如图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。回答下列问题：（1）如图1方框内代表的基因工...

如图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。回答下列问题：

（1）如图1方框内代表的基因工程过程是________，构建重组质粒要用到的“化学浆糊”是________。

（2）据图所示推断EcoRⅠ酶识别的核苷酸序列是_____________________。

（3）图1中，质粒经EcoRⅠ和HindⅢ联合酶切后形成1.Okb、0.8kb和3.2kb三个片段，重组质粒经EcoRⅠ酶单切后，形成1.Okb、4.8kb两个片段，目的基因的长度是___________kb。（1kb=1000碱基）

（4）在目的基因增殖过程中，图2表示一个具有四个核苷酸对的DNA片段经硫酸二乙酯（EMS）处理后，在正常溶液中经过2次复制后的产物之一 ，则说明EMS能将G改变为___________。

（5）图3为大肠杆菌的遗传信息传递和表达过程。据图3，下列叙述正确的有___________。

①a、b过程所需的原料在细胞中有8种

②a、b过程发生的场所主要在细胞核

③b、c中均会发生碱基配对情况，但配对方式不完全相同

④在细胞增殖过程中，只会发生了a过程，不会发生b和c过程

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回答下列关于遗传信息的传递与表达的问题

图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。

（1）上图方框内代表的基因工程过程是_____________________，构建重组质粒要用到的“化学浆糊”是____________________。

（2）据上图所示推断EcoRI酶识别的核苷酸序列是________________。

A.AGGAATTCGT　　 B.TCCAATTGCA　　　 C.GAATTC　　　 D.CTTAAG

（3）上图中，质粒经EcoRI和HindIII联合酶切后形成1.0kb、0.8kb和3.2kb三个片段，重组质粒经EcoRI酶单切后，形成1.0kb、4.8kb两个片段，目的基因的长度是_________kb。（1kb=1000碱基）

（4）关于制备图中大肠杆菌培养基的叙述，正确的是___________（多选）

A.制作固体培养基时可以加入琼脂

B.操作的顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒置培养

C.倒好培养基的培养皿，要立即将平板倒过来放置

D.制备待用的培养基可用紫外线照射进行灭菌

（5）在目的基因增殖过程中，下图表示一个具有四个核苷酸对的DNA片段经硫酸二乙酯（EMS）处理后，在正常溶液中经过2次复制后的产物之一。则说明EMS能将G改变为__________。

A.胞嘧啶　　 B.腺嘌呤　　　 C.胸腺嘧啶　　　 D.鸟嘌呤

下图为大肠杆菌的遗传信息传递和表达过程。

（6）据上图下列说法正确的有__________。

①a、b过程所需的原料在细胞中有8种

②a、b过程发生的场所主要在细胞核

③b、c中均会发生碱基配对情况，但配对方式不完全相同

④在细胞增殖过程中，只会发生a过程，不会发生b和c过程

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（五）回答下列有关基因工程的问题。

利用大肠杆菌作为受体，可以将人生长激素基因导入其中，最后合成人生长激素（蛋白质），从而大批量生产这种基因工程药物。

1.获取人生长激素目的基因的方法有两种。一是________，二是先确定目的基因在细胞DNA分子上的位置，这叫________，然后用________酶从人体细胞内分离。

基因工程中根据需要常对运载体质粒进行适当的改造。pIJ702是一种常用质粒（5.7kb，1kb=1000对碱基），限制酶SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列，如图14所示。

2.以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.6kb（1kb=1000对碱基）的SacⅠ/SphⅠ片段，构成重组质粒pZHZ8（6.7kb），由此判断目的基因为________ kb。将目的基因和质粒重新连接的酶是________。

图15显示含目的基因的DNA片段、限制酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所指部位为限制酶的切割位点，四种质粒的阴影部分表示标记基因）。

3.据图15分析，不适合作为目的基因载体的质粒是________。

A. ①③　　 B. 全都不适合　　 C. ②④　　 D. ①④

4.下列有关转基因技术与环境安全的叙述错误的是________。

A. 重组DNA的微生物在降解污染物的过程中可能会产生二次污染

B. 种植抗虫棉可以减少农药的使用量，对环境没有任何负面影响

C. 植物转基因技术产生的基因可向其他植物扩散，影响生物的多样性

D. 转基因生物所带来的环境安全问题在今后有可能得到解决

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生长激素是重要医药产品。科研人员利用基因工程构建乳房生物反应器，利用基因工程构建乳房生物反应器，首先要将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过乳汁大量生产生长激素。请回答下列问题：

（1）在构建基因表达载体过程中，使用两种酶切割含目的基因的DNA片段和载体的优点是：________

A．防止目的基因和载体的任意连接　　 　　 B．保证目的基因和载体的定向连接

C．防止目的基因自身连接　　　　　 　　 D．形成不同的黏性末端

（2）若选择胚胎干细胞作为受体细胞，采用核移植技术获得生物反应器比较容易，原因是胚胎干细胞分化程度______________，恢复其全能性相对容易。

（3）若选择胚胎干细胞作为受体细胞，通常用__________法将基因表达载体导入。从囊胚的__________中分离，可获取胚胎干细胞。

（4）若将幼体的组织离体进行细胞培养，经原代培养后分瓶继续培养，只有少数细胞存活下来，其遗传物质__________（发生/未发生）改变。

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（24分）生物学家用基因工程构建的某“工程菌”，经发酵可生产人生长激素。下图是用大肠杆菌构建的“工程菌”的生长曲线（甲）和生长速率变化曲线（乙）。请回答下列问题：

（1）构建该“工程菌”所依据的变异来源是，与人体细胞结构相比，它的主要结构特点是无________；与人体细胞内的生长激素基因相比，该“工程菌”细胞内的人生长激素基因不含________。

（2）生物学家配制了一种适合培养大肠杆菌的培养基，经分析发现，尿素是唯一氮源，这种培养基从用途来看，属于________培养基。

（3）甲曲线的b时期是________，在这一时期的后段，大肠杆菌死亡率________繁殖率（填大于、等于或小于）。

（4）大肠杆菌产生的人生长激素在乙曲线的（填字母）时期大量积累，属于代谢产物，合成它的细胞结构是________。

（5）在工业发酵上常以一定的速度不断添加新的培养基，同时又以同样的速度放出老的培养基，保证微生物对营养物质的需求。在生产上，这种方法________（填延长或缩短）了甲曲线的C时期，提高了发酵设备利用率，但更新培养基的速率过快会使活菌数大量减少，可能的原因是。在研究中，________（填能或不能）用此法培养来测定细菌生长曲线所需的相关数据。

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请回答下列利用基因工程方法生产人生长激素的问题:

（1）切割目的基因和质粒所用的工具是___________；将目的基因和质粒连接所用的工具是_________。

（2）人的生长激素基因能在大肠杆菌中表达的原因是_____________。基因工程的关键步骤是________。终止子的作用是____________________。

（3）要想检测导入的生长激素基因是否表达，在分子水平上可用____________法进行检测。

（4）如果质粒上含有四环素抗性基因，作为受体细胞的大肠杆菌细胞内要_________(填“含有”或“不含有”)四环素抗性基因，以利于在含四环素的培养基中筛选出含重组质粒的受体菌。酵母菌细胞也常常作为基因工程的受体细胞，与大肠杆菌等细胞相比，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行_______并分泌到细胞外，便于提取。

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下图表示培育生物新品种的过程，回答下列问题:

（1）研究人员根据已知的人生长激素基因序列，采用__________方法获得目的基因，之后再利用_______________技术扩增目的基因，最后得到的转入生长激素基因牛若要检测其目的基因是否表达，可采用_______________方法。

（2）通过基因工程将无限增殖调控基因(PIG)导入受体细胞Ⅱ，再经过检测和筛选得到的细胞Ⅲ具有的_____________________________________特点，其分泌产生的单克隆抗体最主要的优点在于它的________________、_______________，并可能大量制备。

（3）过程④将含抗虫基因的重组Ti质粒导入棉花受体细胞通常采用________________法，过程⑤所体现的生物学原理是__________________________。

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继乳腺生物反应器之后，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，请回答下列问题：

（1）基因表达载体包括　　　　　　 ，在构建基因表达载体过程中，获取目的基因时用　　　　　　　　 进行切割。人的生长激素基因能整合到小鼠染色体的DNA上，原因是　　　　　　　　 。

（2）将人的生长激素基因导入小鼠的受体细胞时，常选用　　　　　　 作为受体细胞，原因是　　　　 。

（3）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　　 ，在胚胎移植前通过　　　　　　 技术可获得较多胚胎。

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下图是通过基因工程方法将人表皮细胞生长因子基因（EGF）和TCS基因连接起来，利用小鼠生产人表皮生长因子——天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图。请回答：

（1）为了建立含有EGF的cDNA文库，应从健康人体的______细胞中提取总mRNA合成cDNA。从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF______。

（2）在①过程中，应使用的限制酶是_________，在融合蛋白基因的首端还应插入_____。

（3）将重组质粒导入大肠杆菌前，需先用_________处理大肠杆菌。为了筛选含重组质粒的大肠杆菌，首先置于含有_________的培养基进行培养，获得大量重组质粒后，将其再移到小鼠体内。

（4）乙图表示培育具有人表皮细胞生长因子基因（EGF）和TCS基因融合基因的小鼠的基本过程示意图。①过程涉及细胞间的_________和融合过程，将重组质粒转入到受精卵中采用_________方法，经过②_________和③过程，可获得转基因小鼠。小鼠出生后可以从其尾巴细胞中提取_________分子进行分析，通过_________方法，检测小鼠细胞是否含有人融合基因。

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图示为利用基因工程、细胞工程等技术生产人生长激素的流程。请据图作答：

（1）过程①采用的方法是　　　　　　 ，过程②需用　　　　　　 处理目的基因和质粒。

（2）重组质粒中，引导目的基因表达的序列是　　　　　　 ，它是　　　　 的识别和结合位点。

（3）用　　　　　 对大肠杆菌进行处理，使其处于感受态。

（4）进行细胞培养的过程⑥中，常使用的酶是　　　　　　 ，培养液中通常要加入　　　　　　 以防止污染，CO2培养箱中CO2所起的作用是　　　　　　 。

（5）欲培育出多头基因型相同的转基因牛，在过程⑤中常采用胚胎分割技术，该技术需把　　　　　　　 进行均分。除此外，还可采用　　　　　　 技术。

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