. 中国政府既反对克隆人或动物，又反对治疗性克隆

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“治疗性克隆”可用胚胎干细胞克隆出人体不同组织细胞，以用于医学研究和治疗。下列相关叙述错误的是

A.该技术解决了临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题

B.人类治疗性克隆的核心技术是胚胎干细胞培养技术

C.胚胎干细胞可克隆出不同组织细胞的根本原因是基因的选择性表达

D.中国政府既反对克隆人或动物，又反对治疗性克隆

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临床上某些疾病的治疗需要器官移植，但是又普遍存在供体器官不足或器官移植后免疫排斥的问题，为了解决这些问题，人们提供了很多设想，请回答下列问题：

（1）免疫排斥主要是有______细胞引起的，临床上通常使用免疫抑制剂来抑制该细胞的增殖，从而提高器官移植的成功率。

（2）从新生儿脐带血分离出部分细胞保存，需要器官移植的时候进行自体移植，在这些细胞培养液中需加入___________因子，才能培育出需要的器官。但是这些细胞不同于ES细胞，因为ES细胞来源于早期胚胎或________细胞，功能上具有发育的全能性。

（3）利用核移植技术获得器官：哺乳动物核移植分为_________核移植和体细胞核移植两种类型。后一种方式可以取病人的体细胞，注入处于_________时期的___________细胞中，通过电刺激方法促使融合，进一步诱导其发育成特定器官。

（4）利用基因工程提供供体：科学家正试图利用基因工程对小型猪的器官进行改造，在改造中导入抑制抗原表达的基因。如果已知目的基因的核苷酸序列，通常采用___________方法人工合成获取目的基因。获得的目的基因与运载体结合后通常采用___________技术将其导入受精卵最终获得转基因猪。

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Anti基因是小型猪器官表面抗原基因，人工合成的reAnti基因的模板链与Anti基因的模板链互补。科学家利用合成的reAnti基因培育出转基因克隆猪，用于解决人类器官移植时免疫排斥。

(l)利用PCR技术对reAnti基因进行扩增，其原理是 ___，在构建基因表达载体时，用两种不同的限制酶切割reAnti基因和运载体DNA来获得不同的黏性末端，原因是____。

(2)猪胎儿成纤维细胞培养过程中，需要用 ___酶将组织分散成细胞悬液。培育转基因猪时，应使用 ___技术将含有reAnti基因的表达载体导入猪成纤维细胞。再将该转基因猪的细胞核注入____时期的卵母细胞中，构建重组胚胎。

(3)胚胎培养液中除了一些无机盐和有机盐外，还需要添加“两酸、两素”以及动物血清，其中的“两酸”是指____。

(4)用 ___技术检测出转基因克隆猪的细胞核DNA中含有reAnti基因，但器官表面不含有抗原，原因是____。

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