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（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：
第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。
第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。
第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成________。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是________；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为________细胞。
（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是________。
（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因________。
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基因敲除是应用 DNA 重组原理发展起来的一门新兴技术。以小鼠为实验动物构建“基因敲除细胞”的过程如下：
第一步：从囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入新霉素抗性基因等。由于同源臂与靶基因的 DNA 正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。
第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。
第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。基本原理如下图所示。
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）第一步分离出的 ES 细胞具体是由囊胚的_________分离培养获得，上述资料中的靶基因与目的基因的本质区别是_____。
（2）在把目的基因导入胚胎干细胞前，应首先完成_____，该过程中所需要的工具酶是_____，接入新霉素抗性基因的作用是_________。
（3）通过该技术获得一只含目的基因的小鼠，通过有性生殖产生的后代________（“是” 或“否”）都含该目的基因，原因是_____。
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基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：
（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的 与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和 。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是________。
（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（ ）
A．促使目的基因导入受体细胞中 B．促使目的基因在寄主细胞中复制
C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功
（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？________
________
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基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：
（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的 与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和 。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是________。
（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（ ）
A．促使目的基因导入受体细胞中 B．促使目的基因在寄主细胞中复制
C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功
（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？
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下列技术依据DNA分子杂交原理的是（ ）
①用DNA分子探针诊断疾病 ②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞杂交 ③目的基因与运载体结合形成重组DNA分子 ④快速灵敏地检测饮用水中病毒的含量 ⑤利用囊胚中滋养层细胞进行性别鉴定 ⑥目的基因是否表达检测
A、①②③⑤ B、①③④⑤ C、②③⑤⑥ D、①④⑤⑥
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下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，回答问题
（1）过程 （填标号）是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体中目的基因前端必须有 （结构）
（2）③过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸、葡萄糖，还需加入等天然成分
（3）②过程的受体细胞通常为 ，在转录水平上检测GFP基因是否表达的方法是
（4）④过程通过胚胎移植技术实现，科学家想获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好的，形态正常的 ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分隔刀或分割针进行处理
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基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：
（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即______和从_______中分离。
（2）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的__。
（3）在基因表达载体中，启动子是______聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是_______。
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我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是
A．构建抗虫基因表达载体过程中需要限制酶和DNA连接酶
B．重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失
C．抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传
D．转基因抗虫棉若表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
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在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( )
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草细胞
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
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在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（ ）
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草细胞
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
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