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[生物——选修3：现代生物科技专题]癌胚抗原（CEA）是一种位于肿瘤细胞膜表面的蛋白，白细胞介素（IL-2）是一种淋巴因子。研究人员利用质粒plRES、CEA基因、IL-2基因，分别构建了重组质粒plRES-CEA、plRES-IL-2和plRES-CEA- IL-2。将实验小鼠分成6组，每隔5天进行一次肌肉注射，共3次。最后一次注射完成7天后，检测小鼠体内CEA含量、NK细胞（即自然杀伤细胞，可杀伤肿瘤细胞，而不破坏自身组织细胞）活性等指标，结果如下表。
请回答问题：
（1）构建重组质粒需要用到的工具酶有 。要保证重组质粒能够在细菌中大量扩增，重组质粒必须具有 。
（2）注射plRES-CEA- IL-2后，小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过 和 形成的。
（3）NK细胞的活性不依赖于抗原刺激，能自发地溶解多种肿瘤细胞和被病毒感染细胞，属于人体免疫的第 道防线。
（4）从实验结果看，第 组具有最好的特异性免疫效果。对比第3组和第 组结果可以说明IL-2有促进 的作用。
（5）第1，2，4组小鼠均可产生CEA抗体，各组之间无显著性差异，但与第3组、空载体及
空白对照组相比有显著性差异，说明 。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]
癌胚抗原（CEA）是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症。回答下列问题。
（1）一般不直接用单个的B淋巴细胞培养形成细胞群的办法来生产单克隆抗体。原因是______。
(2)制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于________，能使小鼠产生免疫反应。
（3）杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可注射到小鼠_______内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是__________________。
(4)已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得融合细胞（一般只考虑细胞两两融合），并生产单克隆抗体。请回答：
①试管中除融合的杂种细胞外，还有_________________种融合细胞。
②设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。
方法：用_________________的培养液培养经融合诱导后的细胞，收集能增殖的细胞。
原理：____________________________________________________________________。
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癌胚抗原（CEA）是一种位于肿痛细胞膜表面的蛋白，白细胞介素（IL-2）是一种淋巴因子。研究人员利用质粒plRES、CEA基因、IL-2基因，分别构建了重组质粒plRES-CEA、plRES-IL-2和plRES-CEA- IL-2。将实验小鼠分成6组，每隔5天进行一次肌肉注射，共3次。最后一次注射完成7天后，检测小鼠体内CEA含量、NK细胞活性等指标，结果如下表。
| 第1组 | 第2组 | 第3组 | 第4组 | 第5组 | 第6组 |
| 注射物 | plRES-CEA- IL-2 | plRES-CEA | plRES-IL-2 | plRES-IL-2与plRES-CEA混合 | 空载体plRES | 空白 |
| CEA含量 | 0.889 | 0.689 | 0.455 | 0.863 | 0.413 | 0.088 |
| NK细 胞活性 | 0.395 | 0.389 | 0.397 | 0.397 | 0.387 | 0.091 |
| 淋巴细 脃数量 | 3.04 | 1.77 | 1.15 | 2.18 | 1.07 | 0.97 |
请回答问题：
（1）构建重组质粒需要用到的工具酶有 。要保证重组质粒能够在 中大量扩增，重组质粒必须具有 。
（2）注射plRES-CEA- IL-2后，小鼠体内产生的大量CEA是重组质粒中的目的基因经过 和
形成的。
（3）NK细胞的活性不依赖于抗原刺激，能自发地溶解多种肿痛细胞和被病毒感染细胞，属于人体免疫的第 道防线。
（4）从实验结果看，第 组具有最好的特异性免疫效果。对比第3组和第 组结果可以说明
IL-2有促进 的作用。
（5）第1，2，4组小鼠均可产生CEA抗体，各组之间无显著性差异，但与第3组、空载体及空白对照组相比有显著性差异，说明 。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
癌胚抗原（CEA）是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症。回答下列问题：
（1）制备CEA的单克隆抗体时，首选将 注入小鼠体内，使小鼠产生免疫反应。然后从产生免疫反应小鼠脾脏中获取 细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，该融合过程所利用的基本原理是 ，因为融合率不是100%，且融合过程具有 性，所以要对融合后的细胞进行筛选，筛选出的杂交瘤细胞还要经过多次筛选，最终获得 （答两个特点）的杂交瘤细胞。
（2）获得杂交瘤细胞后，将其注射到小鼠腹腔内增殖成 ，之后从中提取大量CEA抗体。CEA单克隆抗体具有的三个主要优点是 。
（3）CEA单克隆抗体与抗癌药物偶联后，可以使抗癌药物定向作用于癌细胞，该过程所利用的免疫学原理为 。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】白细胞介素—2（IL—2），在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。传统生产方法成本高、产量低，获得的IL—2在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题：
（1）利用基因工程生产IL—2，过程是：
①从健康人体外周静脉血分离能合成IL—2的免疫细胞，从中提取_______________，经逆转录获取目的基因，此过程需要的原料是_______________。
②用限制酶处理载体和目的基因后，用DNA链接酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是_____________。该步骤是基因操作的核心，称为_____________。
③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用Ca2+处理，使其成为_____________，再在一定温度下完成转化。
④在培养液中培养一段时间后，经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用_____________技术。
（2）利用蛋白质工程对IL—2进行改造，基本途径是：
预期蛋白质功能→_____________→_____________→找到对应的脱氧核苷酸序列。
（3）利用细胞工程生产IL—2，思路是：
将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选出______细胞，经细胞培养可获得大量IL—2。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
人外周血单核细胞能合成白介素2(IL～2)。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL－2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL－2生理功能、且不易降解的IL－2－HSA融合蛋白。其技术流程如图。请回答下列问题。
(1)培养人外周血单核细胞需要无菌、无毒的环境，为防止培养过程中的污染，通常要在细胞培养液中添加一定量的_____；为保证营养充足，通常要在细胞培养液中添加_____；除提供适宜培养温度和pH外，还需适宜气体环境，通常将培养皿置于含_____的混合气体培养箱中进行培养。
(2) 图中②表示________过程，图中③表示________过程。
(3) 表达载体1中的位点________，应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL－2蛋白对应的碱基序列不能含有________(起始、终止)密码子，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白。
(4)应用____________杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白。IL－2－HSA融合蛋白从酵母菌细胞中排出，需要酵母菌细胞中_________（细胞器）的加工。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]白细胞介素4(IL-4)是具有多种免疫学调节功能的细胞因子，临床及研究中需要大量高纯度的IL-4，以及其高效检测试剂。下图是利用单克隆抗体技术制备抗IL-4特异性抗体的过程。回答相关问题：
(1)在免疫系统组成中，IL-4属于 ___物质。研究人员从外周血中提取到IL-4蛋白分子的mRNA，将其反转录成_______ ，构建特定表达载体，利用工程菌获得用于临床及研究需要的高纯度的IL-4蛋白。
(2)图中所示的a培养瓶中培养的是______细胞，其与M细胞融合产生双核或多核细胞，再经________，进一步形成两个新的单核杂交细胞。
(3)b培养瓶所示过程中，要用特定的选择性培养基进行细胞筛选，得到的____细胞能在体外培养增殖生长。经b获得的细胞，还需要进行____。
(4)c培养瓶中培养的细胞是____的杂交瘤细胞。制备IL-4单克隆抗体的过程中，细胞培养瓶通常置于特定培养箱中进行细胞培养，要求培养瓶松盖，主要目的是____。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]白细胞介素4(IL-4)是具有多种免疫学调节功能的细胞因子，临床及研究中需要大量高纯度的IL-4，以及其高效检测试剂。下图是利用单克隆抗体技术制备抗IL-4特异性抗体的过程。回答相关问题：
(1)在免疫系统组成中，IL-4属于 ___物质。研究人员从外周血中提取到IL-4蛋白分子的mRNA，将其反转录成_______ ，构建特定表达载体，利用工程菌获得用于临床及研究需要的高纯度的IL-4蛋白。
(2)图中所示的a培养瓶中培养的是______细胞，其与M细胞融合产生双核或多核细胞，再经________，进一步形成两个新的单核杂交细胞。
(3)b培养瓶所示过程中，要用特定的选择性培养基进行细胞筛选，得到的____细胞能在体外培养增殖生长。经b获得的细胞，还需要进行____。
(4)c培养瓶中培养的细胞是____的杂交瘤细胞。制备IL-4单克隆抗体的过程中，细胞培养瓶通常置于特定培养箱中进行细胞培养，要求培养瓶松盖，主要目的是____。
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（生物——选修3现代生物科技专题）
紫杉醇是一种具有抗癌活性的化合物，为了迅速高效地分离、纯化紫杉醇，实验小组以紫杉醇为抗原免疫小鼠，取免疫小鼠的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，并经过筛选获得能稳定分泌紫杉醇单克隆抗体的杂交瘤细胞，回答下列问题：
（1）紫杉醇单克隆抗体的获得所涉及的生物技术手段有____________________，该实例说明单克隆抗体具有______________________的优点。
（2）免疫小鼠和骨髓瘤细胞融合后产生多种杂交细胞，为了获得杂交瘤细胞应用特定的__________进行筛选，然后通过专一抗体检测阳性和克隆化培养获得___________的杂交瘤细胞。
（3）若要体内培养杂交瘤细胞，可将杂交瘤细胞注入小鼠的___________，若要在体外培养液中培养杂交瘤细胞，需要将培养液放置在95%的空气和5%的C02培养箱中培养，其中C02的作用是___________。
（4）紫杉醇是红豆杉产生的一种代谢产物，欲利用植物组织培养获得大量的紫杉醇，应将红豆杉的外植体培育到___________阶段，原因是_________________________________。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，为预防乙肝开辟了一条新途径。请回答下列问题：
（1）获得乙肝病毒表面抗原基因后，常利用_________________技术进行扩增。把基因转入农杆菌内时常用_________________处理农杆菌，使之成为感受态细胞。
（2）使用农杆菌将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可将乙肝病毒表面抗原基因转移至草莓细胞中的_________________上。目的基因进入草莓细胞内并在草莓细胞内维持稳定和表达，这个过程称为_________________。
（3）在基因工程操作过程中，需要用_________________酶和_________________酶构建基因表达载体，基因表达载体要有_________________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。
（4）在分子水平上，可采用_______________的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。
空白对照组相比有显著性差异，说明 。