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基因敲除是一种基因工程操作技术，该技术针对某个序列已知但功能未知的基因，改变其结构，使其功能丧失，进而推测出该基因的生物学功能。
（1）将基因敲除杂合子小鼠雌雄互交，剪取子代小鼠尾尖，提取得到鼠尾组织基因组DNA，使用特定的引物，采用_________方法进行扩增并电泳，得到如图结果。图中WT所对应的是野生型小鼠，KO和HET对应的分别是_________。对所有子代鼠的电泳结果进行统计，WT、HET、KO的数量比例约为1∶2∶1，说明该基因的遗传符合_________定律。
（2）敲除基因的纯合子往往生活力和繁殖力低，甚至会在胚胎期死亡，妨碍了对该基因在成年动物体内功能的研究。需要重新设计实验程序，使基因的敲除发生在成年动物特定组织和特定时间内。
①在肾脏集合管细胞中，AQP2启动子特异性地与_________结合，开始转录并产生水通道蛋白，这被称为基因的_________。
②研究人员找到了一段被称为loxP位点的DNA序列，该序列是酶C的作用位点，如下图所示，当基因X位于_________时，在酶C的作用下被敲除。
③采用基因工程等方法获得在某基因两侧插入LoxP序列的纯合小鼠A。一般情况下，小鼠A的表现型与野生型小鼠_________（相同/不同）。
④另外获得一种转基因小鼠B，在转入的酶C基因前插入_________序列，可以使酶C在肾脏集合管处表达。
（3）请根据以上材料，设计实验程序获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的小鼠：_________。
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基因敲除是一种基因工程操作技术，该技术针对某个序列已知但功能未知的基因，改变其结构，使其功能丧失，进而推测出该基因的生物学功能。
（1）将基因敲除杂合子小鼠雌雄互交，剪取子代小鼠尾尖，提取得到鼠尾组织基因组DNA，使用特定的引物，采用_________方法进行扩增并电泳，得到如图结果。图中WT所对应的是野生型小鼠，KO和HET对应的分别是_________。对所有子代鼠的电泳结果进行统计，WT、HET、KO的数量比例约为1∶2∶1，说明该基因的遗传符合_________定律。
（2）敲除基因的纯合子往往生活力和繁殖力低，甚至会在胚胎期死亡，妨碍了对该基因在成年动物体内功能的研究。需要重新设计实验程序，使基因的敲除发生在成年动物特定组织和特定时间内。
①在肾脏集合管细胞中，AQP2启动子特异性地与_________结合，开始转录并产生水通道蛋白，这被称为基因的_________。
②研究人员找到了一段被称为loxP位点的DNA序列，该序列是酶C的作用位点，如下图所示，当基因X位于_________时，在酶C的作用下被敲除。
③采用基因工程等方法获得在某基因两侧插入LoxP序列的纯合小鼠A。一般情况下，小鼠A的表现型与野生型小鼠_________（相同/不同）。
④另外获得一种转基因小鼠B，在转入的酶C基因前插入_________序列，可以使酶C在肾脏集合管处表达。
（3）请根据以上材料，设计实验程序获得只在肾脏集合管处进行基因敲除的小鼠：_________。
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（16分）科研人员向野生型拟南芥的核基因组中随机插入已知序列的Ds片段（含卡那霉素抗性基因），导致被插入基因突变，筛选得到突变体Y。因插入导致某一基因（基因A）的功能丧失，从突变体Y的表现型可以推测野生型基因A的功能。
（1）将突变体Y自交所结的种子用70%酒精_____ ___处理后，接种在含有卡那霉素的培养基中，适宜条件下光照培养。由于卡那霉素能引起野生型植物黄化，一段时间后若培养基上的幼苗颜色为绿色，则可确定植株DNA中含有______ __。
（2）统计培养基中突变体Y的自交后代，绿色幼苗3326株、黄色幼苗3544株，培养基中突变体Y的自交后代结果表明相关基因______ __（填“符合”或“不符合”）孟德尔自交实验的比例。
（3）研究人员进一步设计测交实验以检测突变体Y产生的__________ ____，实验内容及结果见下表。
| 测交亲本 | 实验结果 |
| 突变体Y（♀）×野生型（♂） | 绿色：黄色=1.03：1 |
| 突变体Y（♂）×野生型（♀） | 黄色 |
由实验结果可知，Ds片段插入引起的基因突变会导致____ __致死，进而推测基因A的功能与______ __有关。
（4）提取突变体Y的基因组DNA，限制酶切割后用_______ _连接，依据Ds片段的已知序列设计引物，扩增出_____ ____，进一步测定其序列。
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蛋白质工程的流程是
A．基因→表达→形成氨基酸序列的多肽链→形成具有高级结构的蛋白质→行使生物功能
B．对蛋白质进行分子设计→改造蛋白质分子→行使功能
C．蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列
D．蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→合成相应mRNA
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转基因生物的安全性往往引起人们争论的技术原因主要是 （ ）
①转移基因的功能往往未知
②转移基因的结构完全未知
③外源基因插入宿主基因组的部位往往随机
④外源基因不少却是异种生物的基因
⑤目前对基因结构、基因间的相互作用及基因的调控机制等了解有限
A．①②③ B．②③⑤ C．③④⑤ D．①④⑤
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根据以下植物基因工程的操作步骤，回答有关问题。
（1）利用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因（基因序列未知），需根据相应蛋白质的氨基酸序列设计多种引物，原因是____________，基因表达载体中目的基因上游的____________是RNA聚合酶的识别位点。
（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是____________。
（3）下图是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入植物受体细胞的示意图。图中质粒含CRISPR基因和Cas9基因，CRISPR基因转录的sgRNA可以特异性识别细胞核DNA分子中的特定序列，Cas9基因表达的Cas9酶能切割被sgRNA识别的DNA序列。重组片段中的目的基因，能通过DNA损伤修复和被切割的DNA序列连接。
sgRNA通过____________特异性识别细胞核DNA分子中的有关序列，sgRNA、Cas9酶和基因工程中的基本工具____________作用相似。不同基因工程中利用的CRISPR/Cas9质粒有差异，这些质粒中所含的CRISPR基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的，所含的Cas9基因通常是____________（填“相同”或“不同”）的。
（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入受体细胞与“（2）”中使用的方法相比，优点是____________。
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下列生物大分子空间结构改变后，导致其功能丧失的是（ ）
A.解旋酶使 DNA 分子的空间结构改变
B.RNA 聚合酶使基因片段的空间结构改变
C.高温引起抗体的空间结构发生改变
D.刺激引起离子通道蛋白空间结构改变
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蛋白质工程的基本途径是
①预期蛋白质功能 ② 推测应有的氨基酸序列
③表达（转录和翻译）④形成预期功能的蛋白质
⑤合成相对应的脱氧核苷酸序列（基因）
⑥设计预期的蛋白质结构
A、①②③⑤⑥④ B、⑤③②⑥④①
C、①⑥②⑤③④ D、③⑥②①④⑤
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蛋白质工程的设计程序中正确的一组是
①合成蛋白质分子结构 ②基因的脱氧核苷酸序列 ③mRNA
④蛋白质预期功能 ⑤推测氨基酸序列 ⑥蛋白质的预期结构
A．⑥→②→③→④→⑤→① B．⑤→④→③→⑥→①→②
C．④→⑥→⑤→②→③→① D．②→③→⑤→①→⑥→④
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某植物蛋白酶抑制剂基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，原理如下图所示，其中①〜③表示有关过程，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示有关物质。请回答。
（1）过程①反应体系中，需要加入___________种引物，还需加入___________酶，生成杂交键物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端増加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列[AAA(A) n]，其目的是便于后续引物设计，进而有利于过程③获得目的基因序列，过程③反应体系需要添加的新引物序列是___________。
（3）与物质Ⅲ的化学组成相比，物质Ⅰ的不同之处在于Ⅰ中含有___________；与过程③相比，过程①中碱基配对方式的不同之处是___________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需增加___________识别序列，以便与相应的载体重组，再利用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为___________细胞，以利于将重组质粒导入细胞。