-
华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。 研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌 HepG-2 细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌 HepG-2 细胞的培养：
（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入____________。此外，每 48h 更换 1 次培养液，目的是________________。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理 HepG-2 细胞 12h、24h 和 48h，测定华蟾素注射液对 HepG-2 细胞增殖的影响，结果如下图。
由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。
（3）DNA 拓扑异构酶Ⅱ（简称 TopoⅡ）为真核生物所必需，在 DNA 复制、转录、重组及形成正确的染 色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。 华蟾素注射液处理 HepG-2 细胞 48h 后，采用 RT-PCR 技术检测 TopoⅡ基因的表达情况，RT﹣PCR是将mRNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术，具体过程如图丙。
①RT-PCR 即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2 细胞中的总 RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成 cDNA，再以 cDNA 为模板进行_________。
②要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要___________个引物B。
-
华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌HepG-2细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌HepG-2细胞的培养：
（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入______。此外，每48h更换1次培养液，目的是__________。同时还要提供适宜的温度、______、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理HepG-2细胞12h、24h和48h，测定华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响，结果如下图。
由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。
（3）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录、重组及形成正确的染色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理HepG-2细胞48h后，采用RT-PCR技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如图丙。
①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行_________。
②由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是______。
-
华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据图中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌细胞的培养
（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的___________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________。此外，每48h更换1次培养液，目的是___________；同时还要提供适宜的温度、___________、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
| 华蟾素浓度（μg/ml） | 0 | 0.105 | 0.21 | 0.42 |
| TopoⅡ基因表达量 | +++++ | ++++ | ++ | + |
①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加______________________________________。
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是_______________________________。
-
华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请回答下列问题：
Ⅰ.肝癌细胞的培养：
(1)培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________。此外，每48 h更换1次培养液，目的是_____________________________________；同时还要提供适宜的温度、_________、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
(2)DNA拓扑异构酶Ⅱ(简称TopoⅡ)为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48 h后，采用逆转录—聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。
| 华蟾素浓度(μg/mL) | 0 | 0.10 | 0.20 | 0.40 |
| TopoⅡ基因表达量 | ＋＋＋＋＋ | ＋＋＋＋ | ＋＋ | ＋ |
①逆转录—聚合酶链式反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加________________。
②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是____________。
-
丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性菲醌化合物，其作用机制之一是诱导细胞凋亡．以下是相关的实验研究过程及结果：
实验材料：人肝癌细胞（HepG2），培养液，0.02% 二甲亚砜溶液，用 0.02% 二甲亚砜溶解的0.5ug/mL、1ug/mL、1.5ug/mL的丹参酮溶液，培养瓶等．
①将等量的人肝癌细胞（HepG2）悬液，分别接种于若干含有等量培养液的培养瓶中；将培养瓶放于37℃、5%CO2培养箱中培养24h，静置、去掉上清液；
②分别加入等量的 0.02% 二甲亚砜溶液，用 0.02% 二甲亚砜溶解的0.5ug/mL、1ug/mL、1.5ug/mL的丹参酮溶液，再加入等量的培养液，于37℃、5%CO2培养箱中继续培养；
③培养 72h，每 24h 用细胞计数仪检测癌细胞数．
（1）本实验的自变量是 ．实验中，每组细胞培养瓶不止一个，为了减少误差，需要对各种数据如何处理？ ．
（2）设对照组癌细胞增殖率为 100%，用下面公式计算各用药组癌细胞增殖率：增殖率（% ）=[（用药组各时段癌细胞数﹣用药组开始癌细胞数）/（对照组各时段癌细胞数﹣对照组开 始癌细胞数）]×100．得到如表数据：
①请将表中前48小时的数据转化为相应给药组细胞增殖率随时间变化的柱形图 ．
②通过数据和柱形图分析可以得出丹参酮对HepG2细胞的作用效果的特点是： ．
（3）将培养48h的培养液离心，去除上清液后经过一系列的处理及分析，得到对照组和给药组48h细胞周期变化、凋亡率及凋亡蛋白Bax和Bcl﹣2的表达量如表所示：
丹参酮 对HepG2细胞周期、凋亡率及凋亡蛋白基因bax和Bcl﹣2表达的影响
据此推测，丹参酮使HepG2细胞周期阻滞于 期．丹参酮可能通过促进HepG2内 的表达来诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤的生长．
-
丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性菲醌化合物，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。以下是相关的实验研究过程及结果：
实验材料：人肝癌细胞(HepG2)，培养液，0.02%二甲亚砜溶液，用0.02%二甲亚砜溶解的0.5 ug/mL、1 ug/mL、1.5 ug/mL的丹参酮溶液，培养瓶等。
①将等量的人肝癌细胞(HepG2)悬液，分别接种于若干含有等量培养液的培养瓶中；将培养瓶放于37 ℃、5%CO2培养箱中培养24 h，静置、去掉上清液；
②______________________________________________________________，
再加入等量的培养液，于37 ℃、5%CO2培养箱中继续培养；
③培养72 h，每24 h用细胞计数仪检测癌细胞数。
（1）请完善上述实验步骤中相关内容。
（2）本实验的自变量是________。实验中，每组细胞培养瓶不止一个，统计后求平均值，目的是________。
（3）顺铂(DDP)是一种DNA损伤药物，也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物。若要探究丹参酮联合顺铂对HepG2细胞生长的影响，应还需设置____________用药组才能得出结论。
-
丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性化合物，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。以下是相关的实验过程及结果：
实验材料：人肝癌细胞（HepG2），培养液， 0．02% 二甲亚砜溶液，用 0．02% 二甲亚砜溶解的0．5 μg/mL、1 μg/mL、1．5 μg/mL的丹参酮溶液，培养瓶，CO2培养箱等。
实验步骤：
①将等量的人肝癌细胞（HepG2）悬液，分别接种于若干含有 的培养瓶中；将培养瓶放于 培养24 h，静置、去掉 （填“上清液”或“沉淀物”）；
②给药组分别加入适量且等量的用 0．02% 二甲亚砜溶解的0．5 μg/mL、1 μg/mL、1．5 μg/mL的丹参酮溶液，对照组加入 。
③培养 72 h，每 24 h 用细胞计数仪检测癌细胞数。
④ 。
（1）请完善上述实验步骤中的相关内容。___________________。
（2）该实验的自变量________________。
（3）设对照组的癌细胞增殖率为100%，经计算得到各给药组的癌细胞增殖率如表：
丹参酮对HepG2细胞增殖率的影响/%
| 组别 | 培养时间/h |
| 24 | 48 | 72 |
| 对照组 | 100 | 100 | 100 |
| 给药组 μg/mL | 0．5 | 78 | 62 | 48 |
| 1．0 | 68 | 26 | 21 |
| 1．5 | 48 | 12 | 5 |
请将表中前48小时的数据转化为相应给药组细胞增殖率随时间变化的柱形图_________。
（4）顺铂（DDP）是一种DNA损伤药物，也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物。若要探究丹参酮联合顺铂对HepG2细胞生长的影响，应还需设置___________________给药组才能得出结论。
-
青蒿素具有抗肿瘤的作用，其作用机制之一是诱导细胞凋亡。临床上，药物的使用剂量对治疗很重要。请根据所给的实验材料完成实验。
实验材料：人肝细胞悬液，人肝癌细胞悬液（HepG2），培养液， 生理盐水，用生理盐水溶解的0．5ug/mL、1ug/mL、1．5ug/mL的青蒿素溶液，培养瓶，血细胞计数板等。
（1）实验目的是________________________________。
（2）实验思路：
①将等量的人肝细胞和肝癌细胞（HepG2）悬液各平均分为四组并编号，接种于若干含有等量培养液的培养瓶中。
②____________________________________。
③___________________________________。
④在37℃、5%CO2培养箱中继续培养。
⑤培养 72h后，各组取样，在显微镜下用__________________检测__________________。
（3）设计一张表格记录实验结果。_____________
-
来那度胺是一种新型免疫调节剂，临床用于肿瘤的治疗，研究人员利用HepG2细胞对其作用机理进行了相关研究。
（1）HepG2细胞是一种肝癌细胞，具有_________的特点，该细胞产生的根本原因是_________。当体内出现癌细胞时，机体主要通过_________免疫发挥免疫监控和清除作用。但由于各种原因，癌细胞表面抗原表达量_________，无法被识别，从而实现免疫逃逸。
（2）来那度胺对HepG2细胞毒性的研究
将HepG2细培养一段时间后，分别加入DMSO溶解的不同浓度的来那度胺溶液，24h后测定细胞存活率。实验结果如下表，说明__________________。
| 浓度/μmol·L-3 | 0 | 1 | 5 | 10 | 15 | 20 |
| 细胞存活率/% | 100.0 | 98.21 | 97.85 | 97.12 | 96.87 | 96.24 |
（3）研究来那度胺的免疫调节作用
将HepG2细胞与淋巴细胞按一定比例混合，分别加入不同浓度的来那度胺溶液，培养一段时间后统计各组癌细胞的凋亡率。对照组的设置应为_________。
①单独培养的HepG2细胞 ②单独培养的淋巴细胞 ③混合培养的HepG2细胞与淋巴细胞 ④加入等量的DMSO ⑤加入等量的生理盐水
凋亡率统计结果如下表，说明__________________。
| 浓度/μmol·L-3 | 凋亡率/% |
| 对照组 | 3 |
| 1 | 13.4 |
| 10 | 29.3 |
| 15 | 55.3 |
（4）探究来那度胺发挥免疫调节作用的机理
①已知IL-2、TNF-α是T细胞产生的两种杀伤性细胞因子，研究人员利用模型鼠进行实验，测定了小鼠IL-2、TNF-α的表达量，结果如下表。
| 来那度胺剂量/mg·kg-1 | IL-2 | TNF-α |
| 0 | 14.12 | 11.25 |
| 5 | 18.31 | 16.54 |
| 10 | 24.32 | 20.23 |
| 15 | 31.54 | 27.50 |
②T细胞表面的PD-1和癌细胞表面的PD-L1结合后可以抑制T细胞的活性，使其无法识别癌细胞，导致癌细胞的免疫逃逸。研究者分别测定了①实验中两种细胞表面的PD-1/PD-L1表达量，结果如下图。
综合上述实验，推测来那度胺发挥免疫调节的作用机理：_________________。
（5）结合上述研究以及对PD-1/PD-L1信号通路的了解，请你为治行癌症提供一种新的思路。_________________
-
药物X是一种抗肿瘤药物，它能有效减缓人肝癌细胞和肺癌细胞的数量增长，且对肝癌细胞的抑制作用大于肺癌细胞。科研人员还发现处理24小时无效果，处理48小时后才有显著的效果。为了验证上述观点，请利用以下提供的材料用具，设计实验思路，并预测实验结果。
实验材料:培养瓶若干个、动物细胞培养液、肝癌细胞悬液、肺癌细胞悬液、C02培养箱、药物X、显微镜、血细胞计数板等。
(要求与说明：实验初始时等量细胞悬液中细胞数量相等；肝癌细胞和肺癌细胞的增殖速率相同；血细胞计数板的具体操作不作要求；不考虑加入药物X后的体积变化；实验条件符合要求）
请回答：
(1)实验思路(其中实验分组用表格形式表示）：
___________
(2)请设计一个坐标系，用柱形图预测实验结果。
___________