兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对...

兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在　 　 　 酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板在体外利用　 　 　 反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成　 　 　 ，再导入用氯化钙处理的　 　 　 ，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是　 　 　 。

A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织

B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽

C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根

D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于　 　 　 上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是　 　 　 ，从而使叶片保持正常形态。

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兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在　 　 　 酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板在体外利用　 　 　 反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成　 　 　 ，再导入用氯化钙处理的　 　 　 ，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是　 　 　 。

A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织

B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽

C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根

D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于　 　 　 上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是　 　 　 ，从而使叶片保持正常形态。

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黑麦草具有抗除草剂草甘膦的能力，是因为黑麦草拥有编码抗草甘膦酶的基因。科学家利用该基因．通过转基因技术获得了抗除草剂草甘膦的玉米新品种。培育新品种过程中用到了PCR技术（如图所示），请回答下列问题:

（1）通过反转录法得到_______________文库，它属于部分基因文库，可从中选取抗草甘膦酶的基因。

（2）体外获得大量编码抗草甘膦酶的基因要利用PCR技术，该技术所依据的原理为_________，图中物质A是__________，B酶是__________。

（3）将目的基因导入植物细胞有多种方法，最常用的是_______________。

（4）若需要对转入抗草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定，需要对玉米_____。

（5）若实验结果不理想，为了提高抗草甘膦酶活性，可以通过___________工程设计和改造编码抗草甘膦酶的基因。

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人们试图利用基因工程技术将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰中，以培育转基因的蓝色玫瑰花。请回答下列问题：

（1）将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰细胞之前需要先构建基因表达载体，这一过程所需要的工具酶是_______。基因表达载体中除含有蓝色基因外，还应含有_________、终止子、标记基因和复制原点。在体外，可通过PCR技术扩增蓝色基因，为了保证PCR反应的进行，反应体系需要加入_____________酶、模板DNA、dCTP，dATP、dGTP、dTTP，以及____________等。

（2）将基因表达载体导入白玫瑰细胞内常用的方法是____________，而检测目的基因是否导入白玫瑰染色体DNA上，常用____________技术。

（3）将导入了蓝色基因的白玫瑰细胞培养成个体，需采用________技术，该技术利用的原理是_________。

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凝乳酶是奶酪生产中的关键，从小牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。请分析回答：

（1）从小牛体内提取的凝乳酶基因通常需要通过___________技术进行扩增，扩增时一般需要在引物的5′端设计一段___________酶的识别序列，以便构建重组DNA分子，并需要在反应体系中加入___________种引物。

（2）研究者利用4种限制酶切割目的基因和质粒，各限制酶的识别序列和切割位点如下图所示。酶切破坏了 DNA分子中的___________键，每一次切割会产生___________个游离的磷酸基团。酶切后的产物连接时，目的基因上SalⅠ切割产生的末端应与质粒上___________切割产生的末端相连接。连接完成后，该连接点___________（能/不能）被这两种限制酶中的某一种切割。

（3）经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍，可通过___________技术对该凝乳酶进行改造。

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关于基因工程产物的安全性，下面说法不合理的是

A．转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中

B．目的基因的产物可能会影响到受体细胞原有基因的表达

C．目的基因(如杀虫基因)本身编码的产物可能会对人体产生毒性

D．目的基因通过花粉的散布转移到其他植物体内，从而可能打破生态平衡

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关于基因工程产物的安全性，下面说法不合理的是

A．转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中

B．目的基因的产物可能会影响到受体细胞原有基因的表达

C．目的基因(如杀虫基因)本身编码的产物可能会对人体产生毒性

D．目的基因通过花粉的散布转移到其他植物体内，从而可能打破生态平衡

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几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：

(1)在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是__________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是__________________________。

(2)以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是__________________________。

(3)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________________________(答出两点即可)。

(4)当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是____________。

(5)若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是__________________________。

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下列关于基因工程及其应用的叙述正确的是(　　)

A. 若要生产转基因抗病水稻，可先将目的基因导入大肠杆菌中，再转入水稻细胞

B. 用氨基酸序列推测合成的目的基因与原基因的编码区中的外显子一致

C. 用DNA探针能检测饮用水中重金属物质的含量

D. 作为运载体要有多种限制酶的切点，但对一种限制酶而言，最好只有一个切点

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基因疫苗是指编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划利用基因疫苗，通过基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：

(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是___________________________________，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、___________________、标记基因等。

(2)动物基因工程常用的受体细胞是___________，因为该细胞的全能性高，一般用______法将目的基因导入受体细胞。

(3)欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检的方法及结果是从转基因牛中提取________，用_________________杂交，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白，如果不出现杂交带，表明奶牛中未出现抗原蛋白。

(4)胚胎工程最后一道工序处是胚胎移植，其实质是____________________ 。

(5)为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用什么样的胚胎进行分割_________？

(6)现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用_______________________技术获得更多具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。

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