研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究,肺部细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示,据图回答
1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体,原因是________ ;如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成,脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。
2.图甲中在构建重组载体时,酶切目的基因和酶切质粒时,所用的限制酶可以不同,但是产生的粘性末端必须是________。
3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________, 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________,这 两种酶作用的化学键都是。
4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一,并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点,请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。________
5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂,空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开),重新接种到另外的培养器皿内再进行培养,这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时,需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
6.研究发现,let-7基因能影响RAS基因的表达,其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析,其作用机理是 ________ ________ 。
7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组,并将重组质粒导入原本无ampR和tetR 的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌,现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________________ ,图三结果显示,多数大肠杆菌内导入的是_____________。
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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究,肺部细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示,据图回答。
1).在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体,原因是________ ;如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成,脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。
2).图甲中在构建重组载体时,酶切目的基因和酶切质粒时,所用的限制酶可以不同,但是产生的粘性末端必须是________。
3).图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________, 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________,这 两种酶作用的化学键都是________。
4).原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂,空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开),重新接种到另外的培养器皿内再进行培养,这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时,需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
5).研究发现,let-7基因能影响RAS基因的表达,其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析,其作用机理是 ________ ________ 。
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研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究,肺部细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示,据图回答
1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体,原因是________ ;如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成,脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为________。
2.图甲中在构建重组载体时,酶切目的基因和酶切质粒时,所用的限制酶可以不同,但是产生的粘性末端必须是________。
3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是________, 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是________,这 两种酶作用的化学键都是。
4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一,并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点,请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。________
5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂,空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开),重新接种到另外的培养器皿内再进行培养,这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时,需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
6.研究发现,let-7基因能影响RAS基因的表达,其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析,其作用机理是 ________ ________ 。
7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组,并将重组质粒导入原本无ampR和tetR 的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌,现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是________________ ,图三结果显示,多数大肠杆菌内导入的是_____________。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该技术基本流程如图1。
(1)进行过程①时,需用________酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为________。
(2)进行过程②时,需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
(3)研究发现,let-7基因能影响RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞提取________进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是细胞中________(RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。
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肺细胞中的let一7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
(1)进行过程①时,需用________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时,需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时,在PCR反应体系的主要成分应包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等,若在该反应体系中,目的基因扩增了5代,则具有引物I的DNA所占的比例理论上为________。
(2)研究发现,let一7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取________进行分子杂交,以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中________(RASmRNA/RAS蛋白质)含量减少引起的。
(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子,用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子,说明此DNA分子的形态为________。
(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理,然后用这两种酶同时处理,得到如下片段(kb为千个碱基对):
限制酶 | 片段及长度 |
Hind Ⅲ | 2.5 kb,5.0 kb |
Sma I | 2.0 kb,5.5 kb |
Hind Ⅲ和Sma I | 2.5 kb,3.0 kb,2.0 kb |
可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段,再用限制酶EcoR I处理,结果导致凝胶上3.0 kb的片段消失,产生一种1.5 kb的新片段;那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割,则可得到长度分别为________的片段。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答:
(1)进行过程①时,需用相关酶切开载体以插入let-7基因,该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,该部位称为___________,同时,重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。
(2)进行过程②时,当细胞生长到表面___________时,需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。
(3)研究发现,let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析,肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中_________含量减少引起的,作出该假设的依据是_________________________。
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肺细胞中的let﹣7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let﹣7基因导入肺癌细胞实验表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图1.
请回答:
(1)进行过程①时,需用 酶切开载体以插入let﹣7基因.载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let﹣7基因转录,该部位称为 .
(2)进行过程②时,需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养.
(3)研究发现,let﹣7基因能影响RAS的表达,其影响机理如图2.据图分析,可从细胞提取 进行分子杂交,以直接检测let﹣7基因是否转录.肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中 (RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的.
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现代生物科技专题
肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答:
(1)进行过程①时,需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为 。
(2)进行过程②时,需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
(3)研究发现,let-7基因能影响RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞提取 进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中 (RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。
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人肺细胞中的let -7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let -7基因导人肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图:
请回答:
(1)理论上,基因组文库含有生物的_______基因;而cDNA文库中含有生物的_______基因。
(2)进行过程①时,需用__________酶切开载体以插入let -7基因;载体应含有启动子序列,该序列的作用为__________;有时候被切开的载体并没有插入let -7基因而形成空载的载体,此时可用含有_______序列的引物对载体进行PCR扩增,并通过检测扩增产物来筛选出重组载体。
(3)图中对肺癌组织块的处理应是__________,进行过程②时,需用胰蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞以避免出现_________现象,从而有利于传代培养。
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(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。
请回答:
(1)进行过程①时,需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为 ________。
(2)进行过程②时,需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
(3)研究发现,let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图乙所示。据图分析,可从细胞中提取 进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是细胞中 (选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
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肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员在体外利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制,其影响机理如图,请回答下列问题:
(1)利用基因工程技术抑制肺癌细胞的增殖过程中,还需使用 技术。
(2)获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用 技术,其依据的原理是 。
(3)基因表达载体构建过程中需使用的工具有 。将基因表达载体导入肺癌细胞的常用方法是 。
(4)根据图示分析,可从细胞中提取 进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中 (RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。
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