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【生物——选修3：现代生物科技专题】
神经营养因子（NTF）能促进神经元的存活和再生。已知NTF基因能得到克隆。回答下列问题：
（1）在体外，可通过PCR技术扩增NTF基因，该技术依据的原理是______________。为何保证PCR反应的进行，反应体系需要加入______________酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、______________等。在打开DNA双链时需要_______________________。
（2）将外源NTF基因导入受体细胞常用的方法是_____________，检测其是否已表达，可采用______________方法。
（3）与转基因工程菌相比，利用真核细胞作为受体得到的NTF才有生物活性，其原因可能是______________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】中国科学家成功将人肝再生增强因子( hALR)的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊，其乳汁含有hALR。请回答下列问题：
(1)从人的肝细胞中获取所有mRNA，并以此为模板反转录产生多种____片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做人的____文库，从该文库中获得hALR基因，这样获得的基因与人的肝细胞中的hALR基因相比____（有／没有）区别。
(2)得到hALR基因后，若要较快地得到大量的hALR基因，一般采用PCR技术扩增。扩增过程包括：目的基因解链为单链、_________、在____酶作用下延伸，如此重复循环。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，
请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向__________________。
(3)目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是转基因生物的DNA上是否_______。
(4)人的hALR基因能够在羊乳腺细胞表达出相同的hALR，说明所有生物________。
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【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第
泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的
与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
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（生物——选修3：现代生物科技专题）科研人员利用“基因敲除技术”敲除了新生小鼠心肌细胞中的GATA4基因，结果发现一个分泌型因子FGF16的表达水平降低，小鼠心脏丧失了再生能力，并出现了严重的心肌肥大现象。紧接着科研人员利用腺相关病毒载体AAV9，实现了在心肌细胞中“过表达”Fgfl6基因，发现心肌细胞恢复增殖能力，心肌肥大也受到一定的抑制。这项工作为心肌损伤修复和病理性心肌肥大的临床治疗提供了理论基础。请回答：
（1）“基因敲除”和“基因工程”技术所依赖的生物学原理是________________。
（2）腺相关病毒载体AAV9作为基因工程的工具，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有_____________、______________（答出两点即可）的条件。
（3）目的基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。已知限制性内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—。请画出目的基因被限制性内切酶I切割后所形成的黏性末端________________。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列是否有专一性要求？________________。
（4）定性的检测目的基因的“过表达”产物可采用_____________的方法。
（5）资料说明：_____________、基因与基因产物、基因与环境之间存在着复杂的相互作用，这种相互作用形成了一个错综复杂的网络，精细地调控的生物体的性状。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】科研人员利用“基因敲除技术”敲除了新生小鼠心肌细胞中的GATA4基因，结果发现一个分泌型因子FGF16的表达水平降低，小鼠心脏丧失了再生能力，并出现了严重的心肌肥大现象。紧接着科研人员利用腺相关病毒载体AAV9，实现了在心肌细胞中“过表达”Fgfl6基因，发现心肌细胞恢复增殖能力，心肌肥大也受到一定的抑制。这项工作为心肌损伤修复和病理性心肌肥大的临床治疗提供了理论基础。请回答：
（1）“基因敲除”和“基因工程”技术所依赖的生物学原理是________________。
（2）腺相关病毒载体AAV9作为基因工程的工具，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有_____________、______________（答出两点即可）的条件。
（3）目的基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。已知限制性内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—。请画出目的基因被限制性内切酶I切割后所形成的黏性末端________________。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列是否有专一性要求？________________。
（4）定性的检测目的基因的“过表达”产物可采用_____________的方法。
（5）资料说明：_____________、基因与基因产物、基因与环境之间存在着复杂的相互作用，这种相互作用形成了一个错综复杂的网络，精细地调控的生物体的性状。
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[生物——选修3:现代生物科技专题]
2018年1月25日，由中科院神经科学研究所团队克隆的猕猴“中中”和“华华”，登上了全球顶尖学术期刊《细胞》的封面，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代。回答下列问題：
（1）正常情况下，哺乳动物的受精过程主要包括:________，进入卵黄膜，原核形成和两个原核融合。
（2）哺乳动物的体外受精主要包括_______、_________等几个主要步骤。
（3）在体外受精前，要对精子进行获能处理。通常采用的体外获能方法有培养法和__________。
（4）在使用合成培养基培养早期胚胎时，通常还需加入_______等天然物质，并需要适时___，以清除代谢产物，防止代谢产物积累对早期胚胎造成危害。
（5）胚胎在受体内的存活的最可能的生理基础是______________。
（6）克隆猴成功后，人们不得不慎重考虑克隆人的问题，对于此问题，中国政府的态度是______。
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[生物—选修3：现代生物技术专题]
如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程：图2表示体外受精培育优质奶牛的过程：图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答下列问题：
（1）图1 中制备单克隆抗体的过程中，需要经过两次筛选，其中第二次筛选的目的是筛选出 。该过程所用到的生物技术有 。
（2）图2 参与体外受精的精子需要经过成熟和 的过程，才能是卵细胞受精，若要获得多头于此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的 均等分割后进行胚胎移植，以上技术是在 （填“体外”或“体内”）完成的。
（3）图3中过程③常用的试剂是 。融合的原生质体形成杂种细胞的标志是 ，该过程与细胞中 （细胞器）的活动密切相关。
（4）过程⑤和⑥分别表示 和 。
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【生物—选修3：现代生物科技专题】治疗性克隆是指把患者体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。请回答下列问题：
（1）ES细胞是胚胎干细胞的简称，在形态上，表现为 ：在功能上，具有发育的全能性。将重组胚胎在体外培养到____ 时期，从该时期的___ _中进行分离，从而获得ES细胞。
（2）在培养液中加入 可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞或器官，该过程研究的意义在于解决____问题。
（3）科学家将患者的体细胞核植入去核的卵母细胞中，而不是直接用体细胞进行细胞培养的原因是 。
（4）科学家将体外培养的ES细胞进行诱导使其定向分化为胰岛B细胞，并进行了胰岛素释放实验：控制培养液中___ _的浓度，检测细胞分泌的胰岛素的量，如图为实验结果，据此分析确认ES细胞诱导成功，得到此结论的依据是________。
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生物•选修3:现代生物科技专题
科研人员从一些荒漠植物中成功克隆抗旱功能基因培育出抗旱耐盐减和耐贫瘠能力明显的转基因紫花苜蓿新品系，它的研究成功对改良与利用大面积盐荒地、改善生态环境以及促进农牧业可持续发展具有现实意义。结合所学知回答下列问题：
（1）题目中说的“克隆”实际上指的是______________技术。
（2）获取目的基因后需要进行基因表达载体的构建，构建完成的表达载体中需含有启动子、终止子、复制原点、______________。
（3）紫花苜蓿为双子叶植物，常用的导入目的基因的方法是______________。
（4）对导入了基因表达载体的细胞进行组织培养。诱使细胞分化时需在无菌环境下进行，另外还要满足的条件为______________，若制备成人工种子，需培养得到______________后再包上人工薄膜。
（5）对于目的基因的检测与鉴定，可以进行分子水平的检测，三种检测方法分别有DNA分子杂交、_________、__________；若进行个体水平的检测，需将该植株栽培于______________环境中，以观察其生长状况。
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生物•选修3:现代生物科技专题
科研人员从一些荒漠植物中成功克隆抗旱功能基因培育出抗旱耐盐减和耐贫瘠能力明显的转基因紫花苜蓿新品系，它的研究成功对改良与利用大面积盐荒地、改善生态环境以及促进农牧业可持续发展具有现实意义。结合所学知回答下列问题：
（1）题目中说的“克隆”实际上指的是______________技术。
（2）获取目的基因后需要进行基因表达载体的构建，构建完成的表达载体中需含有启动子、终止子、复制原点、______________。
（3）紫花苜蓿为双子叶植物，常用的导入目的基因的方法是______________。
（4）对于目的基因的检测与鉴定，可以进行分子水平的检测，三种检测方法分别有DNA分子杂交、_______、________；若进行个体水平的检测，需将该植株栽培于___________环境中，以观察其生长状况。
（5）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：_______、________、________、_________。
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