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中国科学家成功将肝再生增强因子（hALR）的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊,其乳汁含有hALR。回答下列问题：
（1）在体外,可通过PCR技术扩增hALR基因,该技术依据的原理是 。为了保证PCR反应的进行,反应体系需要加入耐高温 酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、 等。
（2）将外源hALR基因导入乳腺上皮细胞常用的方法是 ，检测其染色体上是否整合了hALR基因,可采用 技术；将乳腺上皮细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,对受体卵母细胞的处理是 。
（3）与转基因工程菌（大肠杆菌）相比,利用羊乳腺生产出的hALR有生物活性，其原因可能是 。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】中国科学家成功将人肝再生增强因子( hALR)的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊，其乳汁含有hALR。请回答下列问题：
(1)从人的肝细胞中获取所有mRNA，并以此为模板反转录产生多种____片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做人的____文库，从该文库中获得hALR基因，这样获得的基因与人的肝细胞中的hALR基因相比____（有／没有）区别。
(2)得到hALR基因后，若要较快地得到大量的hALR基因，一般采用PCR技术扩增。扩增过程包括：目的基因解链为单链、_________、在____酶作用下延伸，如此重复循环。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，
请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向__________________。
(3)目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是转基因生物的DNA上是否_______。
(4)人的hALR基因能够在羊乳腺细胞表达出相同的hALR，说明所有生物________。
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利用基因工程技术，将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出转基因羊。人的凝血因子只存在于转基因羊的乳汁中。下列相关分析、推断中，正确的是（ ）
A.人凝血因子基因只存在于转基因羊的乳腺细胞中
B.限制性核酸内切酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶
C.可用含抗生素的培养基检测目的基因是否导入人体细胞
D.目的基因与运载体依据基因重组原则连接成重组 DNA
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内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
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组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，现欲利用基因工程技术将tPA基因导入奶牛成纤维细胞中，并通过核移植技术获得克隆转基因奶牛，最后从奶牛乳汁中获取组织型纤溶酶原激活剂。请回答：
（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到______________上，通过大肠杆菌培养扩增。构建重组DNA分子时，需要用到的工具酶有__________________________，为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有________。
（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控__________发育的作用。通过__________技术,将重组细胞培养成早期囊胚。将早期囊胚移植到代孕受体之前需要经过__________处理，以便成功植入或着床。
（3）为了繁殖更多后代，可以通过胚胎分割技术，产生同卵多仔。下列关于该技术的叙述,错误的是_____。
A.增加胚胎数量，快速繁殖
B.可以采用相关酶处理卵裂球
C.该技术涉及显微操作技术
D.同卵多仔的表现型一定相同
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继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
(1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是___________。
(2)在基因工程中，将目的基因与运载体结合时必须用___________酶。进行基因转移时，通常要将外源基因转入____________中，原因是____________。
(3)通常采用_______________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
(4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞_____________中特异表达。
(5)为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的_______________细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为________________。
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继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
(1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞中，常用方法是________。
(2)进行基因转移时，通常要将外源基因转入________中，原因是
________________________________________________________________________。
(3)通常采用________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
(4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的________细胞中特异表达。
(5)为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的________转入________细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为________。
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资料甲：某种细菌体内有抗虫基因，该基因能指导抗虫毒蛋白的合成。我国科学家成功地将该抗虫基因导入棉花细胞中，培育出了抗虫效果好的棉花新品种。
资料乙：研究表明，抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，科学家利用小鼠制备出了抗H蛋白的单克隆抗体。
请回答下列问题：
（1）资料甲中，获取抗虫基因时可使用EcoRI，其原因是含抗虫基因的DNA片段中含有 。向棉花细胞导入抗虫基因时，我国科学家采用了 法。抗虫基因导入棉花细胞后，为确定棉花植株是否具有抗虫特性以及抗性的程度如何，需要做 实验进行个体水平的鉴定。
（2）资料乙中，选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织细胞中
（填“低表达”或“高表达”）。将H蛋白注射到小鼠体内，从该小鼠的脾脏中获得相应的B淋巴细胞，将其与骨髓瘤细胞进行融合，细胞融合利用的原理是 。与植物原生质体融合过程相比，该融合过程特有的诱导方法是 。在杂交瘤细胞的体外培养过程中，培养液中是否需要添加血清 （填“需要”或“不需要”）；培养箱中充入5% CO2的主要作是 。为避免培养过程中代谢产物对杂交瘤细胞的毒害，常采取的措施是 。
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内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊 发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
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培育乳汁中含有人凝血因子IX医用蛋白的二倍体转基因绵羊的简易流程如图所示。请回答下列有关问题：
（1）图中①表示_____________的过程，为了使目的基因在转基因绵羊的乳腺细胞中成功表达，需将人凝血因子Ⅸ基因与___________等调控组件重组在一起，且使目的基因的位置处于______________________。
（2）重组细胞的细胞核来自______________________。为了获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，___________（填“能”或“不能”）使用胃蛋白酶处理绵羊组织块，理由是______________________。
（3）③过程中，采取___________的方法促使重组细胞的形成。
（4）④过程所用培养液的成分比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加___________（答出三种即可）。
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