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天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用．研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精．请回答下列问题：
（1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是 ，用 将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子 ，以完成工程菌的构建．
（2）若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是 ；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用 检测．
（3）将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，请解释该现象发生的原因．
（4）如何进一步鉴定不同的转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小？ ．
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泡菜（乳酸发酵过的蔬菜）是许多亚洲国家的传统食品，在发酵液中通常发现的微生物包括乳酸菌、酵母和丝状真菌。如图表示这3种不同微生物群中活细胞数和卷心菜乳酸发酵过程中pH值的变化。发酵液中的溶解氧随时间下降，在第22天被完全耗尽。下列说法错误的是（ ）
A.pH值从第1天到第3天的下降主要由乳酸菌产生的乳酸引起
B.酵母细胞从第10天到第22天的生长与发酵液中的氧气有关
C.酵母细胞在第26天后开始产生酒精
D.一些丝状真菌在低pH值下表现出较高的耐受性
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泡菜（乳酸发酵过的蔬菜）是许多亚洲国家的传统食品，在发酵液中通常发现的微生物包括乳酸菌、酵母和丝状真菌。如图表示这3种不同微生物群中活细胞数和卷心菜乳酸发酵过程中pH值的变化。发酵液中的溶解氧随时间下降，在第22天被完全耗尽。下列说法错误的是（ ）
A.pH值从第1天到第3天的下降主要由乳酸菌产生的乳酸引起
B.酵母细胞从第10天到第22天的生长与发酵液中的氧气有关
C.酵母细胞在第26天后开始产生酒精
D.一些丝状真菌在低pH值下表现出较高的耐受性
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泡菜（乳酸发酵过的蔬菜）是许多亚洲国家的传统食品，在发酵液中通常发现的微生物包括乳酸菌、酵母和丝状真菌。如图表示这3种不同微生物群中活细胞数和卷心菜乳酸发酵过程中pH值的变化。发酵液中的溶解氧随时间下降，在第22天被完全耗尽。下列说法错误的是（ ）
A.pH值从第1天到第3天的下降主要由乳酸菌产生的乳酸引起
B.酵母细胞从第10天到第22天的生长与发酵液中的氧气有关
C.酵母细胞在第26天后开始产生酒精
D.一些丝状真菌在低pH值下表现出较高的耐受性
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泡菜（乳酸发酵过的蔬菜）是许多亚洲国家的传统食品，在发酵液中通常发现的微生物包括乳酸菌、酵母和丝状真菌。如图表示这3种不同微生物群中活细胞数和卷心菜乳酸发酵过程中pH值的变化。发酵液中的溶解氧随时间下降，在第22天被完全耗尽。下列说法错误的是（ ）
A.pH值从第1天到第3天的下降主要由乳酸菌产生的乳酸引起
B.酵母细胞从第10天到第22天的生长与发酵液中的氧气有关
C.酵母细胞在第26天后开始产生酒精
D.一些丝状真菌在低pH值下表现出较高的耐受性
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（一）目前我国主要利用淀粉原料生产酒精。
（1）淀粉原料需经过一系列处理才能用于酵母菌发酵，原因是________。在处理中可利用α-淀粉酶、β-淀粉酶和_______酶。进行酵母菌菌种扩大培养时，若培养液中酸度明显升高，说明培养液被___________污染。
（2）发酵前期，酵母菌的繁殖速度较快，原因是发酵液中含有一定量的___________ 和充足的营养物质。发酵时，当培养液中乙醇浓度超过________ 时，酵母菌就会死亡。
（3）在 pH=3．2 的乙酸-乙酸铵缓冲液中，乙醇使甲基橙褪色。由此，可用_____ 法检测发酵液中的乙醇浓度，乙醇浓度与 OD 值的关系是 ________。
（4）将酵母菌_______处理，不仅可以提高细胞密度，且可以反复使用，提高产量。
（二）人血清白蛋白（HSA）在临床上需求量很大，通常从人血液中提取，但提取量有限，因此科学家利用基因工程和胚胎工程等技术培育转 HSA 基因牛，该种牛能生产含 HSA 的牛乳，下图是培育流程图，据图回答下列问题：
（1）图中过程①需要用___________ 酶最终得到双链 DNA 分子；该 DNA 分子往往需要经过 PCR 扩增。为了能与酶切后的质粒进行连接，需要在扩增前设计的引物上添加_________。
（2）过程②是基因工程的核心步骤，为了提高该过程的连接成功率，除了要考虑温度等环境因素外，还应考虑_________（至少写 2 点）因素。
（3）若过程③选用牛胚胎干细胞作为受体细胞，则过程④利用的技术有_________ ， 若将上述重组胚胎干细胞直接注入囊胚期的内细胞团，___（填一定不、 不一定或一定）能得到产生含 HSA 牛乳的转基因牛，原因是_________。
（4）若过程③选用受精卵作为受体细胞，则在进行过程⑤之前，需要对早期胚胎细胞进行 DNA分析和_______ ；若在转基因母牛的牛乳中检测到_______ ，说明 HSA 基因成功表达。
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精，但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程，请分析回答下列问题。
(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中的液体经适当稀释后，用 (方法)接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。
(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌 。从存活的酵母菌中提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。
(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏 能力的酿酒酵母作为受体菌。
(4)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示：
据图分析，将转基因酿酒酵母接种在以 为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的 糖被快速消耗，随着发酵继续进行，转基因酿酒酵母能够 ，说明所需菌株培育成功。
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（8分）常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母培育的过程，请分析回答下列问题：
（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用___________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中液体经适当稀释后，接种于_____________培养基上，适宜条件下培养，获得各种菌落。
（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖作为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌 。从存活的酵母菌提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。
（3）将目的基因连接到一种穿梭质粒（可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒）上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏 能力的酿酒酵母作为受体菌。
（4）对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示。
据图分析，将转基因酿酒酵母接种在_____________________为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的___________被快速消耗，随着发酵继续进行，酿酒酵母能够______________________________________________，说明所需菌株培育成功。
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常见的酿酒酵母菌只能利用葡萄糖而不能利用木糖,自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母菌的培育过程,请分析回答下列问题:
(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室,用 将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,瓶中的液体经适当稀释后,用 法接种于固体培养基上,在适宜的条件下培养,获得各种菌落。
(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌 。从存活的酵母菌提取DNA,并用PCR技术大量扩增目的基因。
(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母菌中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因,即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后,应接种于含 的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时,由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖,应选择缺乏 能力的酿酒酵母菌作为受体菌。从细胞结构看,酵母菌不同于大肠杆菌的主要特点是 。
(4)对转基因酿酒酵母菌发酵能力进行测试,结果如下图所示。
据图分析,将转基因酿酒酵母菌接种在 为碳源的培养基中进行发酵能力测试,最初培养基中的 糖被快速消耗,随着发酵继续进行,转基因酿酒酵母菌能够 ,说明所需菌株培育成功。
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母培育的过程，请分析回答下列问题：
（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用___________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中液体经适当稀释后，接种于_____________培养基上，适宜条件下培养，获得各种菌落。
（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖作为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌__________________________________________________________。
从存活的酵母菌提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。
（3）将目的基因连接到一种穿梭质粒（可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒）上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含___________________________的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏__________________________能力的酿酒酵母作为受体菌。
（4）对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如右图所示。
据图分析，将转基因酿酒酵母接种在_____________________为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的___________被快速消耗，随着发酵继续进行，酿酒酵母能够______________________________________________，说明所需菌株培育成功。
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