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华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据图中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌细胞的培养
（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的___________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________。此外，每48h更换1次培养液，目的是___________；同时还要提供适宜的温度、___________、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
华蟾素浓度（μg/ml）
0
0.105
0.21
0.42
TopoⅡ基因表达量
+++++
++++
++
+
①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加______________________________________。
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是_______________________________。
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华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。 研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌 HepG-2 细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌 HepG-2 细胞的培养：
（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入____________。此外，每 48h 更换 1 次培养液，目的是________________。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理 HepG-2 细胞 12h、24h 和 48h，测定华蟾素注射液对 HepG-2 细胞增殖的影响，结果如下图。
由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。
（3）DNA 拓扑异构酶Ⅱ（简称 TopoⅡ）为真核生物所必需，在 DNA 复制、转录、重组及形成正确的染 色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。 华蟾素注射液处理 HepG-2 细胞 48h 后，采用 RT-PCR 技术检测 TopoⅡ基因的表达情况，RT﹣PCR是将mRNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术，具体过程如图丙。
①RT-PCR 即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2 细胞中的总 RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成 cDNA，再以 cDNA 为模板进行_________。
②要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要___________个引物B。
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华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌HepG-2细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌HepG-2细胞的培养：
（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入______。此外，每48h更换1次培养液，目的是__________。同时还要提供适宜的温度、______、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理HepG-2细胞12h、24h和48h，测定华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响，结果如下图。
由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。
（3）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录、重组及形成正确的染色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理HepG-2细胞48h后，采用RT-PCR技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如图丙。
①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行_________。
②由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是______。
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华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请回答下列问题：
Ⅰ.肝癌细胞的培养：
(1)培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________。此外，每48 h更换1次培养液，目的是_____________________________________；同时还要提供适宜的温度、_________、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
(2)DNA拓扑异构酶Ⅱ(简称TopoⅡ)为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48 h后，采用逆转录—聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
华蟾素浓度(μg/mL)
0
0.10
0.20
0.40
TopoⅡ基因表达量
＋＋＋＋＋
＋＋＋＋
＋＋
＋
①逆转录—聚合酶链式反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加________________。
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是____________。
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研究发现肿瘤细胞的生长增殖与端粒酶的活性有密切关系，为确定X、Y两种抑癌药物的作用机理，某科研小组进行了如下实验。请完成相关实验内容并回答问题。实验主要用品：悬浮培养的人肝癌细胞、溶于Z试剂中的X、Y药物制剂、相关培养和检测用具等（说明：Z试剂对细胞及药物作用不产生影响）
方法思路：
①将悬浮培养的人肝癌细胞均分甲、乙、丙三组
②甲组中加入适量的 作为对照，乙、丙组中各分别加入 X、Y药物制剂。
③在相同适宜的环境中培养一段时间，测定 。
实验结果：如下图l、2。
分析与讨论：
（1）由实验结果可推测人肝癌细胞中的端粒酶活性与细胞的生长增殖呈 关系。
（2）实验测得Y药物组中的端粒酶活性与对照组相同，请用柱状图表示该组的情况 。
（3）依据上述结果可以得出X、Y药物对肝癌细胞的作用是： ．
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药物A是一种新型免疫调节剂，临床用于肿瘤的治疗。研究人员利用H细胞对药物A的作用机理进行相关研究。
（1）H细胞是一种肝癌细胞，其产生的根本原因是____。细胞癌变后通常会表达特异性的膜蛋白，当体内出现癌细胞时，机体主要通过____免疫发挥免疫监 控和清除作用。
（2）将H细胞培养一段时间后，分别加入不同浓度的药物A溶液，24 h后测定细胞存活率，结果如下：
浓度/μmol·L–1
0
1
5
10
15
20
细胞存活率/%
100.0
98.21.
97.85
97.12
96.87
96.24
数据表明不同浓度的药物A与不加药物A处理后细胞存活率差异不明显，由此可以判断________________。
（3）研究人员对药物A的作用进行研究。将H细胞与T淋巴细胞按一定比例混合，分别加入用D溶剂溶解的不同浓度的药物A溶液，培养一段时间后统计各组癌细胞的凋亡率，结果如下：
浓度/μmol·L–1
0
5
10
15
癌细胞的凋亡率/%
3
13.4
29.3
55.3
①本实验对照组的设置应为____。（选填正确选项前的字母）
a单独培养的H细胞 b单独培养的T淋巴细胞 c混合培养的H细胞与T淋巴细胞 d加入等量的D溶剂 e加入等量的生理盐水
②实验结果说明 _______。
（4）已知IL-2、TNF-a是T细胞产生的两种杀伤性细胞因子，T细胞表面的PD-I和癌细胞表面的PD-LI结合后可以抑制T细胞的活性，使其无法识别癌细胞，导致癌细胞的免疫逃逸。为进一步研究药物A发挥免疫调节作用的机理，研究人员利用癌症模型鼠进行实验，测定不同组小鼠IL-2、TNF-a的表达量，结果如下表所示，同时测定了T细胞表面的PD-1和癌细胞表面的PD-L1表达量，结果如下图所示。
A药物剂量/mg•kg-1
IL-2
TNF-a
0
14.12
11.25
5
18.31
16.54
10
24.32
20.23
15
31.54
27.50
图表所示实验结果_____支持/不支持）药物A免疫作用机理的假设，理由是：药物A-方面____，增强对癌细胞的杀伤作用；另一方面____，抑制癌细胞增殖。
（5）请结合PD-1/PD-L1信号通路的作用机理，利用免疫学知识为治疗癌症提供一种新思路____。
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药物A是一种新型免疫调节剂，临床用于肿瘤的治疗。研究人员利用H细胞对其作用机理进行了相关研究。
（1）H细胞是一种肝癌细胞，机体主要通过________免疫发挥免疫监控和清除作用。但由于各种原因，癌细胞表面特异性抗原表达量________，无法被免疫细胞识别，从而实现免疫逃逸。
（2）将H细胞培养一段时间后，分别加入D溶剂溶解的不同浓度的药物A溶液，24h后测定细胞存活率。实验结果如表，由数据可知药物A对H细胞无明显的细胞毒性，原因是___________________。
浓度/µmol·L-1
0
1
5
10
15
20
细胞存活率/%
100．0
98．21
97．85
97．12
96．87
96．24
（3）研究人员对药物A的免疫调节作用进行研究。将H细胞与T淋巴细胞按一定比例混合，分别加入不同浓度的药物A溶液，培养一段时间后统计各组癌细胞的凋亡率。对照组的设置应为________。
①单独培养的H细胞 ②单独培养的T淋巴细胞 ③混合培养的H细胞与T淋巴细胞
④加入等量的D溶剂 ⑤加入等量的生理盐水
凋亡率统计结果如表，据此提出药物A的免疫调节作用是_____________。
浓度/µmol·L-1
凋亡率/%
对照组
3
1
13．4
10
29．3
15
55．3
（4）为进一步探究药物A发挥免疫调节作用的机理，研究人员又做了如下实验：
①已知IL-2、TNF-α是T细胞产生的两种杀伤性细胞因子，研究人员利用癌症模型鼠进行实验，测定了不同组小鼠IL-2、TNF-α的表达量，结果如表：
A药剂量/mg·kg-1
IL-2
TNF-α
0
14．12
11．25
5
18．31
16．54
10
24．32
20．23
15
31．54
27．50
②T细胞表面的PD-1和癌细胞表面的PD-L1结合后可以抑制T细胞的活性，使其无法识别癌细胞，导致癌细胞的免疫逃逸。研究者分别测定了①实验中T细胞表面的PD-1和癌细胞表面的PD-L1表达量，结果如图。上述实验结果_______（支持/不支持）药物A免疫作用机理的假设，原因是_____________________________________。
（5）请结合PD-1/PD-L1信号通路的作用机理，利用免疫学知识为治疗癌症提供一种新思路______________________。
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苦马豆素（SW）最早是从植物灰苦马豆中分离获得，为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，许多学者做了大量研究，请根据以下实验研究过程及研究结果回答问题。
①取小鼠肝癌Hepal-6细胞
②制成单细胞悬液，接种于多孔板，加入等量培养液，每组设5个平行孔
③于37℃、5%CO2培养箱中分别培养24h
④加入等量不同浓度SW溶液，于37℃、5%CO2培养箱中分别培养
⑤分别在24h、48h、72h时吸取培养液，观察结果，得到不同浓度SW对细胞存活率影响曲线（图1）
⑥将培养48h的培养液离心，细胞染色，在荧光显微镜下观察拍照，记录正常细胞和凋亡细胞数目，并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达量状况，汇总统计结果（表1）
（1）实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液，于37℃、5%CO2培养箱中培养的目的是____________________________________。
（2）实验中对照组的处理方法应为_____________________________，利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了_____________________________________。
（3）分析图1中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞作用效果的特点是：
①___________________________________________________________；
②____________________________________________________________。
（4）表1结果说明SW可以诱发细胞___________________，从分子水平上分析，SW可以导致癌细胞内__________的合成量增加，该基因表达的过程可以表示为______________________。
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来那度胺是一种新型免疫调节剂，临床用于肿瘤的治疗，研究人员利用HepG2细胞对其作用机理进行了相关研究。
（1）HepG2细胞是一种肝癌细胞，具有_________的特点，该细胞产生的根本原因是_________。当体内出现癌细胞时，机体主要通过_________免疫发挥免疫监控和清除作用。但由于各种原因，癌细胞表面抗原表达量_________，无法被识别，从而实现免疫逃逸。
（2）来那度胺对HepG2细胞毒性的研究
将HepG2细培养一段时间后，分别加入DMSO溶解的不同浓度的来那度胺溶液，24h后测定细胞存活率。实验结果如下表，说明__________________。
浓度/μmol·L-3
0
1
5
10
15
20
细胞存活率/%
100.0
98.21
97.85
97.12
96.87
96.24
（3）研究来那度胺的免疫调节作用
将HepG2细胞与淋巴细胞按一定比例混合，分别加入不同浓度的来那度胺溶液，培养一段时间后统计各组癌细胞的凋亡率。对照组的设置应为_________。
①单独培养的HepG2细胞 ②单独培养的淋巴细胞 ③混合培养的HepG2细胞与淋巴细胞 ④加入等量的DMSO ⑤加入等量的生理盐水
凋亡率统计结果如下表，说明__________________。
浓度/μmol·L-3
凋亡率/%
对照组
3
1
13.4
10
29.3
15
55.3
（4）探究来那度胺发挥免疫调节作用的机理
①已知IL-2、TNF-α是T细胞产生的两种杀伤性细胞因子，研究人员利用模型鼠进行实验，测定了小鼠IL-2、TNF-α的表达量，结果如下表。
来那度胺剂量/mg·kg-1
IL-2
TNF-α
0
14.12
11.25
5
18.31
16.54
10
24.32
20.23
15
31.54
27.50
②T细胞表面的PD-1和癌细胞表面的PD-L1结合后可以抑制T细胞的活性，使其无法识别癌细胞，导致癌细胞的免疫逃逸。研究者分别测定了①实验中两种细胞表面的PD-1/PD-L1表达量，结果如下图。
综合上述实验，推测来那度胺发挥免疫调节的作用机理：_________________。
（5）结合上述研究以及对PD-1/PD-L1信号通路的了解，请你为治行癌症提供一种新的思路。_________________
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青蒿素具有抗肿瘤的作用，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。临床上，药物的使用剂量对治疗很重要。请根据所给的实验材料完成实验。
实验材料：人肝细胞悬液，人肝癌细胞悬液（HepG2），培养液， 生理盐水，用生理盐水溶解的0．5ug/mL、1ug/mL、1．5ug/mL的青蒿素溶液，培养瓶，血细胞计数板等。
（1）实验目的是________________________________。
（2）实验思路：
①将等量的人肝细胞和肝癌细胞（HepG2）悬液各平均分为四组并编号，接种于若干含有等量培养液的培养瓶中。
②____________________________________。
③___________________________________。
④在37℃、5%CO2培养箱中继续培养。
⑤培养 72h后，各组取样，在显微镜下用__________________检测__________________。
（3）设计一张表格记录实验结果。_____________
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