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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：
（1）分析上图可知，构建重组质粒（如图所示）最好选用 限制酶，理由是 。
（2）工业生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的处理方法是 。现在生产凝乳酶多采用重组毛霉或重组酵母菌，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是 。
（3）研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是 ，该生物工程技术的实质是 。
（4）转基因技术和细胞工程在动植物中都有广泛应用，但是胚胎工程只是指对动物的 所进行的多种亚显微操作和处理技术。
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图是基因工程中获取目的基因和构建重组质粒过程，请回答有关问题：
①科学家己经测出该酶的氨基酸序列，因此可以通过__________方法来获取目的基因，获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增；②分析上图可知，构建重组DNA分子（如图所示）最好选用__________限制酶，理由是____________________。
（2）工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的处理方法是___________________。现在生产凝乳酶多采用重组毛霉或重组的酵母菌，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是____________________。
（3）研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍，科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是___________。该生物工程技术的实质是__________。
（4）转基因技术和细胞工程在动植物都有广泛应用，但是，胚胎工程只是指对动物的__________所进行的多种显微操作和处理技术。
（5）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理_________（至少答二项）。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
（1）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①科学家已经测出该酶的氨基酸序列，因此可以通过____________方法来获取目的基因。获得目的基因后，常利用__________技术在体外将其大量扩增。
②构建重组DNA分子（如图所示）最好选用________限制酶，理由是_________________。
③工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉或重组的酵母菌来生产，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是________________________。
④研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_________________。
（2）转基因技术和细胞工程在动植物都有广泛应用，但是，胚胎工程只是指对动物的________所进行的多种显微操作和处理技术。
（3）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答三项）：______________________________________________________________________________。
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凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。如图表示EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点．回答下列问题：
（1）根据图中EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是_____，将切割后的质粒和目的基因连接起来需要_____酶．构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是_____识别和结合的部位。
（2）工业化生产过程中，若采用重组大肠杆菌生产凝乳酶，该过程中将目的基因导人大肠杆菌前，常常用_____处理细胞，使之处于一种能吸收周围环境中的DNA分子的生理状态，这种细胞称为_____细胞。
（3）研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_____。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是_____。
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运用转基因技术，将奶牛细胞中编码凝乳酶的基因转移到大肠杆菌细胞中，达到大规模生产凝乳酶的目的。下图表示用作运载体的质粒和目的基因所在DNA片段。下列操作与实验目的不符的是
A. 用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA连接酶构建基因的表达载体
B. 用含氨苄青霉素的培养基筛选出的即为导入目的基因的细菌
C. 可用PCR技术大量扩增目的基因
D. 用Ca2+处理大肠杆菌使其易于转化
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【生物——选修3：现代生物科技专题】奶酪生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌。请结合下图回答：
（1）利用PCR技术扩增目的基因原理与细胞内DNA复制类似（如左图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含ATP和Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和___________。
（2）为了食品安全，右图所示的表达载体需用___________酶切除抗性基因的部分片段，再用___________酶使表达载体重新连接起来。选用缺失URA3基因的酵母菌作为受体细胞（必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活），为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，所使用的培养基___________（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶。
（3）工业生产过程中，选用大肠杆菌作为受体细胞不能正常表达出凝乳酶，而选用酵母菌则能，原因是酵母菌含有______________________。
（4）测定凝乳酶基因转录的mRNA序列，测得从起始密码子到终止密码子之间的序列为1201个碱基，经判断这段序列的测定是错误的，为什么？_______________________。
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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)凝乳酶基因可从构建的凝乳酶基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从前者获取的凝乳酶基因__________（填“含有”或“不含有”）启动子。
(3)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。
(4)构建基因表达载体过程中需要用__________（酶）处理。目的基因转录过程中，__________能使转录在所需要的地方停止下来。
(5)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(6)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_______。
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凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。
(2)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。构建的基因表达载体中通常含有标记基因，其作用是__________________。
(3)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。
(4)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_____________________________________。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用___________法将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵。受体细胞不选用体细胞的理由是______________________。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行___________，目的是确定要培育的个体能产牛奶。
③可采用抗原-抗体杂交法来鉴定转基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。该方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的单克隆抗体，请写出制备该抗体的实验思路___________。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力強而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过___________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有肘需要在引物的5’端设计___________（填“限制酶”/“DNA连接酶”/“RNA聚合酶”）的识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用___________作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，应直接改造的是___________（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。
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抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用_______法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是______。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行_______，目的是确定要培育的个体能产奶。
③可采用_________法来鉴定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过________形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5＇端设计________(填“限制酶”、“DNA连接酶”或“RNA聚合酶”）识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子(如图2所示)时最好选用__________作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产髙效凝乳酶，应直接改造的是________(凝乳酶蛋白\凝乳酶mRNA\凝乳酶基因）。