(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用...

(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。

请回答：

(1)进行过程①时，需用　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　________。

(2)进行过程②时，需用　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取　　　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中　　　　(选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。

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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。

1）.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是________ ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。

2）.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是________。

3）.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________，这 两种酶作用的化学键都是________。

4）.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

5）.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　________　________　。

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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答

1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是________ ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。

2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是________。

3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________，这 两种酶作用的化学键都是。

4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。________

5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　________　________　。

7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无amp^R和tet^R  的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________________ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是_____________。

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肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

(1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg²⁺)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为________。

(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取________进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中________(RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。

(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为________。

(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为________的片段。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：

（1）进行过程①时，需用相关酶切开载体以插入let-7基因，该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为___________，同时，重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。

（2）进行过程②时，当细胞生长到表面___________时，需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。

（3）研究发现，let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析，肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________含量减少引起的，作出该假设的依据是_________________________。

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肺细胞中的let﹣7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let﹣7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图1．

请回答：

（1）进行过程①时，需用　　　　 酶切开载体以插入let﹣7基因．载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let﹣7基因转录，该部位称为　　　　 ．

（2）进行过程②时，需用　　　　 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养．

（3）研究发现，let﹣7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞提取　　　　 进行分子杂交，以直接检测let﹣7基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　　 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的．

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该技术基本流程如图１。

（１）进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为________。

（２）进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取________进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中________（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。

请回答：

（１）进行过程①时，需用　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　　　。

（２）进行过程②时，需用　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　（RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

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人肺细胞中的let -7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let -7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图：

请回答：

(1)理论上，基因组文库含有生物的_______基因；而cDNA文库中含有生物的_______基因。

(2)进行过程①时，需用__________酶切开载体以插入let -7基因；载体应含有启动子序列，该序列的作用为__________；有时候被切开的载体并没有插入let -7基因而形成空载的载体，此时可用含有_______序列的引物对载体进行PCR扩增，并通过检测扩增产物来筛选出重组载体。

(3)图中对肺癌组织块的处理应是__________，进行过程②时，需用胰蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞以避免出现_________现象，从而有利于传代培养。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员在体外利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制，其影响机理如图，请回答下列问题：

（1）利用基因工程技术抑制肺癌细胞的增殖过程中，还需使用　　　　　 技术。

（2）获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用　　　 技术，其依据的原理是　　　　　　 。

（3）基因表达载体构建过程中需使用的工具有　　　　　　　　　　　　　 。将基因表达载体导入肺癌细胞的常用方法是　　　　　　　 。

（4）根据图示分析，可从细胞中提取　　　　　　　　 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　　　 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

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