某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。（1...

某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置于经过　　　　　　　　　 法灭菌处理的　　　　　 （填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行　　　　　　 处理。之后，将菌液涂布接种于以　　　　　　 为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈　　 状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计　　　　　　　　　　 作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是　　　　　 ，则说明此种菌能够　　　　　　　　　　　 。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用　　　　　　　　 法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。

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某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置于经过________法灭菌处理的（填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。之后，将菌液涂布接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈________状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计________作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是，则说明此种菌能够________。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用________法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。

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(8分)某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取lg，置于经过＿＿＿＿＿＿＿法灭菌处理的＿＿＿＿（填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行＿＿＿＿＿＿＿＿处理。之后，将菌液涂布接种于以＿＿＿＿为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈＿＿＿＿状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是＿＿＿＿＿＿＿＿，则说明此种菌能够＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

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某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置于经过________法灭菌处理的________（填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进

行________处理。之后，将菌液涂布接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈________状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计 作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是________，则说明此种菌能够________。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采

用法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。

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某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，下列叙述不正确的是（　　 ）

A. 采样与培养: 称取1g土样置于刚配置的液体培养基中，30℃振荡培养

B. 接种：为避免培养液中菌体浓度过高，需经过系列稀释后接种

C. 选择：所用的固体培养基，作为唯一碳源的是淀粉

D. 筛选：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，出现透明圈的说明此种菌能分解淀粉

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某实验小组欲从土壤中筛选出能分解淀粉的芽孢杆菌。下列叙述不正确的是（　　　 ）

A．采样与培养：称量1 g土样置于灭菌后的固体培养基中，30 ℃振荡培养

B．接种：为避免培养液中菌体浓度过高，需经过系列稀释后接种

C．选择：所用的固体培养基，作为唯一碳源的是淀粉

D．筛选：将适量的碘液滴加到平板中，菌落周围出现透明圈说明此种菌能分解淀粉

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某实验小组欲从土壤中筛选出能分解淀粉的芽孢杆菌。下列叙述不正确的是（　　　 ）

A．采样与培养：称量1 g土样置于灭菌后的固体培养基中，30 ℃振荡培养

B．接种：为避免培养液中菌体浓度过高，需经过系列稀释后接种

C．选择：所用的固体培养基，作为唯一碳源的是淀粉

D．筛选：将适量的碘液滴加到平板中，菌落周围出现透明圈说明此种菌能分解淀粉

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某同学希望从土壤中分离能分解淀粉的微生物，设计了如下实验方案，请将其补充完整。

（1）土壤取样。

（2）配制选择培养基：配制以　　　　　　 为唯一碳源的固体培养基，用　　　　　　 法灭菌，倒平板备用。

（3）接种与选择：为避免样品中菌体浓度过高，需将培养液进行　　　　　　 处理。之后，采用　　　 　　 　　 法将处理后的菌液接种在上述培养基上，在适宜条件下培养48h。为了证明配制的培养基是否受到杂菌污染，可设置　　 　　　　　　 　　　　 作为对照组。

（4）筛选与纯化：将适量的　　　　　　　　 （指示剂）滴加在平板中，如果菌落周围出现　　　　　 　　　　　　 ，则说明此种菌能产生　　 　　　 　　　　 。

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（一）某同学为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了如下实验。并通过该实验成功筛选出了能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请回答：

（1）制备培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、_____________、分装、加塞、包扎、灭菌等。

（2）“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的_____________。用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因为__________________________。为检测能降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂，若存在，则菌落周围将形成_____________色环带。

（3）图中为将细菌转接到固体培养基上，应采用_____________法进行接种，获得单菌落后继续筛选。

（4）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_____________。

A.高压蒸汽灭菌　　 B.紫外灯照射　　 C.70%的酒精浸泡　　　 D.过滤

（二）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，下图中标注了在某质粒及某DNA片段上相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

（1）根据表中信息，Sau3A Ⅰ在该质粒上有____________个酶切位点。在将图中质粒和目的基因构建成重组质粒进程中，应从表中选爪的两种限制酶是______________________。

（2）若将BamHⅠ酶切的DNA末端与BcIⅠ酶切的DNA末端连接，对于该连接部位（_____）

A.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切开　　　　　　

B.BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切开

C.BamHⅠ酶能切开，BcIⅠ酶不能切　　　　

D.BamHⅠ酶不能切开，BcIⅠ酶能切开

（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过_______________酶作用后可形成重组质粒。若将该重组质粒导入大肠杆菌需用_______________处理大肠杆菌，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，应在培养基中添加_______________。

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某同学欲从被污染的土壤中采用富集培养的方法筛选出能高效降解原油的细菌，经过的一般步骤是采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定，实验过程如图所示，请分析回答：

（1）下面两组图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。

图A所示的接种方法是____________，图B所示的接种方法是_____________。

（2）在筛选过程中，应将__________接种于以___________为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于___________培养基。

（3）现有1L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释l03倍．各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到图A的三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则1L原土壤浸出样液中菌体数为_________。

（4）为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围透明带区域的大小．一般透明带区域越大说明该菌株降解原油的能力__________。

（5）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行_________，接种前要进行 ____________，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在___________条件下进行。

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