重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为通过乳腺生物反应器生产r...

重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为通过乳腺生物反应器生产rhTPO的相关过程。回答下列问题：

（1）构建重组质粒时选用的限制酶是__________，原因是____________________。

（2）重组质粒中的标记基因是__________。通常采用__________技术将重组质粒导入受精卵。早期胚胎培养到__________阶段可以移植到代孕母羊体内。

（3）目的基因探针__________（填“能”或“不能”）检测转基因母羊是否为纯合子，理由是________。

（4）最终可以从羊乳汁中分离出血小板生成素（rhTPO）。检测羊乳汁中是否含有人血小板生成素（rhTPO），常用___________________技术。

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[生物——选修3:现代生物科技专题]

重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为通过乳腺生物发生器产生rhTPO的相关过程。

（1）在获取目的基因时（填“能”或“不能”)用SmaI，原因是______________________________，重组质粒中的标记基因是__________________________，标记基因的作用是_______________。

（2）通常采用________技术将重组质粒导入受精卵，图中所示的过程与胚胎工程相关的有_____（至少写出两个）。

（3）采用SRY—PCR方法对早期胚胎进行性别鉴定，样本细胞取自_____________，以Y染色体中含有的特异性SRY基因为探针，通过_____________方法进行胚胎的性别鉴定。

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重组人血小板生成素（rhTPO)是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTPO的相关过程。请回答下列问题。

（1）构建重组质粒时选用的限制酶是____________，原因是__________________。重组质粒中的标记基因是___________，标记基因的作用是_________________________。

（2）通常采用__________技术将重组质粒导入受精卵，图中所示的过程与胚胎工程相关的有_________(至少写出两个）。

（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是___________技术，其次还需检测目的基因____________，这是检测目的基因是否发挥作用的第一步，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。

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重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTPO的相关过程。

（1）在获取目的基因时____________（填“能”或“不能”）用Smal，原因是____________，重组质粒中的标记基因是 ____________，标记基因的作用是____________。

（2）通常采用_________技术将重组质粒导入受精卵，图中所示的过程与胚胎工程相关的有_______（至少写出两个）。

（3）采用SRY— PCR方法对早期胚胎进行性别鉴定，样本细胞取自____________，以Y染色体中含有的特异性SRY基因为探针，通过____________方法进行胚胎的性别鉴定。

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利用基因工程技术可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。下图表示科学家将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并通过一系列技术手段制备生物乳腺反应器的流程图，请回答相关问题：

（1）图中将构建完成的基因表达载体导入绵羊受精卵所用的方法是___________________________。

（2）图中的A过程包括_________________和___________________技术。进行A之前必须对胚胎进行DNA分析________________鉴定，以获得能够符合生产要求的个体。

（3）为了鉴定目的基因是否成功表达，必须进行抗原-抗体杂交，目的蛋白相当于___________。

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生长激素是重要医药产品。科研人员利用基因工程构建乳房生物反应器，利用基因工程构建乳房生物反应器，首先要将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过乳汁大量生产生长激素。请回答下列问题：

（1）在构建基因表达载体过程中，使用两种酶切割含目的基因的DNA片段和载体的优点是：________

A．防止目的基因和载体的任意连接　　 　　 B．保证目的基因和载体的定向连接

C．防止目的基因自身连接　　　　　 　　 D．形成不同的黏性末端

（2）若选择胚胎干细胞作为受体细胞，采用核移植技术获得生物反应器比较容易，原因是胚胎干细胞分化程度______________，恢复其全能性相对容易。

（3）若选择胚胎干细胞作为受体细胞，通常用__________法将基因表达载体导入。从囊胚的__________中分离，可获取胚胎干细胞。

（4）若将幼体的组织离体进行细胞培养，经原代培养后分瓶继续培养，只有少数细胞存活下来，其遗传物质__________（发生/未发生）改变。

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科研人员利用胚胎干细胞培育转基因羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图，下列说法不正确的是

A. 过程①取供体囊胚的内细胞团培养胚胎干细胞，原理是细胞增殖

B. 过程②利用的人凝血因子K基因可以从人的基因组文库中获取

C. 过程③中通过选择培养基，可筛选出含有目的基因的胚胎干细胞

D. 凝血因子IX只在乳腺细胞中表达，原因是其他细胞不含有该基因

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科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如下图所示（成纤维细胞可增殖）。下列叙述错误的是

A. 过程②常用的方法是显微注射法

B. 代孕母羊要注射免疫抑制剂防止发生免疫排斥反应使移植胚胎死亡

C. 卵母细胞去核的目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞

D. 整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养从而获得大量的细胞群

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科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图所示：

（1）研究人员在过程①中，利用PCR技术扩增人凝血因子IX基因时，除了酶、引物、模板以外，还需要加入____________作为合成DNA的原料；PCR过程中需要不断调整反应体系的温度，一般情况下，至少需要______个不同的反应温度。

（2）通过步骤②获得的A，除了人凝血因子IX基因外，还含有_______________________（至少三个）等结构。

（3）过程④指_______________，重组胚胎可以与普通代孕母羊的子宫建立正常的生理和组织联系，但是出生后的转基因绵羊依然具有生产人凝血因子IX医用蛋白的能力，原因是___________________________________。

（4）理论上，可以通过少量整合有目的基因的成纤维细胞，克隆出大量转基因绵羊，请对这一问题做出两个合理的解释： ___________________；____________________。

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科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。

（1）A为含目的基因的（基因）表达载体，其化学本质是___　　 _　 _。

（2）过程①中用到的工具酶有　　　　　　 将A导入绵羊胎儿成纤维细胞中常用的方法是___　　 _　 。

（3）核移植的受体应选用___　　 期卵母细胞。在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是___　　 。重组细胞能发育成绵羊，是因为细胞核中具有___　　　　　　 。

（4）移植应选择胚胎发育到___ _　 阶段时进行；代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生___ _　　 ，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

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