【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第
泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的
与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
高三生物综合题中等难度题
【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第
泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的
与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。
（2）基因工程最核心的步骤是 。
（3）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。
（4）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
（5）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，正确的是_______。
A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
（6）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。
①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。
（2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。
（3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
（4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是_______（多选）。
A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
（5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。
①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 ．
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切．
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的．
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的 与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．
高三生物非选择题中等难度题查看答案及解析
胶质细胞分泌的神经营养因子（GDNF）对神经元有保护和修复作用。为研究高尔基体膜分选受体S对GDNF分泌的影响，研究者进行了实验。
（1）分泌蛋白一般通过两种途径被分泌到胞外：一种是不受外界影响持续的组成型分泌，另一种是受到生理刺激后产生的调节型分泌，如下图。
分泌蛋白的分泌过程与膜的________有关。M作为信号分子的________，其加工过程发生在________。
（2）研究者将受体S基因与GDNF基因均转入PC12细胞，构建了S基因过量表达的细胞系甲，并和仅转入GDNF基因的PC12细胞系乙进行比较，检测结果如下图。
据图可知，受体S对GDNF分泌的影响是________________。
（3）为验证上述结论，研究者将与S基因序列互补的小RNA（抑制S基因表达）导入到上述细胞系________中作为实验组，对照组导入________的RNA。与对照组相比，若实验组细胞的GDNF的调节型分泌量________，组成型分泌量________，则证明上述结论正确。
高三生物实验题中等难度题查看答案及解析
GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
高三生物单选题简单题查看答案及解析
GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
高三生物单选题简单题查看答案及解析
[生物——选修3：现代生物科技专题]癌胚抗原（CEA）是一种位于肿瘤细胞膜表面的蛋白，白细胞介素（IL-2）是一种淋巴因子。研究人员利用质粒plRES、CEA基因、IL-2基因，分别构建了重组质粒plRES-CEA、plRES-IL-2和plRES-CEA- IL-2。将实验小鼠分成6组，每隔5天进行一次肌肉注射，共3次。最后一次注射完成7天后，检测小鼠体内CEA含量、NK细胞（即自然杀伤细胞，可杀伤肿瘤细胞，而不破坏自身组织细胞）活性等指标，结果如下表。
请回答问题：
（1）构建重组质粒需要用到的工具酶有 。要保证重组质粒能够在细菌中大量扩增，重组质粒必须具有 。
（2）注射plRES-CEA- IL-2后，小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过 和 形成的。
（3）NK细胞的活性不依赖于抗原刺激，能自发地溶解多种肿瘤细胞和被病毒感染细胞，属于人体免疫的第 道防线。
（4）从实验结果看，第 组具有最好的特异性免疫效果。对比第3组和第 组结果可以说明IL-2有促进 的作用。
（5）第1，2，4组小鼠均可产生CEA抗体，各组之间无显著性差异，但与第3组、空载体及
空白对照组相比有显著性差异，说明 。
高三生物综合题困难题查看答案及解析
【生物——选修3：现代生物科技专题】
神经营养因子（NTF）能促进神经元的存活和再生。已知NTF基因能得到克隆。回答下列问题：
（1）在体外，可通过PCR技术扩增NTF基因，该技术依据的原理是______________。为何保证PCR反应的进行，反应体系需要加入______________酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、______________等。在打开DNA双链时需要_______________________。
（2）将外源NTF基因导入受体细胞常用的方法是_____________，检测其是否已表达，可采用______________方法。
（3）与转基因工程菌相比，利用真核细胞作为受体得到的NTF才有生物活性，其原因可能是______________。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析
[生物——选修3：现代生物科技专题]白细胞介素4(IL-4)是具有多种免疫学调节功能的细胞因子，临床及研究中需要大量高纯度的IL-4，以及其高效检测试剂。下图是利用单克隆抗体技术制备抗IL-4特异性抗体的过程。回答相关问题：
(1)在免疫系统组成中，IL-4属于 ___物质。研究人员从外周血中提取到IL-4蛋白分子的mRNA，将其反转录成_______ ，构建特定表达载体，利用工程菌获得用于临床及研究需要的高纯度的IL-4蛋白。
(2)图中所示的a培养瓶中培养的是______细胞，其与M细胞融合产生双核或多核细胞，再经________，进一步形成两个新的单核杂交细胞。
(3)b培养瓶所示过程中，要用特定的选择性培养基进行细胞筛选，得到的____细胞能在体外培养增殖生长。经b获得的细胞，还需要进行____。
(4)c培养瓶中培养的细胞是____的杂交瘤细胞。制备IL-4单克隆抗体的过程中，细胞培养瓶通常置于特定培养箱中进行细胞培养，要求培养瓶松盖，主要目的是____。
高三生物综合题中等难度题查看答案及解析