图8为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中ampr为抗氨苄青霉素基因）。下列相关叙述中，不...

图8为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中amp^r为抗氨苄青霉素基因）。下列相关叙述中，不正确的是                                （  ）

A.用限制酶PstⅠ、SmaⅠ切割含目的基因的DNA

B.过程②用农杆菌转化法将重组质粒导入受体细胞

C. amp^r用于筛选转化细胞和促进目的基因的表达

D.过程④可利用DNA分子探针进行目的基因检测

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下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中ampr为抗氨苄青霉素基因）。下列叙述不正确的是

A. 可同时选用限制酶PstI、Sma I对含目的基因的DNA进行切割

B. 过程②可采用农杆菌转化法将含目的基因的表达载体导入受体细胞

C. 质粒上的抗性基因有利于筛选含目的基因的细胞和促进目的基因的表达

D. 图中过程④可以利用放射性同位素标记的目的基因作为探针进行筛选

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下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中amp^r为抗氨苄青霉素基因）。下列叙述不正确的是

A．可同时选用限制酶PstI、Sma I对含目的基因的DNA进行切割

B．过程②可采用农杆菌转化法将含目的基因的表达载体导入受体细胞

C．质粒上的抗性基因有利于筛选含目的基因的细胞和促进目的基因的表达

D．图中过程④可以利用放射性同位素标记的目的基因作为探针进行筛选

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（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图，图二为质粒限制酶酶切图谱。鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列，Ampr为抗氨苄青霉素基因，其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）获取鱼的抗冻蛋白基因途径主要有　　　　　 。为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的　　　　　 之后 。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的　　　　　 过程。

（2）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。该酶的特点　　　 。在此实例中，应该选用限制酶　　　　　 切割。

（3）要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有　　　　　 作为标记基因。

（4）研究人员通常采用　　　　　 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用　　　　　 技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因),其中①、④表示相关的操作步骤,甲、乙表示相关结构或细胞。Pst Ⅰ酶和Sma Ⅰ酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是(　 )

A.图中甲代表的是基因表达载体,乙可代表番茄细胞

B.可用Pst Ⅰ酶和Sma Ⅰ酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C.若用Pst Ⅰ酶和Sma Ⅰ酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D.图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①、④表示相关的操作步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。Pst I酶和Sma I酶切割基因后将产生不同的黏性末端。据图分析下列说法错误的是（　　 ）

A．图中甲代表的是基因表达载体，乙可代表番茄细胞

B．可用PstI酶和SmaI酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C．若用PstI酶和SmaI酶同时完全切割质粒产生的DNA片段有3种

D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①。④表示相关的操作步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。Pst I酶和Sma I酶切割基因后将产生不同的粘性末端。据图分析下列说法错误的是

A．图中甲代表的是基因表达载体，乙可代表番茄细胞

B．可用Pst I酶和Sma I酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接

C．若用Pst I酶和Sma I酶切割质粒产生的DNA片段有3种

D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

(1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是______________________。

(2)据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶________切割目的基因和质粒。

(3)通过PCR技术获取目的基因时需设计________种引物；从cDNA文库中获得的目的基因________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

(4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是________。

(5)图乙农杆菌中的质粒应含有T－DNA，其作用是________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到____________工程。

(6)为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为________，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为________。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因(抗冻基因)番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

(1)图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是______________________。

(2)据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶________切割目的基因和质粒。

(3)通过PCR技术获取目的基因时需设计________种引物；从cDNA文库中获得的目的基因________(填“含有”或“不含有”)启动子和终止子。

(4)在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是________。

(5)图乙农杆菌中的质粒应含有T－DNA，其作用是________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到____________工程。

(6)为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为________，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为________。

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图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。

（1）图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B的原因分别是____。

（2）据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶______________切割目的基因和质粒。

（3）在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子的作用可能是___________________________________。

（4）图乙农杆菌中的质粒应含有T-DNA，其作用是___________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到________工程。

（5）为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为______。

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