基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重...

基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：

（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　       　。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是________。

（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（    ）

A．促使目的基因导入受体细胞中     B．促使目的基因在寄主细胞中复制

C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功

（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？________

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基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：

（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是________。

（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（    ）

A．促使目的基因导入受体细胞中        B．促使目的基因在寄主细胞中复制

C．使目的基因的转移容易被检测出来    D．使目的基因容易表达成功

（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？

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（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：

第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。

第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。

第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。

请根据上述资料，回答下列问题：

（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成________。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是________；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为________细胞。

（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是________。

（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因________。

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基因敲除是应用 DNA 重组原理发展起来的一门新兴技术。以小鼠为实验动物构建“基因敲除细胞”的过程如下：

第一步：从囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。

第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入新霉素抗性基因等。由于同源臂与靶基因的 DNA 正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。

第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。基本原理如下图所示。

请根据上述资料，回答下列问题：

（1）第一步分离出的 ES 细胞具体是由囊胚的_________分离培养获得，上述资料中的靶基因与目的基因的本质区别是_____。

（2）在把目的基因导入胚胎干细胞前，应首先完成_____，该过程中所需要的工具酶是_____，接入新霉素抗性基因的作用是_________。

（3）通过该技术获得一只含目的基因的小鼠，通过有性生殖产生的后代________（“是” 或“否”）都含该目的基因，原因是_____。

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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导入受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，达到基因敲除的目的。由此可推测

A．基因敲除实际上是删除某个基因，达到使该基因“沉默”的目的

B．利用基因敲除技术不能修复细胞中的病变基因

C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因           D．基因敲除技术可治疗先天性愚型

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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导人受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是

A．基因敲除实际上是删除某个基因，从而达到使该基因“沉默”的目的

B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因

C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因

D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天愚型（21三体综合征，患者多出一条21号染色体）

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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导人受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除说法正确的是(　 　)

A．基因敲除实际上是删除某个基因，从而达到使该基因"沉默"的目的

B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因

C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因

D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天性愚型

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基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，将同源DNA片段导人受体细胞，使同源DNA片段在原有位置替代了靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。下列有关基因敲除的说法正确的是

A．基因敲除实际上是删除某个基因，从而达到使该基因“沉默”的目的

B．利用基因敲除技术，不能修复细胞中的病变基因

C．基因敲除可定向改变生物体的某一基因

D．从理论上分析，利用基因敲除技术可治疗先天性愚型

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2007年诺贝尔生理学或医学奖授予在“基因靶向”技术方面作出突出贡献的三位科学家。“基因靶向”技术指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下列有关的说法中，不正确的是（   ）

A．实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为它具有发育的全能性

B．由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用早期胚胎培养和胚胎移植技术

C．获取ES细胞的常用方法有从早期胚胎(囊胚内滋养层)中分离或从胎儿的原始性腺中分离

D．可通过提取其蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交进行检测。

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实验人员将一段外源DNA片段（包含约850个基因）与丝状支原体（一种原核生物）的DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是

A．该技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等

B．由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界并不会破坏生物多样性

C．人造生命扩散到自然界，有可能造成环境安全性问题

D．此项技术可能被用来制造生物武器，从而危及人类安全

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