GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
高三生物单选题简单题
GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
高三生物单选题简单题
GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
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GDNF是一种神经营养因子，研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），经筛选得到的载体主要有三种。为鉴定这3种连接方式，选择限制性核酸内切酶对筛选的载体进行酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。若图2中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的，则鉴定时所选的限制性核酸内切酶是（ ）
A.XhoI B.HpaI和BamHI C.HpaI和XhoI D.BamHI和XhoI
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【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第
泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的
与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
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GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。
（2）基因工程最核心的步骤是 。
（3）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。
（4）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
（5）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，正确的是_______。
A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
（6）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。
①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp
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GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。
（2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。
（3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
（4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是_______（多选）。
A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
（5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。
①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp
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GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 ．
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切．
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的．
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的 与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行 培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．
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胶质细胞分泌的神经营养因子（GDNF）对神经元有保护和修复作用。为研究高尔基体膜分选受体S对GDNF分泌的影响，研究者进行了实验。
（1）分泌蛋白一般通过两种途径被分泌到胞外：一种是不受外界影响持续的组成型分泌，另一种是受到生理刺激后产生的调节型分泌，如下图。
分泌蛋白的分泌过程与膜的________有关。M作为信号分子的________，其加工过程发生在________。
（2）研究者将受体S基因与GDNF基因均转入PC12细胞，构建了S基因过量表达的细胞系甲，并和仅转入GDNF基因的PC12细胞系乙进行比较，检测结果如下图。
据图可知，受体S对GDNF分泌的影响是________________。
（3）为验证上述结论，研究者将与S基因序列互补的小RNA（抑制S基因表达）导入到上述细胞系________中作为实验组，对照组导入________的RNA。与对照组相比，若实验组细胞的GDNF的调节型分泌量________，组成型分泌量________，则证明上述结论正确。
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科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人 凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。
(1)要想目的基因只在乳腺组织中表达，在构建基因表达载体A 时,需要将_________基因和__________等调控组件重组在一起。
(2)将A导入绵羊胎儿成纤维细胞中常用的方法是__________。将 A 导入受精卵能否获得转基因绵羊？ ______ ，判断依据是________________.
(3)核移植的受体应选用__________期卵母细胞?。
(4)移植应选择胚胎发育到________阶段时进行;转基因绵羊的性状基本上与代孕母羊无关的原因是__________.
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转基因克隆猪已经在我国培育成功。研究组首先从猪胎儿皮肤中分离出纤维细胞，进行体外培育。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将基因纤维细胞进行体细胞克隆。接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪。请回答：
（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的 ，以防止培养过程的污染，此外，应定期更换 ，防止 对细胞自身造成危害。
（2）筛选转基因细胞时，需要利用基因表达载体中 的作用。
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集 ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞注入到 中 ，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎。
（4）为了 ，可以对处于 阶段的胚胎进行均等分割。将重组胚胎移入到受体子宫中，由于受体子宫不会对外来胚胎发生 ，并能与之建立正常的生理和组织上的联系，因次，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪。
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[生物—选修3；现代生物科技专题]
转基因克隆猪已经在我国培育成功．研究组首先从猪胎儿皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养．通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆．接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪．请回答：
（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的 ，以防止培养过程的污染．此外，应定期更换 ，防止 对细胞自身造成危害。
（2）基因工程中常用的运载体有 ，在基因工程中需要用到的工具酶是 ，筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的标记基因，标记基因的作用是 。
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集 ，并在体外培养成熟．然后将转基因纤维细胞注入到 中，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎。检测目的基因是否整合到纤维细胞DNA分子上可采用 。
（4）为了提高 ，可以对处于 阶段的胚胎进行均等分割．将重
组胚胎移入到受体子宫后，由于受体子宫不会对外来胚胎发生免疫排斥反应，并能与之建立正常的 上的联系，因此，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪。
（5）生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡．这最主要体现了生态工程的 原理（只填一项）。
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