草甘膦是一种可以杀灭多种植物(包括农作物)的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于破坏植物叶绿体...

草甘膦是一种可以杀灭多种植物（包括农作物）的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于能够破坏植物叶绿体或质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法，让农作物产生更多的EPSPS酶，就能抵抗草甘膦，从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的培育分析正确的是

A．可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功

B．只能以大豆受精卵细胞作为基因工程的受体细胞

C．在转基因操作过程中一定要用同一种限制性核酸内切酶

D．只要EPSPS合成酶基因进入大豆细胞，大豆就会表现出抗草甘膦性状

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草甘膦是一种可以杀灭多种植物(包括农作物)的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于破坏植物叶绿体或质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法，让农作物产生更多的EPSPS酶，就能抵抗草甘膦，从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的培育分析正确的是

A．只能以大豆受精卵细胞作为基因工程的受体细胞

B．可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功

C．在转基因操作过程中一定要用同一种限制性核酸内切酶

D．只要EPSPS合成酶基因进入大豆细胞，大豆就会表现出抗草甘膦性状

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低毒性的广谱除草剂，能非特异性侵入并杀死所有的植物。为避免被草甘膦杀死，科学家将细菌的EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，提高其对草甘膦的耐受性。以下说法正确的是

A．EPSPS基因转录时以DNA的两条链同时作为模板，提高转录效率

B．EPSPS基因导入小麦叶肉细胞后，抗虫性状可随传粉受精过程遗传

C．可用抗原抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物

D．利用Ti质粒将EPSPS基因整合到小麦染色体上时需要DNA聚合酶

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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知。若ABC浇清水，DEF浇的水中含有草甘膦，上述DEF植物中，肯定能健康成长的是　　　　　　　　　 。

（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其作用是。

（3）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有　　　 种DNA片段。

（4）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？　　　　　　 请说明理由　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒（　　　　 ）

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

（6）图2中不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点　　　　　　　　　　 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（7）要想检测导入的EPSPS基因是否表达，在分子水平上可用　　　　　　　　　　 方法进行检测。

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草甘膦是一种低毒性的广谱除草剂，能非特异性侵入并杀死所有的植物，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。科学家从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，以提高其对草甘膦的耐受性。下列有关叙述正确的是（ ）

A. 要筛选出含EPSPS基因的突变菌株，应在培养基中加入EPSPS酶

B. 可用抗原—抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物

C. EPSPS基因转录时以DNA的两条链同时作为模板，提高转录的效率

D. EPSPS基因导入小麦叶肉细胞的叶绿体后，该性状可随传粉过程遗传

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草甘膦是一种低毒性的广谱除草剂，能非特异性侵入并杀死所有的植物，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。科学家从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，以提高其对草甘膦的耐受性。下列有关叙述正确的是（　 ）

A．要筛选出含EPSPS基因的突变菌株，应在培养基中加入EPSPS酶

B．可用抗原—抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物

C．EPSPS基因转录时以DNA的两条链同时作为模板，提高转录的效率

D．EPSPS基因导入小麦叶肉细胞的叶绿体后，该性状可随传粉过程遗传

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EPSPS是叶绿体中的一种酶，它能催化芳香族氨基酸的合成；草甘膦是一种除草剂，它能竞争性抑制EPSPS的作用,而使植物死亡。

（1）普通大豆施用草甘膦之后，电镜下可以看到叶绿体很快变形，其原因是氨基酸合成受阻直接影响了________

的合成，使叶绿体内的膨胀、破裂，导致其结构和功能严重受损从而使植物死亡。

（2）研究人员以大豆“黑农37”胚尖为外植体，利用农杆菌介导法将EPSPS基因成功转入大豆，大豆产生了更多的EPSPS来抵抗草甘膦，从而使其不被杀死。

（3）要测定EPSPS基因最终是否整合到大豆的某一染色体上，可用________方法，或直接测定该染色体的________。

（4）上述过程③的操作首先是将胚尖放入到含________的侵染液中处理，然后再转入到含________的培养基中培养形成抗性芽，最后长成抗草甘膦的大豆植株。大豆胚尖细胞能长出一个完整植株的原理是胚尖细胞具有________。

（5）抗性芽的诱导形成过程如下：配制完全培养基，在培养基中加入0.2mg/L吲哚丁酸和不同浓度的6-BA等物质，再将大豆胚尖接种到培养基上进行培养，结果如下表：

上述结果表明，随着培养基中6-BA浓度的增加，抗性芽的诱导率________。诱导抗性芽的6-BA最适浓度为________。抗性芽的形成必须要经过________过程。

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（13分）回答下列有关基因工程问题。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。

酶M特异性剪切的DNA片段是 ，则酶N特异性剪切的DNA片段是　　　　　　 。

多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有　　　　　　　 种。

图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。

（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。

（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入　　　　　　　　　　　　　　 。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。

（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和　　　　 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，影响植物正常生长，最终导致植物死亡。目前，发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过转基因处理，但是否成功未知（转基因处理过程不影响植物正常生长）。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有限制酶切点。据图回答：

（1）若A、B、C浇清水，D、E、F浇含有草甘膦的水，则A～F植物中，一定能正常生长的是_________________。

（2）一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外，还应包括_________________。若利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是_________________和_________________。

（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F没有表现出抗性，分析可能的原因_________________。

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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。据图回答下列问题：

（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是　　 　　。

（2）一个完整的基因表达载体除了目的基因、复制原点、启动子和终止子外，还应包括　　 　　。若需利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是　　 　　和　　　　 　　。

（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因

　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　。（2分）

（4）下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

①图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。

　　　　 　　　　。

②现用EcoRI酶切重组成功的质粒（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计），酶切后进行电泳观察，会出现长度为　　　　 　　　　kb的片段。（2分）

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